健脾化瘀法對胃癌前病變細(xì)胞增殖和凋亡的影響

健脾化瘀法對胃癌前病變細(xì)胞增殖和凋亡的影響

對中醫(yī)藥早期脾胃疾病的防治和對胃腸改良的研究初步表明，它具有預(yù)防斑點、益食反應(yīng)的優(yōu)勢，已成為當(dāng)前蒙古人的研究成果。茲就健脾化瘀法對胃癌前病變細(xì)胞增殖和凋亡的作用研究進展作綜述,期能有益于中醫(yī)藥防治胃癌前病變的研究。1門靜脈疾病和細(xì)胞復(fù)制和壞死1.1胃粘膜細(xì)胞癌基因的增殖及基因型判定胃癌前病變是指一類容易發(fā)生癌變的胃粘膜組織病理學(xué)變化,主要指胃粘膜的中重度異型增生(DYS)。腸上皮化生(IM),特別是分泌硫酸粘液的不完全型結(jié)腸性化生(又稱Ⅲ型腸化)與胃癌關(guān)系密切。研究表明,胃癌前病變胃粘膜細(xì)胞增殖過度(1)。這不僅增加了胃粘膜細(xì)胞自身DNA復(fù)制錯誤(自發(fā)突變)的機會,使這種復(fù)制錯誤變?yōu)楣潭ú⒃谄浜蟠?xì)胞得以表達,而且增加了內(nèi)、外源性致癌因子作用于DNA使基因突變的機會,這種突變可使細(xì)胞逐步地轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒浴Ｍㄟ^3H-Tdr標(biāo)記技術(shù)發(fā)現(xiàn),胃癌前病變的細(xì)胞增殖周期縮短、增殖區(qū)擴大,認(rèn)為不典型增生屬于子細(xì)胞分化異常和增殖的結(jié)果。測定細(xì)胞核的DNA含量,核仁組成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NOR)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),可對胃癌前病變細(xì)胞分化、增生的異常程度,異型增生的性質(zhì)及發(fā)展趨勢作出初步估計。應(yīng)用分子生物技術(shù),發(fā)現(xiàn)由胃粘膜細(xì)胞→癌前細(xì)胞→癌細(xì)胞的演進過程中有多種癌基因和抑癌基因發(fā)生結(jié)構(gòu)和表達的異常。癌基因和(或)抑癌基因產(chǎn)物rasP21及c-myc、P53、表皮生長因子(EGF)在胃粘膜異常型增生及腸化生組織中均有一定程度的表達,且隨著胃粘膜病變程度的進展(慢性淺表性胃炎→慢性萎縮性胃炎→腸化生→異型增生),其陽性過表達也逐漸增高。過表達陽性者可作為確定胃癌高危人群的一定依據(jù)。出于胃癌前病變的發(fā)生發(fā)展涉及多方面,故多參數(shù)綜合分析將有助于胃癌前病變的早期診斷、治療及預(yù)后的判斷,一般常選擇rasP21及c-myc、P53、EGF、PCNA等聯(lián)合檢測胃粘膜細(xì)胞增殖程度。1.2癌前癌細(xì)胞凋亡近年來,胃癌前病變與細(xì)胞凋亡的研究越來越受到重視。研究表明,胃癌前病變的發(fā)生與細(xì)胞凋亡有一定的聯(lián)系(2)。在胃癌演化序列中,起初三個階段(慢性淺表性胃炎→慢性萎縮性胃炎→腸化生)的凋亡指數(shù)和PCNA指數(shù)同時上升,而從不典型增生開始,到早期胃癌,直至進展期胃癌,PCNA繼續(xù)上升,而凋亡指數(shù)逐漸下降(3)?？沟蛲龅腷cl-2蛋白在胃癌前期病變,特別是異型增生中表達明顯增加,提示胃癌前病變中胃粘膜上皮細(xì)胞凋亡減少。這種細(xì)胞壽命的延長,代表了腫瘤性增生的某一階段,并使上皮易發(fā)生其它基因改變。在癌前病變和化學(xué)誘癌的早期過程中,可見大量癌前細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象,而當(dāng)腫瘤形成后,這種凋亡卻變得稀少,此可能是機體在癌前階段為平衡癌細(xì)胞的增殖所采取的一種調(diào)節(jié)機制,可能涉及P53的參與,并與TC細(xì)胞的攻擊有關(guān)。抑癌基因P53,將發(fā)生DNA損傷的細(xì)胞封閉于G1期,直到損傷修復(fù)為止,如細(xì)胞試圖對抗G1封閉,則最后將活化其自殺通道而凋亡,但突變型P53阻斷細(xì)胞凋亡。胃癌細(xì)胞中P53的表達被認(rèn)為是一個細(xì)胞凋亡的抑制事件,估計可能與P53發(fā)生突變失去了誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機制有關(guān)。分泌非中性粘液的Ⅲ型腸化和中重度異型增生可見P53的高表達,帶有更多與胃癌相同的生物學(xué)性狀。2門靜脈疾病和健脾散瘀2.1中醫(yī)證型及病理組織學(xué)檢測脾虛與胃癌前病變關(guān)系密切。對96篇有關(guān)CAG的論文中報道的7496例CAG辨證的證型進行歸納,共有證型23個,脾胃虛弱證占首位。脾虛癥狀輕重與胃癌前病變及胃癌發(fā)生、發(fā)展各階段病變之間呈等級正相關(guān)(4)。脾虛證胃粘膜細(xì)胞增殖過度。對脾虛證胃病患者的胃粘膜,進行腸化生分型、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、DNA檢測。發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核與核仁增大、分葉核增多、染色質(zhì)密集、線粒體退變,以及核DNA含量等指標(biāo),隨下列順序遞增:健康對照→脾氣虛→脾虛氣滯證;慢性淺表性胃炎→慢性萎縮性胃炎→胃癌;腸化生完全性小腸型→不完全性小腸型→完全性結(jié)腸型→不完全性結(jié)腸型。線粒體及其嵴的數(shù)量,則隨以上順序遞減。提示脾虛氣滯證胃病以細(xì)胞核蛋白合成代謝旺盛、線粒體能量代謝衰微為特征,也就是以細(xì)胞分裂增殖加速、細(xì)胞分化障礙為病理特征,脾虛氣滯證胃病是癌前疾病(5)。臨床上應(yīng)高度重視脾虛氣滯證胃病的癌變傾向。幽門螺桿菌(HP)感染與脾虛證關(guān)系密切。HP陽性率在不同中醫(yī)證型中,依次為脾虛濕蘊>脾虛氣滯>氣陰兩虛(6)。對100例慢性胃炎觀察表明,中虛氣滯證的HP感染率、感染程度、侵犯深度及HP寄生部位粘液細(xì)胞的壞死崩解、中性白細(xì)胞浸潤等,均與其他證型有顯著差異。脾虛證的胃粘膜破壞及炎癥活動較其他證型為重(7)。胃粘膜破壞時,可導(dǎo)致胃粘膜腺頸部增殖帶細(xì)胞外露,更易招致各種內(nèi)外源性致癌因子的作用,致使惡性轉(zhuǎn)變的機會明顯加大。脾虛證可進一步發(fā)展為脾胃虛寒證。胃粘膜c-myc、P21、P53陽性表達與HP感染、胃粘膜病變程度呈平行關(guān)系,各證型依次為脾胃虛寒>胃陰不足>肝胃不和>寒熱夾雜。提示HP感染、癌基因及抑癌基因表達與脾虛證關(guān)系密切(8)。2.2胃粘膜血流量改變慢性萎縮性胃炎(CAG)多由慢性淺表性胃炎或其他慢性胃病發(fā)展而來,病程綿長,病情遷延反復(fù)難愈,這種長期的病理過程本身就為內(nèi)傷、外邪等諸多因素導(dǎo)致血絡(luò)瘀阻奠定了基礎(chǔ)。無論CAG還是反復(fù)發(fā)作的消化性潰瘍(PU)患者,臨床最常見、也最有診斷價值的血瘀征象,是舌質(zhì)紫暗、或暗紅、或淡暗、或有瘀斑,具有普遍意義。常伴有舌青筋暴露,胃脘疼痛明顯,固定不移等癥狀?，F(xiàn)代研究表明,CAG患者普遍存在微循環(huán)障礙。就胃粘膜血流量而言,減低的程度依次為胃癌>胃癌前病變>慢性淺表性胃炎。胃癌前病變胃粘膜表面溫度較一般胃炎和正常人降低,這與局部組織血管受累,血流緩慢,組織缺氧,代謝率降低,產(chǎn)熱減少有關(guān)。血液流變學(xué)檢查提示全血比粘度、血漿比粘度均增高。胃癌前病變在胃鏡下有花斑樣改變、血管扭曲、血管壁顯露、粘膜色暗或灰暗,表面凹凸不平、或呈結(jié)節(jié)隆起狀。而且腺體萎縮、異型增生及腸化生程度,瘀血型患者較其他證型患者為重。CAG患者的胃粘膜活檢標(biāo)本的超微結(jié)構(gòu)觀察,發(fā)現(xiàn)HP侵入越多,瘀血與出血改變越明顯,且與其數(shù)量呈正相關(guān),這為用活血化瘀藥治療HP相關(guān)性胃病提供了理論依據(jù)。胃癌前病變動物實驗研究表明,胃粘膜層、粘膜下層血管新生,主要是微血管增多,血管內(nèi)皮細(xì)胞開始增生,血管腔狹窄,有的見血栓形成。在血管內(nèi)皮細(xì)胞增生的基礎(chǔ)上,導(dǎo)致局部組織供血減少,使細(xì)胞長期處于低氧狀態(tài)下生存,這種環(huán)境更適合腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,因而引起細(xì)胞突變。2.3胃粘膜的中醫(yī)治療中醫(yī)藥治療本病以中醫(yī)辨證、西醫(yī)辨病為主要模式。實踐證明,不論胃癌前病變有多少中醫(yī)證型,從病理角度而言,除糜爛、潰瘍、腸化生、不典型增生程度的差異外,其基本病理改變一致。胃癌前病變證型雖多,但都與脾虛(氣滯)和瘀血密切相關(guān)。因此,根據(jù)胃癌前病變基本中醫(yī)辨證(或證型),并針對胃粘膜病理形態(tài)的改變進行固定專法專方的研究,已成為研究的一種趨勢。治療多從脾虛和(或)血瘀立法處方,或以健脾化瘀為大法,均已取得了可喜的療效。且多數(shù)研究證明,健脾益氣與活血化瘀兩法合用優(yōu)于單用(9,10)。健脾化瘀法可促進胃癌前病變胃粘膜炎癥吸收,使萎縮腺體再生及修復(fù),胃粘膜異型增生和腸上皮化生得到不同程度地逆轉(zhuǎn)和恢復(fù),初步顯示防癌抗變的優(yōu)勢。健脾化瘀法已成為防治胃粘膜癌前病變的主要治法之一。3胃粘質(zhì)體增殖5-三里細(xì)胞形態(tài)定量分析、腫瘤細(xì)胞動力學(xué)及分子生物學(xué)的研究進展為中醫(yī)藥防治胃癌前病變的機理研究提供了一種新思路。研究表明,健脾化瘀可明顯抑制胃癌前病變胃粘膜細(xì)胞的增殖活性,且其抑制程度與不完型結(jié)腸化生和異型增生的改善程度呈正相關(guān),表明健脾化瘀具有一定的逆轉(zhuǎn)胃癌前病變的作用,促進異常細(xì)胞正常分化和成熟。健脾化瘀之胃舒膠囊可抑制胃癌前病變氣虛血瘀病證結(jié)合型大鼠的胃粘膜上皮的異常增殖,促進其正常分化成熟(9)。健脾化瘀及清熱解毒之消痞靈可使胃癌前病變大鼠異型增生結(jié)構(gòu)異型性和細(xì)胞異型性得到改善,促進異型增生消退,有效地改善胃粘膜癌前病變的超微結(jié)構(gòu);運用流式細(xì)胞儀測定消痞靈對胃癌前病變胃粘膜DNA含量和細(xì)胞動力學(xué)的影響,顯示消痞靈對大鼠胃癌前病變細(xì)胞增殖有明顯抑制作用;消痞靈可抑制胃癌前病變細(xì)胞腫瘤相關(guān)抗原的表達。足三里注射黃芪及當(dāng)歸注射液,對實驗性萎縮性胃炎胃癌前病變有顯著抑制作用(11)。用黃芪及當(dāng)歸注射液注射肝俞、胃俞、足三里等穴治療胃癌前病變患者,可抑制胃癌前病變細(xì)胞PCNA的表達,即對胃癌前病變細(xì)胞增殖有明顯抑制作用。從細(xì)胞凋亡角度研究中醫(yī)藥防治胃癌前病變機理者很少。4健脾化瘀對肺癌前病變的作用機制鑒于胃癌前病變的發(fā)生與細(xì)胞凋亡有一定的關(guān)系,而長期以來運用健脾化瘀為主的組方治療胃癌前病變?nèi)〉昧艘欢ǖ寞熜?故推測健脾化瘀法的治療機制與癌前細(xì)胞凋亡之間可能存在著某種規(guī)律性或必然的聯(lián)系,細(xì)胞凋亡很可能是健脾化瘀方藥治療胃癌前病變的分子機制之一。由于細(xì)胞凋亡時,基因DNA被迅速有規(guī)律地降解,可以有效地防止異常細(xì)胞的復(fù)制,因此,細(xì)胞凋亡又是生物體在遺傳大分子水平上消除致病因素如基因突變等的最有力的手段之一?；谏鲜龇治龊驼J(rèn)識,可以認(rèn)為應(yīng)用健脾化瘀法通過細(xì)胞凋亡機制來預(yù)防胃癌的發(fā)生和發(fā)展并非不可能。胃癌的形成與血管內(nèi)皮細(xì)胞增生是同步發(fā)生的,并且新生血管及血管內(nèi)皮細(xì)胞與腫瘤生長的速度密切相關(guān),間質(zhì)組織中血管密度越大,內(nèi)皮細(xì)胞增生越明顯,癌細(xì)胞生長的速度越快。但血管生成的病理生理過程受誘導(dǎo)劑和抑制劑的調(diào)節(jié)。誘導(dǎo)劑如各種生長因子和炎性物質(zhì),可刺激新的血管生成;抑制劑如腫瘤血管生成抑制劑,具有對抗血管生成的活性,通過抑制腫瘤細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的增生,從而抑制腫瘤血管生成,最終達到抑制腫瘤生長的目的。正常細(xì)胞具有抑制血管生成的活性,一旦惡變反而有很強的血管生成的活性,此種轉(zhuǎn)變是通過降低血管生成抑制劑的分泌和提高誘導(dǎo)劑的量來完成的。對胃癌前病變與病變局部微血管的關(guān)系;與血管生成誘導(dǎo)劑和抑制劑的關(guān)系;脾虛和(或)血瘀與病變局部微血管、血管生成誘導(dǎo)劑和抑制劑的關(guān)系等,目前尚未引起人們的普遍關(guān)注。胃癌前病變細(xì)胞形態(tài)計量分析和多種生物活性物質(zhì)定量分析表明,重度異型增生與胃高分化腺癌細(xì)胞已很難截然區(qū)分。胃癌前病變特別是重度胃癌前病變理應(yīng)存在著與胃癌相似的局部微血管以及血管生成誘導(dǎo)劑和抑制劑的改變。健脾化瘀對胃癌前病變有一定的防癌抗變療