致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座

致瀉大腸埃希氏菌及其檢驗致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第1頁一、目標與要求1、學習掌握致瀉性大腸埃希氏菌檢驗基本原理和方法；2、了解動物性食品檢驗致瀉性大腸埃希氏菌意義。致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第2頁二、生物學特征俗稱大腸桿菌1、革蘭氏陰性菌2、桿狀、兩端鈍圓、周生鞭毛、無莢膜3、需氧及兼性厭氧4、能在普通瓊脂上生長致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第3頁普通大腸埃希氏菌EscherichiaColi掃描照片致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第4頁三、污染路徑污染水源和土壤，進而污染食物肉類食品乳制品水產品等致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第5頁四、致病性

腸道內感染腹瀉、食物中毒、腸熱癥腸道外感染鼠疫（烈性傳染?。?、泌尿道感染、肺炎、腦膜炎、傷口化膿、敗血癥致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第6頁物學檢驗五、微生檢樣25g+營養(yǎng)肉湯225mL乳糖發(fā)酵陽性發(fā)酵管36℃±1℃6h腸道菌增菌肉湯麥康凱EMB36℃±1℃18h~24h乳糖發(fā)酵或不發(fā)酵菌落3個~5個，氧化酶—，革蘭氏陰性桿菌TSI、靛基質、pH7.2尿素KCN、賴氨酸、動力TSI底層+，H2S—，KCN—，尿素—血清學試驗非左述各種反應結果非大腸埃希氏菌匯報致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第7頁（一）檢驗步驟檢樣→樣品處理→增菌培養(yǎng)→伊紅美藍（EMB）平板分離培養(yǎng)→生化判定→血清學鑒定→匯報致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第8頁1、增菌培養(yǎng)以無菌手續(xù)稱取檢樣25

g，加在225

mL營養(yǎng)肉湯中，以均質器打壞1

min或用乳缽加滅菌砂磨碎。取出適量，接種乳糖膽鹽培養(yǎng)基，以測定大腸菌群MPN，其余移入500

mL廣口瓶內，于36±1℃培養(yǎng)6

h。挑取1

環(huán)，接種于

1管30

mL腸道菌增菌肉湯內，于

42℃培養(yǎng)

18

h。致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第9頁2、分離培養(yǎng)

將乳糖發(fā)酵陽性乳糖膽鹽發(fā)酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍瓊脂平板；污染嚴重檢樣，可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱或伊紅美藍平板，于36±1℃培養(yǎng)18～24

h，觀察菌落。不但要注意乳糖發(fā)酵菌落，同時也

要注意乳糖不發(fā)酵和遲緩發(fā)酵菌落。致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第10頁EMB培養(yǎng)基黑紫色或紫紅色，圓形，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常含有金屬光澤，也有呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤。菌落特征：致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第11頁3、生化檢驗

自判別平板上直接挑取數(shù)個菌落分別接種三糖鐵瓊脂（TSI）或克氏雙糖鐵瓊脂（KI）。同時將這些培養(yǎng)物分別接種蛋白胨水、半固體、pH7.2

尿素瓊脂、KCN

肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基。以上培養(yǎng)物均在

36℃培養(yǎng)過夜。TSI斜面產酸或不產酸,底層產酸,H2S陰性,KCN陰性和尿素陰性培養(yǎng)物為大腸埃希氏菌.TSI底層不產酸或H2S、KCN、尿素有任何一項為陽性培養(yǎng)物，均非大腸埃希氏菌。必要時做氧化酶試驗或革藍氏染色鏡檢。

致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第12頁三糖鐵瓊脂試驗：只能利用葡萄糖細菌，葡萄糖被分解產酸可使斜面先變黃，但因量少，生成少許酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質，生成堿性產物，故使斜面以后又變紅，底部因為是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖細菌，則產生大量酸，使整個培養(yǎng)基展現(xiàn)黃色。細菌分解含硫氨基酸，產生H2S，與FeSO4發(fā)生反應形成FeS。

大腸桿菌，能分解葡萄糖產酸產氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產生H2S。

致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第13頁靛基質試驗：細菌分解蛋白質中色氨酸產生吲哚，吲哚與對二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成紅色。致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第14頁脲酶試驗：細菌分解尿素產生兩分子氨，使培養(yǎng)基pH升高，指示劑酚紅顯示出紅色，即證實細菌有脲酶。動力試驗：有動力細菌會沿著穿刺線擴散生長。賴氨酸脫羧試驗：細菌從賴氨酸脫去羧基（-COOH），造成培養(yǎng)基pH變堿，指示劑溴麝香草酚藍就顯示出藍色，試驗結果為陽性，假如細菌不能脫酸，培養(yǎng)基不變則為黃色。致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第15頁4、血清學試驗

假定試驗：挑取經生化試驗證實為大腸埃希菌瓊脂培養(yǎng)物，用致病性大腸埃希氏菌、

侵襲性大腸埃希氏菌和產腸毒素大腸埃希氏菌多價O

血清和出血性大腸埃希氏菌

O157

血清做玻片凝集試驗。當與某一個多價

O

血清凝集時，再與該多價血清所包含單價O血清做試驗。

致瀉大腸埃希氏菌所包含

O抗原群。如與某一單價

O

血清展現(xiàn)強凝集反應，即為假定試驗陽性。致瀉大腸埃希式菌的檢驗專家講座第16頁多價血清單價血清單價血清單價血清單價血清OK多價1O55：K59（B5）O86：K61（B7）O111：K58（B4）O127a：K63（B8）OK多價2O26：K60（B6）O125：K70（B15）O126：K71（B16）O128：K67（B12）OK多價3O44：K74（L）O114