胎盤型谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶和dna拓樸酶在骨肉瘤中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

胎盤型谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶和dna拓樸酶在骨肉瘤中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

骨肉瘤是青少年常見的骨腫瘤。骨腫瘤對化療不敏感,預(yù)后差,其機制較為復(fù)雜,可能與腫瘤多藥耐藥性(Multi-drugresistance,MDR)有關(guān)。近年研究表明,胎盤型谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST-π)和DNA拓樸酶Ⅱ(TopoⅡ)等多種細(xì)胞內(nèi)酶是惡性腫瘤產(chǎn)生MDR的物質(zhì)基礎(chǔ),但其在骨肉瘤中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系國內(nèi)外報道較少。為此,本研究用S-P法檢測40例骨肉瘤中GST-π和TopoⅡ的表達(dá),以期探討其與預(yù)后的關(guān)系。1材料和方法1.1母細(xì)胞型及細(xì)胞型的檢測選取本校附一、二院及重慶市腫瘤醫(yī)院1985-1994年間骨肉瘤標(biāo)本40例,其中包括骨母細(xì)胞型22例,軟骨母細(xì)胞型10例及纖維母細(xì)胞型8例。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林液固定,常規(guī)石蠟包埋,5μm連續(xù)切片,分別行HE及S-P免疫組化染色。1.2臨床數(shù)據(jù)40例骨肉瘤患者,男性28例,女性12例。年齡13～64歲。術(shù)前化療13例,術(shù)前未化療27例。1.3免疫試劑和模型5μm連續(xù)石蠟切片,行S-P免疫組化染色,具體步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。鼠抗人GST-π和TopoⅡ單克隆抗體,S-P免疫組化、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑均購自北京中山生物技術(shù)公司。進(jìn)行S-P免疫組化染色前切片需經(jīng)微波爐修復(fù)抗原。陰性對照用PBS代替一抗,陽性對照由公司提供。1.4統(tǒng)計處理計數(shù)資料兩組間比較采用χ2檢驗,用SPSS8.0統(tǒng)計軟件計算,P<0.05表示相差顯著,P<0.01表示相差非常顯著。2結(jié)果2.1年生存率本組全部病例均有隨訪資料,隨訪最長時間為12年,最短為1年,平均為3.35年。2年總生存率為65%。隨訪病例中,GST-π、TopoⅡ在骨肉瘤內(nèi)呈高表達(dá)型者,其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和生存時間短,而低表達(dá)型者,其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和生存時間有相對延長的趨勢。2.2關(guān)于toe陽性產(chǎn)物的測定GST-π陽性產(chǎn)物定位于胞漿和胞膜,部分瘤細(xì)胞胞核中亦可見陽性產(chǎn)物;TopoⅡ陽性產(chǎn)物主要定位于胞核,部分瘤細(xì)胞胞漿中亦可見陽性產(chǎn)物,見圖1,2。骨肉瘤GST-π和TopoⅡ陽性率分別為82.5%(33/40)和52.5%(21/40)。2.3兩組患者tpre,tpre比較見表1,術(shù)前未化療組(Npre)GST-π陽性表達(dá)率為88.9%(24/27),高于術(shù)前化療組(Tpre)69.2%(9/13),但無顯著性差異(P>0.05);術(shù)前化療組TopoⅡ陽性表達(dá)率為38.5%(5/13),顯著低于術(shù)前未化療組77.8%(21/27)(P<0.05)。2.4年以上組與2年以上組生物資本合作組2.3%兩組見表2,骨肉瘤患者存活2年以內(nèi)組(Group2-)陽性表達(dá)率分別為92.3%(24/26)、69.2%(18/26),均顯著高于存活2年以上組(Group2+)64.3%(9/14)、21.4%(3/14)。各型骨肉瘤中GST-π和TopoⅡ表達(dá)沒有顯著差異,見表3。3gst-與肺癌mdr的關(guān)系術(shù)后新輔助化療已經(jīng)成為治療骨肉瘤的重要手段之一,一定程度上改善了骨肉瘤的治療效果,提高了患者5年生存率,但隨之而來的是腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥問題,目前認(rèn)為是化療失敗的重要原因之一,而有關(guān)其機制,國內(nèi)外研究較少。腫瘤細(xì)胞在藥物誘導(dǎo)條件下的各種改變都是為了抵抗藥物殺滅、保護(hù)自身生存而改變的結(jié)果,因此,一般認(rèn)為耐藥是多種機制共同作用的結(jié)果。Wunder等發(fā)現(xiàn)骨肉瘤及骨肉瘤細(xì)胞株中MDR1高表達(dá),提示骨肉瘤存在耐藥。MDR有兩種不同的表型,一種是對第一次化療就產(chǎn)生耐藥,稱之為原發(fā)性耐藥;另一種是在化療過程中產(chǎn)生耐藥,稱之為繼發(fā)性耐藥。研究表明,MDR與GST-π和TopoⅡ等多種細(xì)胞內(nèi)酶有關(guān)。GST是一組具有多種生理功能的蛋白質(zhì)超基因家族,可分為α、μ、θ、π及膜結(jié)合微粒體5種類型,其中GST-π與惡性腫瘤MDR關(guān)系最密切。在結(jié)腸癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌等惡性腫瘤中GST-π表達(dá)均增高,而在肝癌、腎癌、前列腺癌等表達(dá)極低或不表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)骨肉瘤GST-π陽性表達(dá)率為82.5%(33/40),各型骨肉瘤中GST-π的表達(dá)沒有明顯差異,而術(shù)前未化療組GST-π陽性表達(dá)率為88.9%(24/27),高于術(shù)前化療組69.2%(9/13)(P>0.05),說明GST-π表達(dá)不受化療藥誘導(dǎo),主要參與原發(fā)性耐藥。谷貴山等通過實驗得到的結(jié)果與本實驗結(jié)果相似。ToPoⅡ是一種核酸酶,可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的DNA合成,提高增殖能力,與腫瘤惡性程度有關(guān)。同時,ToPoⅡ是多種抗癌藥物的靶酶,耐藥細(xì)胞通過不同環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)其酶的表達(dá)量和活性,維持耐藥表型。在一些惡性腫瘤,如肺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌中ToPoⅡ高表達(dá),并且在前列腺、結(jié)腸組織中可根據(jù)其表達(dá)程度不同區(qū)分非腫瘤性病變、腺瘤及癌。本研究發(fā)現(xiàn)骨肉瘤TopoⅡ陽性率為65.0%(26/40),且各型骨肉瘤中的ToPoⅡ表達(dá)沒有明顯差異,而術(shù)前化療組TopoⅡ陽性表達(dá)率為38.5%(5/13),顯著高于術(shù)前未化療組77.8%(21/27)(P<0.05)。提示TopoⅡ表達(dá)與化療藥物誘導(dǎo)激活有關(guān),不僅參與原發(fā)性耐藥,同時也參與繼發(fā)性耐藥。牟江洪等通過實驗得到的結(jié)果與本實驗結(jié)果相似。在多種惡性腫瘤中,耐藥基因的高表達(dá)與患者的生存率密切相關(guān)。Linn等發(fā)現(xiàn)MDR1基因表達(dá)產(chǎn)物P糖蛋白高表達(dá)是乳腺癌預(yù)后差的指標(biāo)之一。王華英等研究表明宮頸癌MDR和GST-π表達(dá)組化療有效率明顯低于未表達(dá)組。本研究顯示骨肉瘤患者存活2年以內(nèi)組GST-π、TopoⅡ陽性表達(dá)率分別為92.3%(24/26)、69.2%(18/26),均顯著高于存活2年以上組64.3%