基因工程考試題目整理

如何區(qū)分重組DNA和空載體自連：檢測(cè)方法雙抗性篩選：具有四環(huán)素和氨芐青霉素兩種抗生素抗性基因作為選擇標(biāo)記，一種抗性標(biāo)記用來(lái)正選擇轉(zhuǎn)化子，另一種通過(guò)插入失活而可以鑒定重組子0Ori位于Amp+和tet+這兩個(gè)基因之間，在四環(huán)素平板上出現(xiàn)的菌落一定是獲得了質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子，在此基礎(chǔ)上，如果四環(huán)素抗性轉(zhuǎn)化子對(duì)氨芐青霉素敏感，則說(shuō)明在載體中有外源片段的插入而使氨芐青霉素抗性失活，即重組子；若對(duì)氨芐青霉素有抗性，則此轉(zhuǎn)化子的質(zhì)粒是空載體?？股夭迦胧Щ罘ǎ喝鏐amHI可以從四環(huán)素位點(diǎn)切開(kāi)，使該基因不能表達(dá)，但仍能表達(dá)氨芐抗性基因，對(duì)四環(huán)素是敏感的。篩選重組pBR322按照以下方法進(jìn)行，將轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)于氨芐培養(yǎng)基中，只有轉(zhuǎn)化細(xì)胞可以生長(zhǎng)形成克隆，影印到四環(huán)素培養(yǎng)基上，不能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落可能就是目的克隆。限制性?xún)?nèi)切酶法：外源片段通過(guò)特定的酶切位點(diǎn)插入到載體上，因此，可以通過(guò)這些限制性酶酶切重組質(zhì)粒，電泳分析插入片段長(zhǎng)度是否正確。(抗生素+酶切檢測(cè)+測(cè)序)藍(lán)白斑篩選：多克隆位點(diǎn)存在于編鄴-半乳糖苷酶的N端的DNA序列中，與pUC載體一起使用的宿主菌攜帶編碼8-半乳糖苷酶的C端序列的基因片段。通過(guò)a互補(bǔ)機(jī)制，兩個(gè)片段在體內(nèi)相互彌補(bǔ)，產(chǎn)生一個(gè)有活性的8-半乳糖苷酶。以X-gal作為指示劑。若通過(guò)插入外源DNA到多克隆位點(diǎn)中而打斷了|8-半乳糖苷酶的部分基因，不能產(chǎn)生有活性的8-半乳糖苷酶，X-gal不會(huì)反應(yīng)，重組子菌落為白色，而自連空載體轉(zhuǎn)化的菌落則是藍(lán)色的。PCR法：如果已知插入DNA片段的某些序列，就可以通過(guò)PCR的方法進(jìn)行鑒定菌落原位雜交：把菌落或噬菌斑轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，然后溶菌，變性并固定DNA，最后用標(biāo)記的DNA或RNA探針進(jìn)行雜交來(lái)檢測(cè)這些被轉(zhuǎn)移的菌落或噬菌斑。測(cè)序法：若通過(guò)前面這些方法鑒定之后還是有疑慮，不知道是否陽(yáng)性者確為真陽(yáng)性而不是空載體自連，可以將其送到生物公司進(jìn)行測(cè)序以最終確定之?；虍a(chǎn)物檢測(cè)法：如果使用的是表達(dá)載體，那么就可以通過(guò)鑒定基因產(chǎn)物的方法鑒定正確的克隆。避免方法：.堿性磷酸酶處理載體在DNA重組實(shí)驗(yàn)中，用堿性磷酸酶對(duì)載體DNA的5’末端除磷，可以防止載體自連，提高重組率.噬菌體包裝蛋白包裝下限的限制：選用入噬菌體或者柯氏載體，含有cos位點(diǎn)，包裝35?51kb的片段，空載體片段太小，不會(huì)被包裝.利用某些基因(改基因存在時(shí)質(zhì)粒不能在一定的菌株中存在，而此被基因?yàn)橥庠碊NA取代時(shí)則能存在)等預(yù)防措施.如何在大腸桿菌中高效表達(dá)外源基因：涉及三個(gè)方面：強(qiáng)化蛋白質(zhì)的生物合成(重組質(zhì)粒的拷貝數(shù)，轉(zhuǎn)錄水平和翻譯速率)；抑制蛋白質(zhì)產(chǎn)物降解；恢復(fù)維持蛋白質(zhì)特異性空間結(jié)構(gòu)。(一).強(qiáng)化蛋白質(zhì)的生物合成啟動(dòng)子：影響表達(dá)效率的主要因素之一是啟動(dòng)子的強(qiáng)度。高水平表達(dá)的最佳啟動(dòng)子必須具備的條件：它必須是一種強(qiáng)啟動(dòng)子，能夠使克隆基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的表達(dá)量占細(xì)胞總蛋白的10%-30%；這種啟動(dòng)子應(yīng)該是誘導(dǎo)型的，能通過(guò)簡(jiǎn)單的方式使用廉價(jià)的誘導(dǎo)物而得以誘導(dǎo)。終止子：有效的轉(zhuǎn)錄終止子的必要性：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物越長(zhǎng)，所需時(shí)間就多，外源基因本身的轉(zhuǎn)錄效率下降；轉(zhuǎn)錄通讀進(jìn)入質(zhì)粒功能區(qū)，可能干擾質(zhì)粒的復(fù)制和其他生物功能，甚至導(dǎo)致重組質(zhì)粒的不穩(wěn)定性；轉(zhuǎn)錄終止子能增強(qiáng)mRNA分子的穩(wěn)定從而大大提高了蛋白質(zhì)產(chǎn)物的水平；轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物過(guò)長(zhǎng)影響翻譯效率。核糖體結(jié)合位點(diǎn)(RBS)的結(jié)構(gòu)要素：外源基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)不僅取決于轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)頻率，而且在很大程度上還與mRNA的翻譯起始效率密切相關(guān)。大腸桿菌mRNA的翻譯起始效率主要由其5'端的結(jié)構(gòu)序列所決定，即核糖體結(jié)合位點(diǎn)(RBS)，它包括4個(gè)結(jié)構(gòu)要素：起始密碼子上游的6-8個(gè)核苷酸序列UAAGGAGG,即Shine-Dalgarno(SD)序列；起始密碼子AUG；SD與起始密碼子之間的距離及堿基組成；基因編碼區(qū)5'端若干密碼子的堿基序列，至少這一序列不能與mRNA的5'端非編碼區(qū)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，否則便會(huì)嚴(yán)重干擾mRNA在核糖體上的準(zhǔn)確定位。密碼子由于原核生物和真核生物基因組中密碼子的使用頻率具有不同程度的差異性，因此，外源基因尤其是哺乳動(dòng)物基因在大腸桿菌中高效翻譯的一個(gè)重要因素是密碼子的正確選擇。有兩種策略可以使外源基因上的密碼子在大腸桿菌細(xì)胞中獲得最佳表達(dá)：，采用外源基因全合成的方法，按照大腸桿菌密碼子偏愛(ài)性規(guī)律，設(shè)計(jì)更換外源基因中不適宜的相應(yīng)簡(jiǎn)并密碼子；對(duì)于那些含有不和諧密碼子種類(lèi)單一，出現(xiàn)頻率較高而本身分子量又較大的外源基因而言，則選擇相關(guān)tRNA編碼基因同步克隆表達(dá)的策略較為有利。質(zhì)粒拷貝數(shù)可以通過(guò)構(gòu)建高拷貝載體增加質(zhì)?？截悢?shù)以增加基因的劑量。質(zhì)粒的穩(wěn)定性對(duì)工程菌株高效表達(dá)產(chǎn)物非常重要。在寄主細(xì)胞快速生長(zhǎng)期間質(zhì)粒易于丟失，出現(xiàn)無(wú)質(zhì)粒細(xì)胞。減少質(zhì)粒丟失的措施：保持抗生素的選擇壓力；在載體中保留或連接質(zhì)粒分配功能區(qū)bar；避免質(zhì)粒多體的形成；將重組質(zhì)粒的擴(kuò)增納入可控制軌道。對(duì)于分子量較小的蛋白或多肽可采用將多拷貝的外源基因克隆在一個(gè)低拷貝質(zhì)粒上，以取代單拷貝外源基因克隆在高拷貝載體上表達(dá)的策略。.抑制蛋白質(zhì)產(chǎn)物降解包涵體異源蛋白的表達(dá)外源基因在大腸桿菌中高效表達(dá)的蛋白質(zhì)常形成包涵體，包涵體是由一群不溶性蛋白質(zhì)聚集在一起形成的晶體結(jié)構(gòu)物，被膜包裹或無(wú)膜裸露。大腸桿菌形成的包涵體大部分存在于細(xì)胞質(zhì)中。以包涵體形式表達(dá)異源蛋白的優(yōu)點(diǎn)：易于分離；蛋白質(zhì)受到保護(hù)而免受胞內(nèi)蛋白酶的降解；蛋白質(zhì)沒(méi)有生物活性，對(duì)寄主細(xì)胞沒(méi)有影響。分泌型異源蛋白的表達(dá)這種蛋白質(zhì)分泌定位于細(xì)胞周質(zhì)，或分泌到胞外培養(yǎng)基中。優(yōu)點(diǎn):(1)易于純化，因?yàn)橹苜|(zhì)和胞外的蛋白質(zhì)種類(lèi)較少；蛋白酶活性較低，蛋白質(zhì)較穩(wěn)定；N端甲硫氨酸殘基被切除。融合型異源蛋白的表達(dá)將外源基因和受體菌自身蛋白質(zhì)編碼基因拼接在一起，作為一個(gè)閱讀框架進(jìn)行表達(dá)，這種雜合基因表達(dá)出的蛋白質(zhì)稱(chēng)為融合蛋白質(zhì)。優(yōu)點(diǎn)：(1)位于融合蛋白的N端受體菌自身蛋白質(zhì)可使蛋白質(zhì)產(chǎn)物穩(wěn)定性增加，阻止包涵體地形成；分離純化程序簡(jiǎn)單；表達(dá)效率高。在構(gòu)建融合蛋白表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，所選用地受體菌基因通常是高效表達(dá)的。.恢復(fù)維持蛋白質(zhì)特異性空間結(jié)構(gòu)將表達(dá)出來(lái)的蛋白質(zhì)在體外加工使其擁有正確的空間構(gòu)象。例如(1)在生產(chǎn)胰島素時(shí)，或者分別表達(dá)A/B鏈，在體外進(jìn)行二硫鍵連接；或者(2)表達(dá)前胰島素蛋白，在體外進(jìn)行酶切。3.逆轉(zhuǎn)錄病毒法逆轉(zhuǎn)錄病毒法是將外源目的基因和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體重組，再使之包裝成為高滴度病毒顆粒，人為感染著床前或著床后的胚胎，也可直接將胚胎與能釋放逆轉(zhuǎn)錄病毒的單層培養(yǎng)細(xì)胞共孵育以達(dá)到感染的目的。攜帶外源基因的反轉(zhuǎn)錄病毒DNA依靠逆轉(zhuǎn)錄病毒的整合酶及其末端特異性核苷酸序列可以整合到宿主染色體上，經(jīng)過(guò)雜交篩選即可獲得含有目的基因的動(dòng)物。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、可大量感染細(xì)胞、形成單拷貝和高轉(zhuǎn)化率(可達(dá)100%)缺點(diǎn)：病毒載體可能從整合位點(diǎn)上脫落，恢復(fù)病毒特性，對(duì)宿主細(xì)胞的功能造成影響，甚至使動(dòng)物死亡。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體容納外源基因的DNA片段較小(W10kb)，而且獲得的子代動(dòng)物嵌合體的比例大?；蚬こ逃玫降母鞣N酶（1）DNA聚合酶：識(shí)別序列為4、5或6個(gè)堿基對(duì)且具有180旋轉(zhuǎn)對(duì)稱(chēng)的回文結(jié)構(gòu)同位酶：識(shí)別相同的序列但切點(diǎn)不同。如XmaI/SmaI同尾酶：識(shí)別位點(diǎn)不同但切出的DNA片段具有相同的末端序列。同裂酶：識(shí)別位點(diǎn)和切割位點(diǎn)均相同的酶。如HpaI/HincII一般來(lái)說(shuō)，識(shí)別序列的堿基對(duì)越多，則這種酶在DNA上出現(xiàn)的頻率越低；不同生物堿基含量不同，酶識(shí)別位點(diǎn)的分布及頻率也不同。切開(kāi)的DNA末端有平頭末端和粘性末端（雙鏈DNA的一條鏈突出，如5’或3’突出末端，在適當(dāng)?shù)臏囟认拢瑑蓚€(gè)互補(bǔ)粘性末端能退火形成雙鏈分子。II限制性核酸內(nèi)切酶切割雙鏈DNA，水解磷酸二酯鍵中3‘位酯鍵產(chǎn)生兩個(gè)末端，末端結(jié)構(gòu)是5’-P和3’-OH，產(chǎn)生3種不同的切口。DNA聚合酶以一條DNA為模板通過(guò)聚合作用把脫氧核苷酸加到雙鏈DNA分子的3'-OH端而合成新的DNA。大腸桿菌DNAPolymeraseI研究得較清楚，單體，具有5’-3’的DNA聚合活性，5’-3’的DNA外切活性和3’-5’的DNA外切活性。用蛋白酶處理大腸桿菌DNA聚合酶I產(chǎn)生兩個(gè)片段，一個(gè)小片段，帶有的5’-3'DNA外切酶活性，而另一個(gè)較大的片段失去了5’-3’DNA外切酶活性但保留了另兩種活性5’-3’聚合酶活性3’-5’外切酶活性，這個(gè)大片段被稱(chēng)為Klenow大片段酶。（2）DNA連接酶DNA連接酶廣泛存在于各種生物體內(nèi)，其催化的基本反應(yīng)形式是將DNA雙鏈上相鄰的3’羥基和5’磷酸基團(tuán)共價(jià)結(jié)合形成3’-5’磷酸二酯鍵，使原來(lái)斷開(kāi)的DNA缺口重新連接起來(lái)，因此它在DNA復(fù)制，修復(fù)以及體內(nèi)體外重組過(guò)程中起著重要作用。大腸桿菌連接酶是利用NAD+作為能源的，而T4噬菌體DNA連接酶則是以ATP作為輔助因子。（3）堿性磷酸酶細(xì)菌的堿性磷酸酶（BAP）和牛小腸的堿性磷酸酶（CIP）均能催化DNA，RNA，核苷酸的5‘端除磷反應(yīng)，因此在DNA重組實(shí)驗(yàn)中，該酶用于載體DNA的5’末端除磷操作以防止載體自身連接，提高重組效率；用于末端標(biāo)記。（4）末端脫氧核昔酰轉(zhuǎn)移酶（TdT）該酶來(lái)源于小牛胸腺，它是一種不需要模板的DNA聚合酶，其合適的底物形式為帶有3’游離羥基的雙鏈DNA分子，當(dāng)?shù)孜餅?’端突出的雙鏈DNA時(shí)，TdT在Mg2+的存在下，即可將脫氧核苷酸隨機(jī)聚合在兩條鏈的3’端，對(duì)于平頭或3’凹端DNA底物，則需要Co激活，但聚合反應(yīng)仍不按模板要求進(jìn)行.TdT在人工粘性末端的構(gòu)建中極為有用。（5）核酸酶S1核酸酶（S1,Nuclease）該酶來(lái)源于米曲霉茵，催化反應(yīng)通常由Zn2+激活，并在酸性pH（4.0-4.5）條件下進(jìn)行，其特征是：（1）降解單鏈DNA或RNA，包括不能形成雙鏈的區(qū)域（如發(fā)夾結(jié)構(gòu)中的環(huán)狀部分），但降解DNA的速度大于降解RNA的速度；（2）降解反應(yīng)的方式為內(nèi)切和外切；（3）酶量過(guò)大時(shí)會(huì)伴有雙鏈核酸的降解。因?yàn)樵撁傅碾p鏈降解活性比單鏈低7.5萬(wàn)倍，因此在DNA重組及分子生物學(xué)研究中，S1核酸酶常用來(lái)切平突出的單鏈末端以及制作S1圖譜?；蛭膸?kù)基因文庫(kù)（genelibrary）或DNA文庫(kù)：在細(xì)菌中增殖來(lái)自某一生物的染色體基因組DNA（或來(lái)自所有不同的mRNA種的每一種cDNA分子）所形成的的全部DNA片段之集合體。有基因組DNA文庫(kù)（克?。┖蚦DNA文庫(kù)（克?。??；蚪MDNA克?。ㄎ膸?kù)）某種生物總基因組DNA片段和某一載體形成的克隆或文庫(kù)。cDNA克隆文庫(kù)來(lái)自某一生物的某種組織的所有不同的mRNA合成的cDNA分子再將cDNA重組到載體上，導(dǎo)入大腸肝菌細(xì)胞增殖?；蚪MDNA文庫(kù)構(gòu)建載體DNA片段的制備DNA分離純化一限制酶切一脫磷酸化反應(yīng)供體DNA片段的制備總DNA分離純化一物理切割法或機(jī)械攪拌或限制性核酸內(nèi)切酶酶切法（內(nèi)切酶Sau3A進(jìn)行局部消化，可得到10-30kb的隨機(jī)片段）一分離特定大小DNA片段DNA片段大小分離和富集瓊脂糖凝膠電泳和蔗糖梯度離心技術(shù)載體與基因組DNA大片段的連接cDNA文庫(kù)的構(gòu)建A、分離總RNA，然后從中純化mRNA。B、合成第一cDNA鏈。C、將mRNA-DNA雜交分子轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈cDNA分子。D、將合成的雙鏈cDNA重組到載體上，導(dǎo)入大腸肝菌細(xì)胞增殖。構(gòu)建基因文庫(kù)的意義不只是使生物的遺傳信息以穩(wěn)定的重組體形式貯存起來(lái)，更重要的是它是分離克隆目的基因的主要途徑。對(duì)于復(fù)雜的染色體DNA分子來(lái)說(shuō)，單個(gè)基因所占比例十分微小，要想從龐大的基因組中將其分離出來(lái)，一般需要先進(jìn)行擴(kuò)增，所以需要構(gòu)建基因文庫(kù)。在很多情況下目的基因的分離都離不開(kāi)基因文庫(kù)。此外基因文庫(kù)也是復(fù)雜基因組作圖的重要依據(jù)?；蛭膸?kù)可以構(gòu)建所需的目的基因，并且不含有其他基因.一般母目的基因都很小，直接提取的話會(huì)含有很多其他片段的基因，難以將他們分離開(kāi)來(lái)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線1）分離能夠編碼所需產(chǎn)物的DNA片段（目的基因）。2）將目的基因克隆到適當(dāng)?shù)妮d體DNA中形成重組DNA，并且連接了一個(gè)控制目的基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的啟動(dòng)子和一個(gè)控制目的基因轉(zhuǎn)錄終止終止子，還連接了一個(gè)編碼特殊性質(zhì)的蛋白質(zhì)（如熒光蛋白）標(biāo)記基因。3）利用細(xì)菌繁殖擴(kuò)增重組DNA。4）利用基因槍、農(nóng)桿菌等方法將連接了啟動(dòng)子和終止子的目的基因?qū)氲侥繕?biāo)植物的細(xì)胞中。5）篩選含有外源基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，并誘導(dǎo)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植株。6）轉(zhuǎn)基因植株大規(guī)模種植。高等生物基因克隆方案（動(dòng)物）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的關(guān)鍵技術(shù)包括：（1）外源目的基因的分離（基因的克隆及重組DNA的制備等）；⑵外源目的基因與專(zhuān)性基因表達(dá)起動(dòng)子、增強(qiáng)子、報(bào)告基因等構(gòu)件的拼接重組；（3）外源目的基因重組DNA導(dǎo)入生殖細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞；（4）胚胎移植技術(shù)（EmbryoTransfer，ET）；（5）轉(zhuǎn)基因胚胎發(fā)育生長(zhǎng)鑒定及篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物品系；（6）目的基因整合率及表達(dá)效率的檢測(cè)。在這些程序中最重要的方法是成功地把外源目的基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物早期胚胎細(xì)胞中。2）體細(xì)胞核移植法將外源目的基因?qū)肽軅鞔囵B(yǎng)的動(dòng)物體細(xì)胞（包括動(dòng)物成體體細(xì)胞、胎體成纖維細(xì)胞等），以這些動(dòng)物體細(xì)胞為核供體，通過(guò)顯微操作或電融合使核供體與相應(yīng)的核受體（去核的原核胚或成熟的卵母細(xì)胞）不經(jīng)過(guò)有性繁殖過(guò)程，在體外直接進(jìn)行重組融合，對(duì)重組的胚進(jìn)行胚胎移植，進(jìn)而得到帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。3）顯微注射法在顯微操作儀下用極細(xì)的微吸管將在體外構(gòu)建的外源目的基因注射到處于原核時(shí)期的受精卵的原核中，外源基因在受精卵繁殖過(guò)程中通過(guò)DNA的復(fù)制而整合到動(dòng)物基因組中，再通過(guò)胚胎移植技術(shù)將整合有外源基因的受精卵移植到受體的子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā)育，進(jìn)而得到轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。4）胚胎干細(xì)胞法胚胎干細(xì)胞（embryonicstemcell，ES）是從哺乳動(dòng)物早期胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（innercellmass，ICM）中分離出來(lái)的一種二倍體細(xì)胞，可在體外培養(yǎng)并保持全能分化的潛能，在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件下可形成胚系集落。將外源目的基因轉(zhuǎn)移到ES細(xì)胞中，外源基因整合到ES細(xì)胞的基因組中，把ES細(xì)胞移入胚泡期的胚胎，再把這樣的胚胎移植到假孕的代孕子宮內(nèi)發(fā)育，產(chǎn)生出嵌合體動(dòng)物，進(jìn)一步獲得生殖系攜帶外源基因的純合轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。5）精子載體法它是直接用精子作為外源DNA的載體，精子直接與外源DNA混合培養(yǎng)時(shí)，外源DNA可直接進(jìn)入精子頭部，通過(guò)受精將外源基因引入動(dòng)物細(xì)胞中?？傮w看來(lái)，仍不是十分理想，效率較低。顯微注射法是最常用和獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物最多的經(jīng)典方法；反轉(zhuǎn)錄病毒載體法在禽類(lèi)基因轉(zhuǎn)移上應(yīng)用較多，效果較好；經(jīng)膜處理精子胞漿微注射法結(jié)合了原核微注射和精子載體法各自的長(zhǎng)處；ES細(xì)胞介導(dǎo)法是和基因定位整合相結(jié)合的方法，可以克服外源基因隨機(jī)整合所帶來(lái)的一些弊端，而且可在體外條件下對(duì)外源基因的表達(dá)進(jìn)行篩選。三大基因編輯系統(tǒng)TALEN(transcriptionactivator-likeeffectornuclease)原理：通過(guò)DNA識(shí)別模塊將TALEN元件靶向特異性的DNA位點(diǎn)并結(jié)合，然后在FokI核酸酶的作用下完成特定位點(diǎn)的剪切，并借助于細(xì)胞內(nèi)固有的同源定向修復(fù)(HDR)或非同源末端連接途徑(NHEJ)修復(fù)過(guò)程完成特定序列的插入(或倒置)、刪失及基因融合ZFN原理：鋅指核酸酶(Zinc-fingernuclease,ZFN)又名鋅指蛋白核酸酶(ZFPN)，它是一類(lèi)人工合成的限制性?xún)?nèi)切酶，由鋅指DNA結(jié)合域(zincfingerDNA-bindingdomain)與限制性?xún)?nèi)切酶的DNA切割域(DNAcleavagedomain)融合而成。研究者可以通過(guò)加工改造ZFN的鋅指DNA結(jié)合域，靶向定位于不同的DNA序列，從而使得ZFN