balbc近交系小鼠生物學特性指標的比較

balbc近交系小鼠生物學特性指標的比較

本交系大鼠的廣泛使用。清潔級實驗動物目前已是我國在醫(yī)學研究領域應用的主要實驗動物。為探討其生物學特性,我們針對BALB/c近交系小鼠常規(guī)的血細胞計數(shù)、臨床生化指標、免疫指標、體重及臟器重量(含臟器指數(shù)),進行了詳細的研究,為清潔級BALB/c近交系小鼠的應用提供基礎數(shù)據(jù)。1材料和方法1.1動物清潔級BALB/c近交系小鼠,由本中心飼養(yǎng)(京動許字99001),每組動物雌雄各20~40只。1.2小鼠cd8+、cd3+單抗的制備PE標記的抗小鼠CD4+、CD19+單抗,FITC標記的抗小鼠CD8+、CD3+單抗,晶美生物工程有限公司;RPMI-1640,新生牛血清:本院條件處提供。羊抗小鼠酶標抗體(IgG),軍事醫(yī)學科學院血液研究所提供。1.3ra:細胞東南角流式細胞儀為Cytometer.FACSCalibur;軟件為Softwara:CELLQuest由美國SD公司制造;酶聯(lián)儀為日本Bio-Rad;血球計數(shù)儀為日本光電MEK-5126;半自動生化分析儀為荷蘭VITALAB;萬分之一的電子天平為西德沙多利斯電子分子天平;顯微鏡為日本OLYMPUS。1.4方法1.4.1血液生理指標動物空腹12~24h,上午8:00~10:00采靜脈血,應用日本光電MEK-5126血球計數(shù)儀(動物芯片)及配套試劑盒檢測120只比格犬的血液生理指標8項;取靜脈血1滴于玻片上,常規(guī)推片,瑞氏染色鏡檢計數(shù)白細胞分類5項。指標如下:白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(Hgb)、血細胞壓積(HCT)、紅細胞平均容量(MCV)、紅細胞平均血紅蛋白容量(MCH)、紅細胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計數(shù)(PLT)、中性細胞、酸性細胞、堿性細胞、淋巴細胞、單核細胞。1.4.2血液常規(guī)生化指標動物空腹12~24h,上午8:00-11:00采靜脈血,離心取血清,通過荷蘭半自動生化儀(Ⅱ型),中生北控生物科技股份有限公司的試劑盒測定20項血液常規(guī)生化指標。具體指標如下:血糖(Glu)、肌酸激酶(CK)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH-L)、膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、甘油三脂(TG)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、總膽紅素(T.Bili)、肌酐(CRE)、尿酸(UA)、鈣(Ca)、氯(Cl)、鎂(Mg)、磷(P)。1.4.3低質(zhì)低效液凝膠電泳殺小鼠取血清備用,再取小鼠脾臟,制備小鼠脾臟的細胞懸液,配成1×106/ml脾細胞懸液,1ml/管分裝,加入抗體,常溫撫育30min,加入破紅細胞低滲液1ml,停留5min后離心,然后用PBS液洗滌兩次,最后加入保存液,24h內(nèi)上流式細胞儀檢測。1.4.4血清白蛋白封閉取小鼠血清100倍稀釋后包被酶標板,4℃過兩夜后,用人血清白蛋白封閉酶標板,用PBS液洗滌3次,加上羊抗小鼠的酶標抗體,孵育后洗滌。最后加入酶低物溶液,490nm測定A值。1.4.5測量體重和器官指數(shù)的指標剖檢小鼠20只,肉眼觀察臟器無病理變化,取出各個臟器應用電子天平稱重。1.5統(tǒng)計方法應用SPSS統(tǒng)計學軟件的t檢驗對實驗結(jié)果進行性別、級別之間分析比較。2結(jié)果2.1balb-c型近距離小鼠血液生理指標堿性細胞為零,RBC、Hgb、MCV、單核細胞雌雄之間差異顯著(P<0.05),其它指標差異不顯著(表1)。2.2balb-c型選擇性下肢血生化指標CK、GLU、UA、TG雌雄之間差異顯著(P<0.05),其它指標差異不顯著(表2)。2.3本交系大鼠體重、器官重量和器官指數(shù)的接近脾臟雌雄之間差異顯著(P<0.05),其它指標差異不顯著(表3)。2.4balb-c型社區(qū)下肢免疫指數(shù)清潔級BALB/c近交系小鼠的免疫指標雌雄之間差異不顯著(P<0.05)(表4)。3不同飼養(yǎng)環(huán)境對balb/c近交系小鼠血液學生理生化指標的影響近交系小鼠具有高度的基因純合和遺傳的均質(zhì)性,在相同的環(huán)境因素作用下,表現(xiàn)型均一,用作實驗研究,易于重復和定量比較,對各種刺激的反應一致性較好。本實驗的血液細胞計數(shù)、血液生化指標、體重、臟器重量、臟器指數(shù)等常規(guī)生物學指標其結(jié)果比較均一;清潔級BALB/c近交系小鼠的血液細胞計數(shù)和血液生化指標同普通級BALB/c近交系小鼠比較差異很大。說明不同的飼養(yǎng)環(huán)境對近交系小鼠的血液學生理生化指標影響較大。機體的特異性免疫功能分體液免疫和細胞免疫。細胞免疫由T淋巴細胞介導的;B淋巴細胞是唯一能夠產(chǎn)生抗體的細胞,CD19+主要表達大多數(shù)B細胞;,CD4+和CD8+是T細胞表面的糖蛋白,CD4+和CD8+作為輔助分子增強T細胞和靶細胞間的相互作用。因此,我們檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD19+以及IgG基本能夠反映機體的特異性免疫功能。實驗結(jié)果表明:清潔級BALB/c近交系小鼠CD4+/CD8