冬蟲夏草及其制劑在腎臟病中的治療作用

冬蟲夏草及其制劑在腎臟病中的治療作用

麥冬是中國(guó)著名的藥物。它是一個(gè)由蘑菇引起的復(fù)合體（即僵硬體和細(xì)菌核）。冬蟲夏草菌是真菌界、子囊菌門、子囊菌綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草菌屬的真菌。冬蟲夏草的成分復(fù)雜,主要有:核苷類(包括腺苷及蟲草素等)、甾醇類(包括麥角甾醇等)、多糖類(包括半乳甘露聚糖等)、D-甘露醇、氨基酸及微量元素。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為冬蟲夏草能調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤,而且對(duì)中樞神經(jīng)、心、肺、肝、腎、血液、代謝及內(nèi)分泌也具有調(diào)節(jié)及保護(hù)作用。百令膠囊為杭州中美華東制藥有限公司于1993年投產(chǎn)的冬蟲夏草發(fā)酵菌粉膠囊制劑,為中國(guó)被毛孢(hirsutellasinensis)。多家研究機(jī)構(gòu)通過(guò)個(gè)體發(fā)育生物學(xué)及分子生物學(xué)等研究方法證實(shí),中國(guó)被毛孢即為冬蟲夏草菌的無(wú)性型。本文擬從細(xì)胞水平研究、動(dòng)物模型研究、臨床應(yīng)用研究及祖國(guó)醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)幾方面,對(duì)冬蟲夏草及其相關(guān)制劑(包括百令膠囊)在腎臟病中的治療作用做一綜述。1關(guān)于細(xì)胞水平的研究1.1對(duì)上皮細(xì)胞的影響1.1.1抗炎與肝腎上皮細(xì)胞增生劑黎磊石等進(jìn)行的體外細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,慶大霉素能導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶(LDH)和N-乙酰-β-葡萄糖苷酶(NAG),并抑制細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性,而冬蟲夏草提取液能拮抗上述反應(yīng),表明冬蟲夏草能減輕腎小管上皮細(xì)胞對(duì)慶大霉素?fù)p傷的易感性。本文作者還發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草含藥血清能顯著促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞增殖。崔敏等也用細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,百令提取液能促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞增殖,并在一定程度上逆轉(zhuǎn)環(huán)孢素A(CsA)導(dǎo)致的細(xì)胞增殖受抑和細(xì)胞周期受阻現(xiàn)象。1.1.2hkc的促纖維化效應(yīng)方靜等研究發(fā)現(xiàn),“益腎軟堅(jiān)散”(自擬方劑,內(nèi)含冬蟲夏草等八味中藥)含藥血清能拮抗馬兜鈴酸(AA)誘發(fā)的人腎小管上皮細(xì)胞株(HKC)的促纖維化效應(yīng),表現(xiàn)為下調(diào)AA刺激產(chǎn)生的促細(xì)胞外基質(zhì)合成因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF),以及抗細(xì)胞外基質(zhì)降解因子如金屬蛋白酶組織抑制物-1(TIMP-1)的高表達(dá)。而后,張等用百令菌液?jiǎn)畏街貜?fù)上述實(shí)驗(yàn),也獲得了同樣結(jié)果。1.2對(duì)msc增殖的影響王筱霞等發(fā)現(xiàn),冬蟲夏草提取液可以抑制低密度脂蛋白(LDL)引起的體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞(MsC)增殖,且隨著提取液濃度升高,3氚標(biāo)記胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)摻入率隨之下降。王月等也觀察到類似結(jié)果,發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草提取液可以抑制脂多糖(LPS)引起的MsC增殖,隨著提取液濃度升高,抑制作用漸增強(qiáng)。上述實(shí)驗(yàn)均提示冬蟲夏草對(duì)MsC合成DNA存在抑制作用。林吉祥用冬蟲夏草煎劑給正常大鼠灌胃制備含藥血清,然后用此含藥血清于體外孵育大鼠MsC,觀察3H-TdR摻入量變化。隨著灌胃的冬蟲夏草劑量增加、或灌胃至采血的間隔時(shí)間延長(zhǎng)、以及所獲含藥血清的濃度增高,MsC的3H-TdR摻入量均隨之下降,提示MsC增殖受抑;而慢性腎衰竭大鼠的血清則可促進(jìn)MsC增殖。Lin等發(fā)現(xiàn),冬蟲夏草的甲醇提取物F-2具有抑制白細(xì)胞介素-1及白細(xì)胞介素-6引起的體外MsC活化(包括增殖及分泌細(xì)胞活性因子)。經(jīng)過(guò)硅膠柱色譜法及高效液相色譜法從F-2中進(jìn)一步提取出來(lái)的H1-A成分(麥角甾醇)同樣具有以上效果。2動(dòng)物模型研究2.1膽道疾病模型2.1.1腎損害:或不可逆性腎損害CsA已在器官移植抗排斥反應(yīng)及腎臟病治療上廣泛應(yīng)用,但是其腎毒性也受到很大關(guān)注。CsA慢性腎毒性的病理改變是腎間質(zhì)纖維化、腎小管萎縮及入球小動(dòng)脈透明樣變,為不可逆性腎損害。郭嘯華等在用百令菌粉及其提取液防治大鼠慢性CsA腎毒性的研究中發(fā)現(xiàn),與模型組比較,百令治療組大鼠的尿NAG酶及尿鈉排泄減少,尿滲透壓上升,血清肌酐(Scr)顯著下降,腎臟病理變化改善(腎小管上皮細(xì)胞空泡變性及壞死減輕,腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化減少,入球小動(dòng)脈透明樣變發(fā)生率降低)。2.1.2對(duì)腎間質(zhì)纖維化的作用慢性馬兜鈴酸腎病是長(zhǎng)期小量服用含AA中草藥引起的慢性間質(zhì)性腎病,其病理改變以寡細(xì)胞性腎間質(zhì)纖維化為主要特征。張聰?shù)扔煤倭罹鄣摹耙婺I軟堅(jiān)散”給慢性馬兜鈴酸腎病模型大鼠灌胃,與未進(jìn)行干預(yù)的模型組比較,治療組大鼠的尿β2微球蛋白(β2-mG)及Scr水平均顯著下降,腎間質(zhì)纖維化面積顯著縮少,腎組織的促細(xì)胞外基質(zhì)合成因子(如TGF-β1和CTGF)及抗細(xì)胞外基質(zhì)降解因子(如TIMP-1和纖溶酶原激活劑抑制物-1,即PAI-1)表達(dá)顯著下調(diào)。而后,朱運(yùn)峰等用用百令菌粉單方重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),也獲得了相似結(jié)果。這些動(dòng)物整體試驗(yàn)結(jié)果與該研究組的前述細(xì)胞水平研究結(jié)果相呼應(yīng),有力地顯示冬蟲夏草制劑確能有效拮抗AA的致腎間質(zhì)纖維化效應(yīng)。該研究組柴晶晶等的實(shí)驗(yàn)還顯示,百令菌粉拮抗慢性馬兜鈴酸腎病腎間質(zhì)纖維化及改善腎功能的效應(yīng),還能夠通過(guò)抑制腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化獲得,且與抑制腎組織TGF-β1及Snail的表達(dá)相關(guān)。劉茂東等用冬蟲夏草懸液給慢性馬兜鈴酸腎病大鼠灌胃,也見到了與上相似的腎臟保護(hù)作用。2.1.3其他慢性腎間質(zhì)纖維模型2.1.3.bmp-7在肝腎間質(zhì)纖維化中的表達(dá)變化趙德安等的實(shí)驗(yàn)顯示,腺嘌呤誘導(dǎo)建立的腎小管間質(zhì)纖維化大鼠模型,經(jīng)過(guò)百令菌粉干預(yù)后,腎小管間質(zhì)中的骨形成蛋白-7(BMP-7)表達(dá)顯著上調(diào),α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和TGF-β1表達(dá)顯著下調(diào),腎小管間質(zhì)纖維化病理改變明顯減輕。BMP-7能通過(guò)拮抗TGF-β1誘導(dǎo)的Smad信號(hào)途徑而防止腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,減輕腎小管間質(zhì)纖維化。李暖等同樣利用腺嘌呤導(dǎo)致的大鼠腎小管間質(zhì)纖維化模型,觀察百令菌粉對(duì)病變進(jìn)展的干預(yù)效果,結(jié)果顯示早期干預(yù)可顯著減少尿蛋白,減少尿NAG酶,改善腎功能(Scr及血尿素氮),減輕腎小管間質(zhì)病理改變(腎小管上皮細(xì)胞變性及腎間質(zhì)纖維化),誘導(dǎo)腎組織中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)高表達(dá),并抑制TGF-β1表達(dá)。2.1.3.腎組織中tgf-1、-sma及型膠原表達(dá)的比較閔亞麗等發(fā)現(xiàn),通過(guò)結(jié)扎單側(cè)輸尿管建立的腎小管間質(zhì)纖維化大鼠模型,經(jīng)冬蟲夏草提取液治療后,其腎組織中的TGF-β1、α-SMA及Ⅳ型膠原的表達(dá)均較模型組顯著降低。2.1.4胞損傷、最重要氨基糖苷抗生素腎損害在臨床頗常見。氨基糖苷很容易在腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)蓄積,進(jìn)而破壞溶酶體,刺激氧自由基產(chǎn)生,影響能量代謝及鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn),最后導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞損傷、甚至壞死。黎磊石等通過(guò)氨基糖苷急性腎損傷大鼠模型的研究,觀察到冬蟲夏草有如下幾方面干預(yù)作用:(1)降低氨基糖苷腎損害大鼠的Scr、尿NAG酶及尿鈉排泄,減輕菊粉清除率的下降。(2)減輕溶酶體損傷,穩(wěn)定溶酶體。(3)防止腎皮質(zhì)組織鈣含量升高,而腎皮質(zhì)鈣離子濃度與腎小管上皮細(xì)胞損傷、壞死程度呈正相關(guān)。(4)維持超氧化物歧化酶(SOD)活性,減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛產(chǎn)生及自由基所致細(xì)胞損傷。后三方面正是冬蟲夏草防治氨基糖苷急性腎損傷的可能機(jī)制。2.1.5對(duì)腎活檢損傷的作用廖洪軍等用冬蟲夏草煎劑防治大鼠缺血性急性腎衰竭,發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草可顯著減少大鼠尿NAG酶及尿溶菌酶,降低Scr升高幅度,加快Scr恢復(fù)速度,提示冬蟲夏草對(duì)腎缺血再灌注損傷有明確療效。2.2腎疾病模型2.2.1免疫熒光對(duì)大鼠腎組織免疫相關(guān)指標(biāo)的影響文蓉珠等發(fā)現(xiàn),在造模同時(shí)予以冬蟲夏草醇提液,IgA腎病小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率與吞噬指數(shù)均增高,循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)減少,與模型組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示蟲草可改善單核-巨噬系統(tǒng)的功能,降低CIC。蟲草治療組大鼠的腎組織免疫熒光IgA較模型組弱,作者認(rèn)為這可能與CIC下降導(dǎo)致腎小球系膜區(qū)IgA免疫復(fù)合物沉積減少、或系膜區(qū)巨噬細(xì)胞功能增強(qiáng)導(dǎo)致IgA免疫復(fù)合物局部清除增加相關(guān)。Lin等利用R36A(肺炎鏈球菌C多糖)與抗R36A的IgA單克隆抗體誘發(fā)大鼠產(chǎn)生IgA腎病模型,以此模型進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),含冬蟲夏草甲醇提取物F-2的飼料能減輕模型大鼠的血尿及蛋白尿,并顯著減輕腎臟病理?yè)p害(免疫熒光檢查系膜區(qū)IgA及C3沉積減少,光鏡檢查系膜細(xì)胞增殖及系膜基質(zhì)增加程度減輕)。另外,從F-2中進(jìn)一步提取出來(lái)的H1-A成分(麥角甾醇)也能獲得同樣干預(yù)效果。2.2.2干預(yù)前后大鼠尿蛋白及腎功能指征的比較被動(dòng)性Heymann腎炎(PHN)的發(fā)病機(jī)制及病理表現(xiàn)與人類膜性腎病十分相似,故常用其作為研究人類膜性腎病的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀＠钭育埖扔枚x夏草多糖給PHN模型大鼠灌胃,與未干預(yù)的模型組大鼠比較,干預(yù)組大鼠尿蛋白顯著下降,腎小球毛細(xì)血管壁上IgG及C3沉積明顯減少,上皮下電子致密物也明顯減少,腎小球基底膜上陰電荷丟失減輕。作者推論冬蟲夏草可能通過(guò)抑制腎小球原位免疫復(fù)合物形成及補(bǔ)體激活,而保護(hù)基底膜陰電荷屏障,減少尿蛋白排泄。2.2.3糖尿病和腎病的模型2.2.3.解決保肝作用的四氧氧化酶gsp-1高血糖是導(dǎo)致糖尿病腎病的重要因素,冬蟲夏草多糖可通過(guò)刺激機(jī)體胰島素分泌或(和)減少胰島素降解而降低血糖。Li等研究發(fā)現(xiàn),從冬蟲夏草菌絲體提取獲得的蟲草多糖GSP-1,可明顯提高四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠及鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的血漿胰島素水平,降低血糖。Zhang等利用鏈脲佐菌素糖尿病大鼠模型,觀察冬蟲夏草多糖成分對(duì)血糖的影響,發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草多糖能使血糖水平顯著下降(降達(dá)60%~70%)。2.2.3.腎病大鼠的平均動(dòng)脈收縮壓方敬愛等發(fā)現(xiàn),百令膠囊可降低鏈脲佐菌素誘導(dǎo)發(fā)生的糖尿病腎病大鼠的平均動(dòng)脈收縮壓,并且降低血糖、減少尿蛋白排泄、改善腎功能及腎臟病理變化。有報(bào)道冬蟲夏草中的有效成分腺苷對(duì)血管平滑肌有直接舒張作用,故其降壓作用可能與此相關(guān)。2.2.3.降血糖、降脂活性用從冬蟲夏草菌絲體提取物多糖CS-F30給鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病小鼠作腹腔注射,可降低小鼠的血糖、血漿膽固醇及三酰甘油水平,顯示CS-F30具有良好的降血糖及血脂活性。崔海月亦發(fā)現(xiàn),冬蟲夏草喂飼可使鏈脲佐菌素誘發(fā)的糖尿病腎病大鼠的血糖、血膽固醇及三酰甘油水平降低,改善腎功能,減輕腎臟病理改變。2.2.3.保通因子e-鈣黏素及tgf-dmrna表達(dá)金永東等報(bào)道,鏈脲佐菌素誘發(fā)的糖尿病腎病大鼠腎小管上皮細(xì)胞的TGF-β1、α-SMA、整合素連接激酶(ILK)表達(dá)均顯著高于正常對(duì)照組,E-鈣黏素的表達(dá)顯著低于對(duì)照組,腎小管間質(zhì)損傷指數(shù)及腎間質(zhì)膠原面積也顯著增加,而予冬蟲夏草干預(yù)后上述指標(biāo)均顯著減輕。崔海月等也發(fā)現(xiàn),冬蟲夏草能使鏈脲佐菌素所致糖尿病腎病大鼠腎組織中的TGF-β1mRNA表達(dá)下調(diào)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,促細(xì)胞外基質(zhì)合成因子(如TGF-β1、ILK)及腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化均可能參與了糖尿病腎病的腎組織纖維化進(jìn)程,而冬蟲夏草制劑對(duì)此具有拮抗作用。2.2.3.對(duì)腎組織凋亡的影響腎臟固有細(xì)胞凋亡是腎臟纖維化過(guò)程的一個(gè)重要組成部分。呂秀芳等建立了2型糖尿病腎病大鼠模型,采用Hoechst熒光染色法觀察腎組織的細(xì)胞凋亡數(shù),發(fā)現(xiàn)模型組大鼠的凋亡細(xì)胞數(shù)顯著多于正常大鼠,而冬蟲夏草治療組大鼠的凋亡細(xì)胞數(shù)卻顯著少于模型組,治療組大鼠的腎功能也顯著改善(肌酐清除率較高,血尿素氮較低)。2.3降血糖的治療冬蟲夏草在慢性腎衰竭中表現(xiàn)出多方面作用,包括減少尿蛋白排泄、改善蛋白質(zhì)、脂及鈣磷代謝,延緩腎損害進(jìn)展等。陸曉東報(bào)道百令膠囊可明顯升高5/6腎切除大鼠的血紅蛋白,降低Scr及血尿素氮,