造血細(xì)胞與基本檢驗方法-細(xì)胞化學(xué)染色（血液學(xué)檢驗課件）

第一節(jié)概述細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而形成的一門科學(xué)，是以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運用化學(xué)反應(yīng)的原理對血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)成分(如酶類、酯類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法?；静襟E

固定

顯示

復(fù)染

物理法

化學(xué)法

干燥固定

火焰固定

蒸汽固定

液體固定

固定方法偶氮偶聯(lián)法

雪夫反應(yīng)

聯(lián)苯胺法

普魯士藍(lán)反應(yīng)

金屬沉淀法

顯示方法

復(fù)染的目的在于使各種細(xì)胞能顯示出來以便于觀察。選擇復(fù)染液的顏色應(yīng)與有色沉淀的顏色有明顯的對比度，即能使細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示又能清楚地看出細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果。臨床應(yīng)用輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷觀察疾病療效和預(yù)后探討發(fā)病機制第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)細(xì)胞化學(xué)染色過氧化物酶染色蘇丹黑染色酯酶染色過碘酸-雪夫反應(yīng)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色鐵染色一、過氧化物酶（POX）染色（一）原理POX的染色方法有多種，如復(fù)方聯(lián)苯胺法、二氨基聯(lián)苯胺法、四甲基聯(lián)苯胺、改良的pereira染色法等等。二氨基聯(lián)苯胺染色是臨床常用的方法。二氨基聯(lián)苯胺法：血細(xì)胞內(nèi)的POX，能分解H2O2而釋放出新生氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。一、過氧化物酶（POX）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1.粒細(xì)胞系統(tǒng)分化差的早期原始粒細(xì)胞為陰性，分化好的晚期原始粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞均呈陽性，且隨著細(xì)胞的成熟，陽性反應(yīng)的程度逐漸增強；中性分葉核粒細(xì)胞呈強陽性，衰老的粒細(xì)胞陽性程度減弱甚至呈陰性；嗜酸性粒細(xì)胞陽性反應(yīng)最強，嗜堿性粒細(xì)胞為陰性。一、過氧化物酶（POX）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)2.單核細(xì)胞系統(tǒng)原始單核細(xì)胞呈陰性，幼稚及成熟單核細(xì)胞多呈弱陽性，其顆粒細(xì)少稀疏，分布不均。3.其他細(xì)胞淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)及巨核細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞均呈陰性，漿細(xì)胞、組織細(xì)胞也呈陰性，吞噬細(xì)胞有時呈陽性。一、過氧化物酶（POX）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強陽性；2.晚幼紅細(xì)胞，呈陰性；3.單核細(xì)胞，呈弱陽性；4.漿細(xì)胞，呈陰性一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義成熟中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性的變化臨床意義是輔助判斷急性白血病細(xì)胞類型的首選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色幫助鑒別急性白血病的類型

一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型（1）POX染色是鑒別急性淋巴細(xì)胞白血病和急性粒細(xì)胞白血病的重要指標(biāo)。急性粒細(xì)胞白血病時，原始粒細(xì)胞可呈陽性。急性淋巴細(xì)胞白血病時，原始淋巴細(xì)胞和幼稚淋巴細(xì)胞均呈陰性。急性單核細(xì)胞白血病時，原始單核細(xì)胞、幼稚單核細(xì)胞多數(shù)呈陰性或弱陽性。一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型M2a的POX染色原始粒細(xì)胞均呈陽性

一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型急性淋巴細(xì)胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強陽性；其他原始淋巴細(xì)胞均呈陰性一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型（2）急性早幼粒細(xì)胞白血病有時需與急性單核細(xì)胞白血病鑒別，如果白血病細(xì)胞呈過氧化物酶強陽性，應(yīng)確定為急性早幼粒細(xì)胞白血病。一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型急性早幼粒細(xì)胞白血病的POX染色1.原始紅細(xì)胞，呈陰性；其他早幼粒細(xì)胞均呈強陽性

一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型（3）急性單核細(xì)胞白血病有時需與組織細(xì)胞白血病、惡性組織細(xì)胞病相鑒別，異常組織細(xì)胞的過氧化物酶呈陰性，而白血病性幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞呈弱陽性。一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型急性單核細(xì)胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強陽性；2.原始單核細(xì)胞，呈陽性；3.原始單核細(xì)胞，呈弱陽性；其他原幼單核細(xì)胞呈陰性一、過氧化物酶（POX）染色（三）臨床意義1.幫助鑒別急性白血病的類型2.成熟中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性的變化活性增高：見于再生障礙性貧血、感染、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病?；钚詼p低：見于急性粒細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、骨髓增生異常綜合征、放射病及退化性中性粒細(xì)胞。二、蘇丹黑B（SBB）染色（一）原理蘇丹黑是一種脂溶性重氮染料，能溶解于細(xì)胞內(nèi)的含脂結(jié)構(gòu)（如中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇）中，使脂類物質(zhì)呈棕黑色或深黑色而顯示出來。脂類物質(zhì)在粒細(xì)胞中含量豐富，在單核細(xì)胞中也有少量。二、蘇丹黑（SB）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)結(jié)果與POX染色基本一致（三）臨床意義與POX染色基本相似三、酯酶染色

根據(jù)酯酶特異性高低分為:特異性酯酶(氯乙酸AS-D萘酚酯酶)非特異性酯酶

pH值不同

酸性酯酶(酸性α-醋酸萘酚酯酶)堿性酯酶(α-丁酸萘酚酯酶)中性酯酶

α-醋酸萘酚酯酶醋酸AS-D萘酚酯酶

三、酯酶染色（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色1.原理血細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸AS-D萘酚酯酶水解基質(zhì)液中的氯乙酸AS-D萘酚，產(chǎn)生AS-D萘酚，進而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。三、酯酶染色（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（1）粒細(xì)胞系統(tǒng)分化差的原始粒細(xì)胞呈陰性，分化好的呈陽性，自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均呈陽性。嗜酸性粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性，嗜堿性粒細(xì)胞呈陽性。（2）單核細(xì)胞系統(tǒng)絕大多數(shù)為陰性。（3）其他細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、血小板等均呈陰性；肥大細(xì)胞呈陽性。三、酯酶染色（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色3.臨床意義（1）急性粒細(xì)胞白血病原始粒細(xì)胞呈陽性或陰性。（2）急性早幼粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞呈強陽性。（3）急性單核細(xì)胞白血病原始單核及幼稚單核細(xì)胞幾乎呈陰性。三、酯酶染色（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色3.臨床意義（4）急性粒-單核細(xì)胞白血病原始粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞呈陽性，原始單核及幼稚單核細(xì)胞呈陰性。（5）急性淋巴細(xì)胞白血病和急性巨核細(xì)胞白血病白血病細(xì)胞均呈陰性。三、酯酶染色（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色急性粒細(xì)胞白血?。∕2a）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色1.原始粒細(xì)胞，呈弱陽性；2.幼稚粒細(xì)胞，呈強陽性；3.中性桿狀核粒細(xì)胞，呈強陽性

三、酯酶染色（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色1.原理血細(xì)胞內(nèi)的α-醋酸萘酚酯酶在pH中性的條件下，水解基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚，釋放出α-萘酚，進而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。三、酯酶染色（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（1）單核細(xì)胞系統(tǒng)分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，分化好的原始單核細(xì)胞呈陽性，幼稚單核及單核細(xì)胞也呈陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。（2）粒細(xì)胞系統(tǒng)各期粒細(xì)胞多數(shù)呈陰性，少數(shù)呈弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。三、酯酶染色（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（3）淋巴細(xì)胞系統(tǒng)各期淋巴細(xì)胞多呈陰性，少數(shù)呈弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。（4）其他細(xì)胞巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；少數(shù)有核紅細(xì)胞呈弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；漿細(xì)胞呈陰性。三、酯酶染色（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色3.臨床意義（1）急性單核細(xì)胞白血病單核系細(xì)胞多呈陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。（2）急性粒細(xì)胞白血病原始粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。（3）急性早幼粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞呈強陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。三、酯酶染色（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色3.臨床意義（4）急性淋巴細(xì)胞白血病原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞呈陰性或陽性，陽性反應(yīng)不被氟化鈉抑制。（5）急性粒-單核細(xì)胞白血病原始粒細(xì)胞呈陰性至陽性，陽性反應(yīng)不被氟化鈉抑制；原始單核及幼稚單核細(xì)胞呈陽性，單核系陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。三、酯酶染色（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色3.臨床意義A圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色原始、幼稚單核細(xì)胞多呈強陽性

A三、酯酶染色（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色3.臨床意義

BB圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細(xì)胞陽性反應(yīng)被氟化鈉抑制（與A圖為同一標(biāo)本）三、酯酶染色（三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色1.原理血細(xì)胞內(nèi)的α-NBE在pH堿性條件下，水解基質(zhì)液中的α-丁酸萘酚，釋放出α-萘酚，進而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。三、酯酶染色（三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（1）粒細(xì)胞系統(tǒng)各階段粒細(xì)胞呈陰性。（2）單核細(xì)胞系統(tǒng)分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，分化好的原始單核細(xì)胞呈陽性，幼稚單核及單核細(xì)胞呈陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。三、酯酶染色（三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（3）淋巴細(xì)胞系統(tǒng)T淋巴細(xì)胞、非T非B淋巴細(xì)胞可呈陽性，B淋巴細(xì)胞呈陰性。（4）其他細(xì)胞巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、漿細(xì)胞呈陰性或弱陽性；組織細(xì)胞也可呈陽性,但不被氟化鈉抑制。三、酯酶染色（三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色3.臨床意義與α-NAE染色的臨床意義相同三、酯酶染色（四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色1.原理血細(xì)胞中的酸性α-醋酸萘酚酯酶在pH弱酸性(pH5.8)條件下，可水解基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚，產(chǎn)生α-萘酚，進而與重氮鹽六偶氮付品紅形成不溶性紅色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。三、酯酶染色（四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（1）單核細(xì)胞系統(tǒng)單核系細(xì)胞常呈彌散型強陽性，陽性反應(yīng)可被氟化鈉抑制。（2）淋巴細(xì)胞系統(tǒng)T淋巴細(xì)胞呈陽性，而B淋巴細(xì)胞多數(shù)呈陰性。（3）其他細(xì)胞粒系細(xì)胞一般為陰性或弱陽性，但此反應(yīng)不被氟化鈉抑制；紅系細(xì)胞、巨核系細(xì)胞含量較少。

三、酯酶染色（四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色3.臨床意義（1）可粗略地鑒別T、B淋巴細(xì)胞（2）鑒別其它急性白血病細(xì)胞類型同α-NAE染色（3）多發(fā)性骨髓瘤、多毛細(xì)胞白血病細(xì)胞多為陽性；惡性組織細(xì)胞病呈強陽性；霍奇金淋巴瘤網(wǎng)狀高鐵紅細(xì)胞(R-S細(xì)胞)呈陽性

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)（一）原理過碘酸是氧化劑，能使含有乙二醇基（-CHOH-CHOH）的多糖類物質(zhì)（糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白及糖酯等）氧化，形成雙醛基（-CHO-CHO），醛基與雪夫試劑中的無色品紅結(jié)合，使無色的品紅變成紫紅色化合物，定位于含有多糖類的細(xì)胞內(nèi)。以前又稱為糖原染色。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1.粒細(xì)胞系統(tǒng)分化差的原始粒細(xì)胞呈陰性，分化好的原始粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽性，并隨著細(xì)胞的成熟而逐漸增強；嗜酸性粒細(xì)胞中顆粒之間的胞質(zhì)呈紅色；嗜堿性粒細(xì)胞中的嗜堿性顆粒呈陽性。2.紅細(xì)胞系統(tǒng)有核紅細(xì)胞及紅細(xì)胞均呈陰性。3.單核細(xì)胞系統(tǒng)分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，其他為陽性。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)4.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)大多數(shù)呈陰性，少數(shù)呈陽性。5.巨核細(xì)胞系統(tǒng)巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，陽性反應(yīng)的程度隨細(xì)胞的發(fā)育成熟而增強。6.其他細(xì)胞漿細(xì)胞一般呈陰性，少數(shù)呈陽性，巨噬細(xì)胞可為陽性。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

正常血細(xì)胞PAS染色1.原始粒細(xì)胞（-）2.早幼粒細(xì)胞（+）3.中性中幼粒細(xì)胞（++）4.中性晚幼粒細(xì)胞（+++）5.中性桿狀核粒細(xì)胞（++++）6.中性分葉核粒細(xì)胞（++++）7.嗜堿性粒細(xì)胞（+++）8.嗜酸性粒細(xì)胞（+++）9.單核細(xì)胞（±）10.淋巴細(xì)胞（++++）四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)（三）臨床意義1.紅細(xì)胞系統(tǒng)疾病紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中有核紅細(xì)胞呈陽性，有時有核紅細(xì)胞陽性反應(yīng)強且陽性率高，甚至紅細(xì)胞也呈陽性。某些紅系良性疾病，如嚴(yán)重缺鐵性貧血、重型地中海貧血中的有核紅細(xì)胞也可呈陽性；巨幼細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血、其他溶血性貧血中的有核紅細(xì)胞常呈陰性，但有時個別有核紅細(xì)胞可呈陽性。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)（三）臨床意義2.白細(xì)胞系統(tǒng)疾病急性淋巴細(xì)胞白血病時原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞的陽性率升高，陽性反應(yīng)物質(zhì)呈粗顆粒狀或塊狀；急性粒細(xì)胞白血病時原始粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性；急性單核細(xì)胞白血病時原始單核及幼稚單核細(xì)胞可呈陽性；慢性淋巴細(xì)胞白血病時淋巴細(xì)胞的陽性率增加；惡性淋巴瘤時淋巴瘤細(xì)胞陽性率高、陽性強。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)（三）臨床意義3.其他細(xì)胞戈謝細(xì)胞呈強陽性，尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性或弱陽性，故PAS染色有助于二者的鑒別；Reed-Sternberg（RS）細(xì)胞陰性或弱陽性；骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞呈強陽性。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應(yīng)

急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細(xì)胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（一）原理偶氮偶聯(lián)法：成熟中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶在pH9.6左右的堿性環(huán)境中，能水解基質(zhì)液中的磷酸萘酚鈉底物，釋放出萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)酶活性所在之處。不同的底物與重氮鹽的組合不同，其陽性反應(yīng)物質(zhì)的顏色可有不同，但其化學(xué)反應(yīng)過程基本相似。

五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1.NAP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞(包括中性桿狀核粒細(xì)胞和中性分葉核粒細(xì)胞)，故中性成熟粒細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，其他細(xì)胞基本呈陰性。陽性反應(yīng)表現(xiàn)在胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黑色或棕紅色顆粒。五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

2.成熟中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶積分值的計算血涂片經(jīng)染色后，在油鏡下，連續(xù)觀察100個成熟中性粒細(xì)胞，記錄其陽性反應(yīng)細(xì)胞所占百分率即為陽性率；并對所有陽性反應(yīng)細(xì)胞逐個按其反應(yīng)強度作出（+）～（++++）的分級，將各級所占的百分率乘以級數(shù)，然后相加，即為積分值。結(jié)果以陽性率和積分值來表示。五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色1.中性成熟粒細(xì)胞（+）；2.中性成熟粒細(xì)胞（++）；3.中性成熟粒細(xì)胞（+++）；4.中性成熟粒細(xì)胞（++++）；5.淋巴細(xì)胞（-）五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（三）參考范圍陽性率＜40％；NAP的積分值為30～130分。(各單位應(yīng)建立本實驗室參考值)五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（四）臨床意義1.NAP積分增加見于細(xì)菌性感染、類白血病反應(yīng)、再生障礙性貧血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒細(xì)胞白血病加速期或急變期、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌等。五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（四）臨床意義真性紅細(xì)胞增多癥NAP染色1.中性成熟粒細(xì)胞（+++）；2.中性成熟粒細(xì)胞（++）；3.淋巴細(xì)胞（-）五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（四）臨床意義2.NAP積分下降見于慢性粒細(xì)胞白血病慢性期、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、骨髓增生異常綜合征、惡性組織細(xì)胞病等。五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（四）臨床意義3.疾病的鑒別（1）慢性粒細(xì)胞白血病與類白血病反應(yīng)：前者明顯下降且常為零分，后者明顯增加。（2）慢性粒細(xì)胞白血病(慢性期)與慢性中性粒細(xì)胞白血?。呵罢呙黠@下降，后者明顯增加。五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（四）臨床意義3.疾病的鑒別（3）細(xì)菌性感染與病毒性感染：前者明顯增加，后者常無明顯變化。（4）再生障礙性貧血與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥：前者常增加，后者常下降。五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（四）臨床意義3.疾病的鑒別（5）急性白血病類型的鑒別：急性粒細(xì)胞白血病常下降，急性淋巴細(xì)胞白血病常增加，急性單核細(xì)胞白血病一般正常或減低。（6）惡性淋巴瘤與惡性組織細(xì)胞病：前者常增加，后者常下降。五、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色（四）臨床意義3.疾病的鑒別（7）惡性組織細(xì)胞病與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥：前者常下降，后者無明顯變化。（8）真性紅細(xì)胞增多癥與繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥：前者常增加，后者無明顯變化。（9）原發(fā)性血小板增多癥與繼發(fā)性血小板增多癥：前者常增加，后者無明顯變化。六、酸性磷酸酶（ACP）染色（一）原理偶氮偶聯(lián)法：血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）條件下水解基質(zhì)液中的磷酸萘酚AS-BI，釋放出萘酚AS-BI，后者與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。六、酸性磷酸酶（ACP）染色（一）原理

Gomori硫化鉛法：血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶水解基質(zhì)液中的β-甘油磷酸鈉，形成磷酸根，磷酸根與硝酸鉛作用生成磷酸鉛，定位于胞質(zhì)中的磷酸鉛再與硫化銨反應(yīng)生成棕黑色硫化鉛沉淀。六、酸性磷酸酶（ACP）染色（一）原理抗酒石酸酸性磷酸酶染色：用相同方法制備兩份基質(zhì)液，一份加入適量的L-酒石酸（左旋酒石酸）,另一份不加酒石酸。取兩張相同標(biāo)本的涂片，分別用這兩種不同的基質(zhì)液做酸性磷酸酶染色。如果血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶耐L-酒石酸，兩張涂片均呈陽性；如不耐L-酒石酸，不加L-酒石酸的涂片呈陽性反應(yīng)，而加L-酒石酸呈陰性反應(yīng)。六、酸性磷酸酶（ACP）染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均呈陽性。六、酸性磷酸酶（ACP）染色（三）臨床意義臨床ACP染色應(yīng)用較少，主要用于多毛細(xì)胞白血病的診斷及脂質(zhì)代謝障礙性疾病的鑒別。1.診斷多毛細(xì)胞白血病多毛細(xì)胞呈陽性（常呈強陽性），陽性反應(yīng)不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴細(xì)胞白血病的淋巴細(xì)胞和惡性淋巴瘤細(xì)胞ACP染色也可呈陽性，但可被L-酒石酸抑制。六、酸性磷酸酶（ACP）染色（三）臨床意義臨床ACP染色應(yīng)用較少，主要用于多毛細(xì)胞白血病的診斷及脂質(zhì)代謝障礙性疾病的鑒別。2.鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-匹克細(xì)胞前者陽性，并具有抗酒石酸功能；后者陰性。六、酸性磷酸酶（ACP）染色多毛細(xì)胞白血病酸性磷酸酶染色多毛細(xì)胞呈陽性反應(yīng)七、鐵染色（一）原理正常人骨髓中的貯存鐵以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存，主要存在于骨髓小粒和幼紅細(xì)胞中。骨髓中的鐵在酸性環(huán)境下與亞鐵氰化鉀作用，形成普魯士藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。七、鐵染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)骨髓中的貯存鐵分為細(xì)胞外鐵和細(xì)胞內(nèi)鐵。細(xì)胞外鐵主要存在于骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)鐵是指存在于中幼紅細(xì)胞、晚幼紅細(xì)胞及紅細(xì)胞中的鐵（鐵粒幼紅細(xì)胞、鐵粒紅細(xì)胞）。七、鐵染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1.細(xì)胞外鐵觀察骨髓小粒中的鐵，陽性結(jié)果呈彌散性、顆粒狀、小珠狀或塊狀藍(lán)色。根據(jù)骨髓小粒中鐵的存在方式及量，將細(xì)胞外鐵分為（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）。七、鐵染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)骨髓細(xì)胞外鐵染色A圖：細(xì)胞外鐵+；B圖：細(xì)胞外鐵++七、鐵染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)骨髓細(xì)胞外鐵染色C圖：細(xì)胞外鐵+++；D圖：細(xì)胞外鐵++++七、鐵染色（二）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)2.細(xì)胞內(nèi)鐵觀察100個中幼紅細(xì)胞和晚幼紅細(xì)胞，計算出鐵粒幼紅細(xì)胞的百分比。鐵粒幼紅細(xì)胞：指胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞,根據(jù)藍(lán)色鐵顆粒的多少及粗細(xì)，分為：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞。七、鐵染色（二）正常血細(xì)胞的染色反