血涂片制備與染色（臨床檢驗課件）

臨床檢驗基礎第三講血涂片的制備PARTONE推片將推玻片向1的方向稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動。圖1-3血涂片制備示意圖（上：側面觀，下：正面觀）

血涂片制備推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度：快、大(厚)。慢、?。ū。┮粡垵M意的血涂片應厚薄均勻頭體尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號李四B123臨床檢驗基礎第四講血涂片染色目錄染色1

觀察2

染色瑞氏染色法01姬姆薩染色法02瑞氏-吉姆薩染色03染色方法01瑞氏染色法PartOne1堿性染料為陽離子染料，能接受質子，細胞核的染料。如亞甲藍、天青。能結合酸性物質并染色，如淋巴細胞及嗜堿性粒細胞染成藍色2酸性染料為陰離子染料，能釋放質子。如伊紅。能結合細胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等染成紅色。染料組成毛細管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等物理作用a.染料的化學成分：助色基團的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細胞內帶負電荷的酸性物質結合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質結合。b.蛋白質的化學性質：蛋白質中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時還有其它活性基團。在游離狀態(tài)時，-NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負電的-COO-。分別與不同染料結合。c.周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pH＜pI，則蛋白質帶正電，結合酸性染料；反之，pH＞pI，則結合堿性染料?；瘜W作用原理

圖1-4瑞氏染色原理示意圖

嗜堿性粒細胞試劑01瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0mlWright染液02

有強大的脫水力，可將細胞固定為一定形態(tài)。增加細胞與染料接觸表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。甲醇：03

（PBS，pH6.4-6.8）：磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g,蒸餾水加到1000ml。磷酸鹽緩沖液用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。A加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。B滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10分鐘。C用清水沖洗，待干后鏡檢。。D染色方法質量控制血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落.染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關，一般染液淡、染色時間長些效果好。染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖，防止染料沉著。沖洗時間也不能長。染色過淡，可復染。染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色.中性桿狀核粒細胞

嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞02姬姆薩染色法PartTwo原

理

吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。但本法對細胞核和寄生蟲著色較好，結構顯示更不清晰，而胞質和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長，可用復合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min?；蛳扔萌鹛厝旧ㄈ旧?，再用稀釋吉姆薩復染。吉姆薩染料1.0g甘油66.0ml甲醇（AR）66.0ml[染色方法]1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.將血膜在染液中浸染10-30min3.流水沖洗,待干后鏡檢試劑03瑞氏-吉姆薩染色PartThree試

劑瑞特染料1.0g吉姆薩染料0.3g甲醇（AR)加至500ml先將瑞特染料和吉姆薩染料充分研磨混勻，甲醇溶解倒入容器中，未溶解完的繼續(xù)加入甲醇研磨，重復多次，最后把染液加至500ml。染色方法

血片加滴加染液5滴，并立即將染液蓋滿血膜，2min后加入pH6.4-6.8磷酸鹽緩沖液（同瑞氏染液）10滴，10min后用流水沖洗干凈，待干后鏡檢。

方法學評價

瑞氏染液和吉姆薩染液對細胞進行染色時有各自的顯色特征，前者對細胞質和顆粒著色較好，后者對細胞核結構顯示清晰。因此將二者結合，能取長補短、集中優(yōu)勢，用該混合染液對血細胞進行染色，其細胞核、細胞質和細胞內顆粒均著色鮮艷，對比鮮明。瑞氏-吉姆薩混合染色法是臨床上廣泛使用的方法。04巴氏染色法PartFour是脫落細