血清二氧化碳酶試劑法測定法作業(yè)指導(dǎo)書

血清二氧化碳酶試劑法測定法作業(yè)指導(dǎo)書1.實(shí)驗(yàn)原理PEPC＋Mg2+使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)PEPC＋Mg2+磷酸烯醇丙酮酸+HCO3-草酰乙酸+H2PO4-MDH草酰乙酸+NADH類似物+H+蘋果酸+NAD+類似物MDH上述反應(yīng)會破壞下列平衡：CO2+H2OH2CO3H++HCO3-促使CO2向HCO3-的轉(zhuǎn)換，由此可以檢測出血清或血漿中總CO2的濃度。在405nm或415nm波長處檢測吸光度的下降，反映還原型的輔因子NADH類似物的減少，和樣品中的總二氧化碳濃度呈比例。2.標(biāo)本： 2.1病人準(zhǔn)備：無特殊。2.2類型：血清、肝素血漿。3.標(biāo)本存放：應(yīng)盡快分離血清或血漿，并保存于2～8℃。不可將標(biāo)本暴露于空氣。分離的樣品需密閉保存，防止二氧化碳的損失，并在收集后的最短時間內(nèi)完成檢測。4.標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：超時送檢的、細(xì)菌污染的標(biāo)本。6.實(shí)驗(yàn)材料6.1試劑奧林巴斯CO2測定試劑盒（貨號：109509910試劑6×100ml）6.1.1試劑組成試劑（R）：緩沖液pH7.5磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 12.5mmol/L磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC) >400U/L蘋果酸脫氫酶(MDH) >4100U/LNADH類似物 0.6mmol/L活化劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、防腐劑 適量6.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑避光保存于2～8℃，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。開蓋后放于儀器的冰箱中可以穩(wěn)定30天。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.5注意事項(xiàng)：應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑。6.2校準(zhǔn)品：建議使用DiaSys公司提供的TruCalBicarbonate標(biāo)準(zhǔn)品對自動分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)。校準(zhǔn)穩(wěn)定期：10天。具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3質(zhì)控品：每批樣品檢測時，建議使用DiaSys公司提供的TruLabBicarbonate控制品進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制。具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。7.儀器：奧林巴斯AU2700生化分析儀8.操作步驟8.1項(xiàng)目基本參數(shù)：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU2700生化分析儀項(xiàng)目測定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU2700生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9.檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控（DR0061&62）做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計(jì)算方法：以TruCalBicarbonate標(biāo)準(zhǔn)品碳酸氫鹽濃度校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測結(jié)果。12.參考值范圍[1]：成年人：22～29mmol/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13.臨床意義[1,2]：二氧化碳檢測用于血液酸-堿平衡的診斷。檢測值的升高和降低表明代謝和呼吸系統(tǒng)酸-堿平衡失調(diào)。14.操作性能14.1線性范圍：4～50mmol/L。14.2精密度：精密度的評估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU2700批內(nèi)精密度小于3%，總精密度小于3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品120.80.311.48樣品227.50.431.56樣品345.50.531.1614.3方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時對92個樣品進(jìn)行CO2檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=0.96x+0.56mmol/L；r=0.984。14.4靈敏度：本試劑的檢測限為1mmol/L。14.5病人結(jié)果可報(bào)告范圍：4～50mmol/L15.超出范圍結(jié)果處理：本法對二氧化碳的檢測范圍為4～50mmol/L。當(dāng)樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+1稀釋后，重新測定，結(jié)果乘以2。16.病危報(bào)警值的處理17.方法局限性17.1本法對二氧化碳的檢測范圍為4～50mmol/L。當(dāng)樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+1稀釋后，重新測定，結(jié)果乘以2。17.2干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704mol/L，結(jié)合膽紅素濃度860mol/L，游離膽紅素濃度684mol/L，血紅蛋白濃度5.00g/L，甘油三酯濃度15.8mmol/L時沒有觀察到干擾。18.補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19參考文獻(xiàn)Muller-PlatheO.Acidbasebalanceandbloodgases.In:ThomasL,editor.Clinicallaboratorydiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.318-329.NorrisKA,AtkinsonAR,SmithWG.Colorimetricenzymaticdeterminationofserumto