ABI3100簡介及其常見問題解析課件

ABI3100簡介

及

其常見問題解析姜艷艷2007.3.9ABI3100簡介

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1主要內(nèi)容ABI遺傳分析儀簡介ABI3100相關(guān)簡介ABI3100構(gòu)造及毛細管工作原理數(shù)據(jù)收集軟件的簡介數(shù)據(jù)分析軟件的簡介常見問題解析主要內(nèi)容ABI遺傳分析儀簡介2一.ABI遺傳分析儀系列ABI測序儀和遺傳分析儀系列：

377DNA測序儀

所采用的是板膠最多可同時檢測96個樣品，要人工手動上樣。采用Genescan和Genotyper進行分析。一.ABI遺傳分析儀系列所采用的是板膠3310遺傳分析儀采用一道的毛細管進行電泳。一支注射器注膠不能使用96孔板,使用48或96孔的模塊，0.5ml的離心管上樣。所使用的軟件及設(shè)置與377比較相像。310遺傳分析儀采用一道的毛細管進行電泳。43100和3100Avant基因分析儀3100為16道毛細管3100Avant為4道毛細管使用96孔板或384孔板進行電泳使用注射器將膠注入毛細管，且有兩支注射器3100和3100Avant基因分析儀3100為16道毛細53130和3130xl基因分析儀

3130為四道，3130xl為16道。從膠瓶中自動吸膠注入毛細管。軟件方面與3100基本相同。3130和3130xl基因分析儀3130為四道，363730和3730xl基因分析儀3730為48道毛細管3730XL為96道毛細管的其他與3130基本相同3730和3730xl基因分析儀3730為48道毛細管7型號毛細管狀態(tài)膠的狀態(tài)備注377無聚丙稀酰胺凝膠使用板膠，人工上樣3101根POP-6和POP-4注射器自動灌膠3100Avant4根POP-6和POP-4

310016根POP-6和POP-4

31304根POP-6和POP-4自動排氣泡，灌膠3130xl16根POP-6和POP-4

373048根POP-6和POP-4

3730xl96根POP-6和POP-4

主要性能參數(shù)：型號毛細管狀態(tài)膠的狀態(tài)備注377無聚丙稀酰胺凝膠使用板膠，人8二.ABI3100構(gòu)造及毛細管工作原理二.ABI3100構(gòu)造及毛細管工作原理91.結(jié)構(gòu)圖250μl1.結(jié)構(gòu)圖250μl10ABI3100簡介及其常見問題解析課件11此圖表示的是：氣泡沒有排出通道。此圖表示的是：氣泡沒有排出通道。12注意96孔板的使用。3100是16道的，每個run使用兩排孔。若是4道的則是每個run4孔，注意與樣品名的對應(yīng)。310是單道的毛細管，不能使用96孔板，而是使用0.5ml的離心管上樣。注意96孔板的使用。3100是16道的，每個r13陽極有電極插在buffer中陰極沒有電極，而是在毛細管外包裹著一層金屬，插在buffer中。與3100不同，310在毛細管旁邊有一根金屬電極插在buffer中。2.毛細管工作原理毛細管兩端：陽極有電極插在buffer中陰極沒有電極，而是在毛細管外包裹14電滲流：pH大于6時，石英帶負電荷，熔融的石英毛細管內(nèi)層帶負電，來自毛細管內(nèi)的溶液的正電荷產(chǎn)生電滲流，沿負電荷的毛細管壁形成雙層，在電場作用下，雙層中的陽離子向陰極移動，帶動可溶分子向同一方向移動。

為保證DNA片段分離的重復(fù)性，必須包埋毛細管內(nèi)壁以除去電滲流，ABI3100采用能進行DNA分離的POP-4或POP-6膠線性包埋毛細管內(nèi)壁，阻止電滲流，使DNA從陰極到陽極沒有液體的流動。毛細管的包埋使之隨著時間而性能有所降低，影響使用壽命。電泳：電滲流：pH大于6時，石英帶負電荷，熔融的石英15檢測：一束激光被分成兩束從毛細管的兩側(cè)同時照亮16根毛細管，當DNA片段經(jīng)過檢測室時，所帶熒光染料被激發(fā)，熒光被檢測到，形成膠圖。

檢測：16ABI3100簡介及其常見問題解析課件17三.數(shù)據(jù)收集軟件的簡介1.開關(guān)機器順序：電腦，3100機器，收集軟件（關(guān)機相反）三.數(shù)據(jù)收集軟件的簡介18ABI3100簡介及其常見問題解析課件192.空間校正空間校正表明在CCD上呈現(xiàn)每一根毛細管發(fā)出熒光的正確位置，而不反應(yīng)毛細管的任何信息。更換毛細管，毛細管的被拆卸安裝后時要進行空間校正。2.空間校正20ABI3100簡介及其常見問題解析課件213.光譜校正

是為了校正熒光染料發(fā)射光譜的重疊，可以消除不同熒光染料間的相互影響。以下情況必需做校正：機器使用了新的dyeset，激光器或CCD更換，結(jié)果不好有pullup，pulldown的峰。3.光譜校正22進行光譜校正遵循以下步驟新建Pvrotocol進行光譜校正遵循以下步驟23新建plate新建plate24注意：進行光譜校正時應(yīng)注意，4道的毛細管和16道甚至更多道的毛細管在檢測靈敏度上明顯不同，毛細管少靈敏度會明顯高一些，這里忽略毛細管使用次數(shù)的影響。注意：進行光譜校正時應(yīng)注意，4道的毛細管和16道甚至更多道的25校正不好的實例：1.軟件提示：Insufficientnumberofdyespectradetected!Checkrawdata...表現(xiàn)：（1）實際原因：泳道沒有收集到信號，即沒有檢測到目的峰，或目的峰信號過低，低于750rfu。解決方案：如有必要重新校正則減少與甲酰胺的比例，或增大進樣時間。校正不好的實例：1.軟件提示：Insufficient26（2）實際原因：引物峰過高，檢測范圍包括引物峰部分。解決方案：調(diào)整檢測范圍到引物峰之后，包括所有目的峰。（2）實際原因：引物峰過高，檢測范圍包括引物峰部分。272.軟件提示：Saturateddatadetected.Calibrationfailed.表現(xiàn)：實際原因：氣泡引起的峰使信號達到飽和，顯示不通過。解決方案：盡量保證膠及通道中沒有氣泡。（下圖是放大圖）2.軟件提示：Saturateddatadetecte283.軟件提示：Baddyeorderdetected.表現(xiàn)：實際原因：引物峰過高，檢測范圍包括引物峰部分。解決方案：調(diào)整檢測范圍到引物峰之后，包括所有目的峰。3.軟件提示：Baddyeorderdetected294.軟件提示：Failedqualitycheck:q=0.93807islessthanminQthreshold(0.95000)表現(xiàn)：實際原因：各顏色之間引起的putup和putdown峰導(dǎo)致Q值低于設(shè)定值。解決方案：權(quán)宜之計是降低Q值設(shè)定值，徹底解決就是重新生產(chǎn)matrix。4.軟件提示：Failedqualitycheck:304.檢測樣品目前檢測樣品是marker0.2μl，上樣量1.0μl，總體積10μl樣品的準備：甲酰胺與marker混合均勻分裝，加入樣品后振蕩，離心，95℃變性5min，冰浴3min，離心，上樣。4.檢測樣品31ABI3100簡介及其常見問題解析課件32ABI3100簡介及其常見問題解析課件33ABI3100簡介及其常見問題解析課件345.結(jié)果的存儲先在“我的電腦”的E盤上建一個文件夾用于儲存結(jié)果，在數(shù)據(jù)收集軟件中有可以進行設(shè)定。5.結(jié)果的存儲35ABI3100簡介及其常見問題解析課件36ABI3100簡介及其常見問題解析課件37結(jié)果的重新導(dǎo)出：結(jié)果可以重新導(dǎo)出，或?qū)⑺枰牟糠纸Y(jié)果重新導(dǎo)出到指定文件夾。結(jié)果的重新導(dǎo)出：386.手動控制注意：手動控制oven時要“send”兩次，一次設(shè)定溫度一次打開oven。6.手動控制注意：手動控制oven時要“send”兩次，一次39四.數(shù)據(jù)分析軟件的簡介應(yīng)用GeneMapper進行數(shù)據(jù)的分析，下面進行簡單的介紹。1.Panel及bin的導(dǎo)入

四.數(shù)據(jù)分析軟件的簡介應(yīng)用GeneMapper進行數(shù)據(jù)的分析40ABI3100簡介及其常見問題解析課件41ABI3100簡介及其常見問題解析課件42ABI3100簡介及其常見問題解析課件432.分析數(shù)據(jù)添加要分析的文件夾：2.分析數(shù)據(jù)44panelSizestandardpanelSizestandard45AnalysismethodAnalysismethod46分析后如果如下圖所示：不通過，查找原因。分析后如果如下圖所示：不通過，查找原因。47查看原始數(shù)據(jù)：查看原始數(shù)據(jù)：48查看內(nèi)標：查看內(nèi)標：49結(jié)果所得圖形：結(jié)果所得圖形：50分析工具欄：→分析工具欄：→51ABI3100簡介及其常見問題解析課件52ABI3100簡介及其常見問題解析課件53常見問題的解析1.所有毛細管沒有數(shù)據(jù)原因：毛細管或block通路中有氣泡沒有樣品進入自動進樣器不在正確位置，使毛細管頭吸入氣泡或接觸不到樣品措施：重新正確上樣，排氣泡，拆毛細管清洗block，syring，更換膠常見問題的解析1.所有毛細管沒有數(shù)據(jù)542.個別毛細管無信號原因：自動進樣器不在正確位置（用20μl樣品試驗）樣品管是中空的（離心）毛細管有彎曲或有損壞（更換毛細管）2.個別毛細管無信號553.信號過飽和原因：上樣量過大（稀釋樣品，減少進樣時間）3.信號過飽和564.信號過低表現(xiàn)為信號很弱，內(nèi)標只有幾十rfu。原因：甲酰胺質(zhì)量不高使用的水中鹽離子濃度過高（更換超純水）沒有足夠的樣品（增加上樣量，校正自動進樣器）樣品稀釋倍數(shù)過大混合的不充分（充分混合，離心）自動進樣器不在最佳位置4.信號過低575.基線不平，峰形明顯異常原因：膠中可能有污染物（清洗block，syring，更換膠）膠中有結(jié)晶或沉淀物（將膠在室溫放置30min使之達到室溫，旋動使沉淀物溶解）光譜校正的不好5.基線不平，峰形明顯異常586.信號凌亂，有倒峰原因：所選的dyeset不適合光譜校正的不好6.信號凌亂，有倒峰597.無電流或電流異常原因：使用的水質(zhì)量不好（更換超純水）buffer槽中是水或buffer稀釋的倍數(shù)不對陽極沒有足夠的bufferblock或毛細管中有氣泡（排氣泡）膠已失效整個體系中有泄漏的地方

7.無電流或電流異常608.小于100runs毛細管檢測結(jié)果不好原因：樣品本身不好甲酰胺質(zhì)量不好buffer稀釋的倍數(shù)不對9.檢測的結(jié)果異常，移動的快或慢原因：注射器中有水導(dǎo)致膠被稀釋block或膠中有大氣泡整個體系中有泄漏的地方甲酰胺的質(zhì)量不好

8.小于100runs毛細管檢測結(jié)果不好6110.有一根毛細管電泳時背景有熒光，導(dǎo)致基線不平，影響結(jié)果。原因：毛細管中有污染物，會隨電泳次數(shù)增多逐漸消失。處理辦法：不加甲酰胺，每次加10μl的蒸餾水，電泳幾次。10.有一根毛細管電泳時背景有熒光，導(dǎo)致基線不平，影響結(jié)果6211.每次電泳時并不是全部泳道信號都很好信號弱或無信號的泳道主要集中在兩端解決方法：換成20μl體系試試，調(diào)整自動進樣器尤其是Z軸。連續(xù)多次上樣看是否是某根固定毛細管，或者是毛細管有題?；蛟S與所用的96孔板有關(guān)，更換96孔板。11.每次電泳時并不是全部泳道信號都很好解決方法：換6312.泳道中間基線明顯形成一個臺階說明：屬于正?，F(xiàn)象。可能是樣品中有一些物質(zhì)導(dǎo)致的，與樣品的純度有關(guān)，但并不影響判型。分析樣品是會計算調(diào)整基線。12.泳道中間基線明顯形成一個臺階說明：屬于正?，F(xiàn)象。6413.電泳導(dǎo)致大片段峰形變寬說明：屬于正?，F(xiàn)象，是電泳的一個特點。與電泳時片段大小有關(guān)，隨著時間的推移片段越來越大，所形成的峰變寬。注：電泳時膠圖注：分析時圖像13.電泳導(dǎo)致大片段峰形變寬說明：屬于正常現(xiàn)象，是電泳的一6514.電泳時易出現(xiàn)尖銳的四種顏色都有的峰（多顯示為紅色）說明：膠中有氣泡，離子，雜質(zhì)顆粒或其他有機物不透光，發(fā)生全反射導(dǎo)致的。解決方案：灌膠前放置室內(nèi)半小時平衡室溫，離心，注意排凈氣泡，注意環(huán)境的潔凈程度，注意操作，以減少雜質(zhì)進入。14.電泳時易出現(xiàn)尖銳的四種顏色都有的峰（多顯示為紅色）說6615.電泳時出現(xiàn)目的片斷以外的其他雜峰原因：主要原因是甲酰胺質(zhì)量不好，或者是甲酰胺長期在4度放置有降解。解決方案：更換質(zhì)量好的甲酰胺。（確定不是擴增產(chǎn)物。）15.電泳時出現(xiàn)目的片斷以外的其他雜峰原因：主要原因是甲酰6716.出現(xiàn)電泳峰說明：所出現(xiàn)的尖銳的小峰實際上是四種顏色都有的，位置不固定，雜亂無章，內(nèi)標中相對明顯，影響分析結(jié)果。當室溫過高時明顯會增多，可能是膠中有氣泡，受熱膨脹，易形成。嚴重影響分析結(jié)果的建議重新電泳。16.出現(xiàn)電泳峰說明：所出現(xiàn)的尖銳的小峰實際上是四種顏色都有6816.其他常見的電泳不好的現(xiàn)象說明：內(nèi)標峰值很低，樣品峰值低不能作為擴增不好的依據(jù)。需要重新上樣以確定原因。16.其他常見的電泳不好的現(xiàn)象說明：內(nèi)標峰值很低，樣品峰69說明：內(nèi)標并不均勻，大片段明顯變低，可見是電泳結(jié)果不好，樣品的峰形不能作為擴增好壞的依據(jù)，需要重新上樣來確定。說明：內(nèi)標并不均勻，大片段明顯變低，可見是電泳結(jié)果不好，樣品70說明：可見所有峰的峰形異常，不能正確進行分型，是電泳異常的表現(xiàn)，需重新上樣。說明：可見所有峰的峰形異常，不能正確進行分型，是電泳異常的表71說明：變性不完全現(xiàn)象。更換質(zhì)量好的甲酰胺，在上樣前變性95°C3min說明：變性不完全現(xiàn)象。更換質(zhì)量好的甲酰胺，在上樣前變性95°72說明：如果校正時跑出如圖的峰型，是電泳現(xiàn)象，與產(chǎn)品質(zhì)量無關(guān)。更換質(zhì)量好的甲酰胺，重新進行校正。說明：如果校正時跑出如圖的峰型，是電泳現(xiàn)象，與產(chǎn)品質(zhì)量無關(guān)。73說明：上圖現(xiàn)象是電泳中出現(xiàn)的現(xiàn)象，在校正正常且多數(shù)通過情況下，更換質(zhì)量好的甲酰胺，上樣前變性，重新電泳。與產(chǎn)品質(zhì)量無關(guān)說明：上圖現(xiàn)象是電泳中出現(xiàn)的現(xiàn)象，在校正正常且多數(shù)通過情況下74總體說明：檢測結(jié)果不好時，對照現(xiàn)象查找原因，主要要注意：使用超純水有足夠的buffer，且稀釋倍數(shù)正確保證block通路中沒有氣泡，如需要請儀器負責人解決加入適量樣品如要加微量則有必要稀釋，進樣時間要適當，如不能更改則調(diào)整上樣量，使峰高在1000-3000rfu左右。使用96孔板上樣時如樣品太多又復(fù)雜則應(yīng)事先寫好記錄，加樣后振蕩，離心變性后立即冰浴3min注意毛細管的使用次數(shù)（在instrumentprotocol處可見），注意毛細管不要脫離buffer超過30min如有離子影響結(jié)果，可用水上樣試一次

總體說明：75其它注意事項：16道毛細管每個run約用膠50μl，注意在整板上樣時查看膠夠不夠。做陽性對照和陰性對照。如所提的DNA濃度大，做PCR時適量少加入模板，防止產(chǎn)物量過大影響電泳。每個run加ladder用于分析時校正bin。實驗進行過程中不要一陳不變的遵循操作手冊，而是要觀察結(jié)果，調(diào)整內(nèi)標及l(fā)adder的使用量。（內(nèi)標高度控制在200rfu左右，ladder控制在和內(nèi)標相當?shù)母叨龋┢渌⒁馐马棧?6謝謝大家謝謝大家77ABI3100簡介

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其常見問題解析姜艷艷2007.3.9ABI3100簡介

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78主要內(nèi)容ABI遺傳分析儀簡介ABI3100相關(guān)簡介ABI3100構(gòu)造及毛細管工作原理數(shù)據(jù)收集軟件的簡介數(shù)據(jù)分析軟件的簡介常見問題解析主要內(nèi)容ABI遺傳分析儀簡介79一.ABI遺傳分析儀系列ABI測序儀和遺傳分析儀系列：

377DNA測序儀

所采用的是板膠最多可同時檢測96個樣品，要人工手動上樣。采用Genescan和Genotyper進行分析。一.ABI遺傳分析儀系列所采用的是板膠80310遺傳分析儀采用一道的毛細管進行電泳。一支注射器注膠不能使用96孔板,使用48或96孔的模塊，0.5ml的離心管上樣。所使用的軟件及設(shè)置與377比較相像。310遺傳分析儀采用一道的毛細管進行電泳。813100和3100Avant基因分析儀3100為16道毛細管3100Avant為4道毛細管使用96孔板或384孔板進行電泳使用注射器將膠注入毛細管，且有兩支注射器3100和3100Avant基因分析儀3100為16道毛細823130和3130xl基因分析儀

3130為四道，3130xl為16道。從膠瓶中自動吸膠注入毛細管。軟件方面與3100基本相同。3130和3130xl基因分析儀3130為四道，3833730和3730xl基因分析儀3730為48道毛細管3730XL為96道毛細管的其他與3130基本相同3730和3730xl基因分析儀3730為48道毛細管84型號毛細管狀態(tài)膠的狀態(tài)備注377無聚丙稀酰胺凝膠使用板膠，人工上樣3101根POP-6和POP-4注射器自動灌膠3100Avant4根POP-6和POP-4

310016根POP-6和POP-4

31304根POP-6和POP-4自動排氣泡，灌膠3130xl16根POP-6和POP-4

373048根POP-6和POP-4

3730xl96根POP-6和POP-4

主要性能參數(shù)：型號毛細管狀態(tài)膠的狀態(tài)備注377無聚丙稀酰胺凝膠使用板膠，人85二.ABI3100構(gòu)造及毛細管工作原理二.ABI3100構(gòu)造及毛細管工作原理861.結(jié)構(gòu)圖250μl1.結(jié)構(gòu)圖250μl87ABI3100簡介及其常見問題解析課件88此圖表示的是：氣泡沒有排出通道。此圖表示的是：氣泡沒有排出通道。89注意96孔板的使用。3100是16道的，每個run使用兩排孔。若是4道的則是每個run4孔，注意與樣品名的對應(yīng)。310是單道的毛細管，不能使用96孔板，而是使用0.5ml的離心管上樣。注意96孔板的使用。3100是16道的，每個r90陽極有電極插在buffer中陰極沒有電極，而是在毛細管外包裹著一層金屬，插在buffer中。與3100不同，310在毛細管旁邊有一根金屬電極插在buffer中。2.毛細管工作原理毛細管兩端：陽極有電極插在buffer中陰極沒有電極，而是在毛細管外包裹91電滲流：pH大于6時，石英帶負電荷，熔融的石英毛細管內(nèi)層帶負電，來自毛細管內(nèi)的溶液的正電荷產(chǎn)生電滲流，沿負電荷的毛細管壁形成雙層，在電場作用下，雙層中的陽離子向陰極移動，帶動可溶分子向同一方向移動。

為保證DNA片段分離的重復(fù)性，必須包埋毛細管內(nèi)壁以除去電滲流，ABI3100采用能進行DNA分離的POP-4或POP-6膠線性包埋毛細管內(nèi)壁，阻止電滲流，使DNA從陰極到陽極沒有液體的流動。毛細管的包埋使之隨著時間而性能有所降低，影響使用壽命。電泳：電滲流：pH大于6時，石英帶負電荷，熔融的石英92檢測：一束激光被分成兩束從毛細管的兩側(cè)同時照亮16根毛細管，當DNA片段經(jīng)過檢測室時，所帶熒光染料被激發(fā)，熒光被檢測到，形成膠圖。

檢測：93ABI3100簡介及其常見問題解析課件94三.數(shù)據(jù)收集軟件的簡介1.開關(guān)機器順序：電腦，3100機器，收集軟件（關(guān)機相反）三.數(shù)據(jù)收集軟件的簡介95ABI3100簡介及其常見問題解析課件962.空間校正空間校正表明在CCD上呈現(xiàn)每一根毛細管發(fā)出熒光的正確位置，而不反應(yīng)毛細管的任何信息。更換毛細管，毛細管的被拆卸安裝后時要進行空間校正。2.空間校正97ABI3100簡介及其常見問題解析課件983.光譜校正

是為了校正熒光染料發(fā)射光譜的重疊，可以消除不同熒光染料間的相互影響。以下情況必需做校正：機器使用了新的dyeset，激光器或CCD更換，結(jié)果不好有pullup，pulldown的峰。3.光譜校正99進行光譜校正遵循以下步驟新建Pvrotocol進行光譜校正遵循以下步驟100新建plate新建plate101注意：進行光譜校正時應(yīng)注意，4道的毛細管和16道甚至更多道的毛細管在檢測靈敏度上明顯不同，毛細管少靈敏度會明顯高一些，這里忽略毛細管使用次數(shù)的影響。注意：進行光譜校正時應(yīng)注意，4道的毛細管和16道甚至更多道的102校正不好的實例：1.軟件提示：Insufficientnumberofdyespectradetected!Checkrawdata...表現(xiàn)：（1）實際原因：泳道沒有收集到信號，即沒有檢測到目的峰，或目的峰信號過低，低于750rfu。解決方案：如有必要重新校正則減少與甲酰胺的比例，或增大進樣時間。校正不好的實例：1.軟件提示：Insufficient103（2）實際原因：引物峰過高，檢測范圍包括引物峰部分。解決方案：調(diào)整檢測范圍到引物峰之后，包括所有目的峰。（2）實際原因：引物峰過高，檢測范圍包括引物峰部分。1042.軟件提示：Saturateddatadetected.Calibrationfailed.表現(xiàn)：實際原因：氣泡引起的峰使信號達到飽和，顯示不通過。解決方案：盡量保證膠及通道中沒有氣泡。（下圖是放大圖）2.軟件提示：Saturateddatadetecte1053.軟件提示：Baddyeorderdetected.表現(xiàn)：實際原因：引物峰過高，檢測范圍包括引物峰部分。解決方案：調(diào)整檢測范圍到引物峰之后，包括所有目的峰。3.軟件提示：Baddyeorderdetected1064.軟件提示：Failedqualitycheck:q=0.93807islessthanminQthreshold(0.95000)表現(xiàn)：實際原因：各顏色之間引起的putup和putdown峰導(dǎo)致Q值低于設(shè)定值。解決方案：權(quán)宜之計是降低Q值設(shè)定值，徹底解決就是重新生產(chǎn)matrix。4.軟件提示：Failedqualitycheck:1074.檢測樣品目前檢測樣品是marker0.2μl，上樣量1.0μl，總體積10μl樣品的準備：甲酰胺與marker混合均勻分裝，加入樣品后振蕩，離心，95℃變性5min，冰浴3min，離心，上樣。4.檢測樣品108ABI3100簡介及其常見問題解析課件109ABI3100簡介及其常見問題解析課件110ABI3100簡介及其常見問題解析課件1115.結(jié)果的存儲先在“我的電腦”的E盤上建一個文件夾用于儲存結(jié)果，在數(shù)據(jù)收集軟件中有可以進行設(shè)定。5.結(jié)果的存儲112ABI3100簡介及其常見問題解析課件113ABI3100簡介及其常見問題解析課件114結(jié)果的重新導(dǎo)出：結(jié)果可以重新導(dǎo)出，或?qū)⑺枰牟糠纸Y(jié)果重新導(dǎo)出到指定文件夾。結(jié)果的重新導(dǎo)出：1156.手動控制注意：手動控制oven時要“send”兩次，一次設(shè)定溫度一次打開oven。6.手動控制注意：手動控制oven時要“send”兩次，一次116四.數(shù)據(jù)分析軟件的簡介應(yīng)用GeneMapper進行數(shù)據(jù)的分析，下面進行簡單的介紹。1.Panel及bin的導(dǎo)入

四.數(shù)據(jù)分析軟件的簡介應(yīng)用GeneMapper進行數(shù)據(jù)的分析117ABI3100簡介及其常見問題解析課件118ABI3100簡介及其常見問題解析課件119ABI3100簡介及其常見問題解析課件1202.分析數(shù)據(jù)添加要分析的文件夾：2.分析數(shù)據(jù)121panelSizestandardpanelSizestandard122AnalysismethodAnalysismethod123分析后如果如下圖所示：不通過，查找原因。分析后如果如下圖所示：不通過，查找原因。124查看原始數(shù)據(jù)：查看原始數(shù)據(jù)：125查看內(nèi)標：查看內(nèi)標：126結(jié)果所得圖形：結(jié)果所得圖形：127分析工具欄：→分析工具欄：→128ABI3100簡介及其常見問題解析課件129ABI3100簡介及其常見問題解析課件130常見問題的解析1.所有毛細管沒有數(shù)據(jù)原因：毛細管或block通路中有氣泡沒有樣品進入自動進樣器不在正確位置，使毛細管頭吸入氣泡或接觸不到樣品措施：重新正確上樣，排氣泡，拆毛細管清洗block，syring，更換膠常見問題的解析1.所有毛細管沒有數(shù)據(jù)1312.個別毛細管無信號原因：自動進樣器不在正確位置（用20μl樣品試驗）樣品管是中空的（離心）毛細管有彎曲或有損壞（更換毛細管）2.個別毛細管無信號1323.信號過飽和原因：上樣量過大（稀釋樣品，減少進樣時間）3.信號過飽和1334.信號過低表現(xiàn)為信號很弱，內(nèi)標只有幾十rfu。原因：甲酰胺質(zhì)量不高使用的水中鹽離子濃度過高（更換超純水）沒有足夠的樣品（增加上樣量，校正自動進樣器）樣品稀釋倍數(shù)過大混合的不充分（充分混合，離心）自動進樣器不在最佳位置4.信號過低1345.基線不平，峰形明顯異常原因：膠中可能有污染物（清洗block，syring，更換膠）膠中有結(jié)晶或沉淀物（將膠在室溫放置30min使之達到室溫，旋動使沉淀物溶解）光譜校正的不好5.基線不平，峰形明顯異常1356.信號凌亂，有倒峰原因：所選的dyeset不適合光譜校正的不好6.信號凌亂，有倒峰1367.無電流或電流異常原因：使用的水質(zhì)量不好（更換超純水）buffer槽中是水或buffer稀釋的倍數(shù)不對陽極沒有足夠的bufferblock或毛細管中有氣泡（排氣泡）膠已失效整個體系中有泄漏的地方

7.無電流或電流異常1378.小于100runs毛細管檢測結(jié)果不好原因：樣品本身不好甲酰胺質(zhì)量不好buffer稀釋的倍數(shù)不對9.檢測的結(jié)果異常，移動的快或慢原因：注射器中有水導(dǎo)致膠被稀釋block或膠中有大氣泡整個體系中有泄漏的地方甲酰胺的質(zhì)量不好

8.小于100runs毛細管檢測結(jié)果不好13810.有一根毛細管電泳時背景有熒光，導(dǎo)致基線不平，影響結(jié)果。原因：毛細管中有污染物，會隨電泳次數(shù)增多逐漸消失。處理辦法：不加甲酰胺，每次加10μl的蒸餾水，電泳幾次。10.有一根毛細管電泳時背景有熒光，導(dǎo)致基線不平，影響結(jié)果13911.每次電泳時并不是全部泳道信號都很好信號弱或無信號的泳道主要集中在兩端解決方法：換成20μl體系試試，調(diào)整自動進樣器尤其是Z軸。連續(xù)多次上樣看是否是某根固定毛細管，或者是毛細管有題。或許與所用的96孔板有關(guān)，更換96孔板。11.每次電泳時并不是全部泳道信號都很好解決方法：換14012.泳道中間基線明顯形成一個臺階說明：屬于正?，F(xiàn)象?？赡苁菢悠分杏幸恍┪镔|(zhì)導(dǎo)致的，與樣品的純度有關(guān)，但并不影響判型。分析樣品是會計算調(diào)整基線。12.泳道中間基線明顯形成一個臺階說明：屬于正?，F(xiàn)象。14113.電泳導(dǎo)致大片段峰形變寬說明：屬于正常現(xiàn)象，是電泳的一個特點。與電泳時片段大小有關(guān)，隨著時間的推移片段越來越大，所形成的峰變寬。注：電泳時膠圖注：分析時圖像13.電泳導(dǎo)致大片段峰形變寬說明：屬于正?，F(xiàn)象，是電泳的一14214.電泳時易出現(xiàn)尖銳的四種顏色都有的峰（多顯示為紅色）說明：膠中有氣泡，離子，雜質(zhì)顆?；蚱渌袡C物不透光，發(fā)生全反射導(dǎo)致的。解決方案：灌膠前放置室內(nèi)半小時平衡室溫，離心，注意排凈氣泡，注意環(huán)境的潔凈程度，注意操作，