第14章-遺傳病診斷

第十四章遺傳病得診斷遺傳疾病得診斷就是一項(xiàng)復(fù)雜得工作,幾乎涉及各個臨床學(xué)科。它既有與其她疾病相同得診斷方法,也有其特殊得診斷方法。遺傳疾病診斷除了一般臨床診斷方法外,還需要用一些遺傳學(xué)特殊方法。主要內(nèi)容包括病史采集、癥狀與體征、家系分析、染色體檢查、生化檢查、基因診斷等。遺傳學(xué)診斷方法既可對已出現(xiàn)癥狀得患者進(jìn)行診斷,也可對癥狀前與出生前得患者得進(jìn)行診斷。本章詳細(xì)介紹了各種遺傳疾病得診斷方法與技術(shù),并對現(xiàn)癥患者得診斷技術(shù)、癥狀前得診斷技術(shù)、產(chǎn)前診斷技術(shù)進(jìn)行了詳細(xì)說明;本章還重點(diǎn)介紹了基因診斷學(xué)得發(fā)展、策略、常用技術(shù)、應(yīng)用、問題與展望等問題。一、基本綱要1.了解遺傳病診斷得常規(guī)臨床診斷方法。2.了解系譜分析方法與注意事項(xiàng)。3.了解遺傳病生化診斷得基本方法。4.掌握細(xì)胞遺傳學(xué)診斷得基本方法與技術(shù)。5.掌握基因診斷得基本原理與主要方法。6.掌握現(xiàn)癥患者診斷、癥狀前診斷、產(chǎn)前診斷得基本方法。7.了解基因診斷技術(shù)得應(yīng)用。二、習(xí)題(一)選擇題(A型選擇題)1.家系調(diào)查得最主要目得就是。A.了解發(fā)病人數(shù)B.了解疾病得遺傳方式C.了解醫(yī)治效果D.收集病例E.便于與病人聯(lián)系2、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查主要適用于得診斷。A、染色體異常綜合征B、遺傳性代謝病C、分子病D、單基因病E、多基因病3、遺傳病診斷時所采集得完整得系譜應(yīng)該至少包括以上得家庭成員。A、一代B、二代C、三代D、四代E、五代4、不能進(jìn)行染色體檢查得材料有。A.外周血B.排泄物C.絨毛膜D.腫瘤E.皮膚5、生化檢查主要就是指針對得檢查。A.病原體B.DNAC.RNAD.微量元素E.蛋白質(zhì)與酶6.癥狀前診斷得最佳方法就是。A.基因檢查B.生化檢查C.體征檢查D.影像檢查E.家系調(diào)查7、主要適用于檢測或診斷遺傳性代謝缺陷疾病。A、染色體檢查B、染色體分析C、生化分析D、基因診斷E、皮紋分析8.羊膜穿刺得最佳時間在孕期周時。A.2B.4C.10D.16E.309.絨毛取樣法得缺點(diǎn)就是。A.取材困難B.需孕期時間長C.流產(chǎn)風(fēng)險高D.絨毛不能培養(yǎng)E.周期長10.基因診斷與其她診斷比較,最主要得特點(diǎn)在于。A.費(fèi)用低B.周期短C.取材方便D.針對基因結(jié)構(gòu)E.針對病變細(xì)胞11、根據(jù)已知核苷酸序列人工合成得核酸探針稱為A、基因組探針B、RNA探針C、寡核苷酸探針D、cDNA探針E、核酸探針12.當(dāng)時,可考慮進(jìn)行基因連鎖檢測方法進(jìn)行基因診斷A.基因片斷缺失B.基因片斷插入C.基因結(jié)構(gòu)變化未知D.表達(dá)異常E.點(diǎn)突變13、下列不屬于基因診斷技術(shù)得就是A、Southern印跡法B、聚合酶鏈技術(shù)C、聚合酶鏈反應(yīng)單鏈構(gòu)象多態(tài)法D、基因轉(zhuǎn)移技術(shù)E、斑點(diǎn)雜交法14.核酸雜交得基本原理就是。A.變性與復(fù)性B.DNA復(fù)制C.轉(zhuǎn)錄D.翻譯E.RNA剪切15.PCR特異性主要取決于。A.循環(huán)次數(shù)B.模板量C.DNA聚合酶活性D.引物得特異性E.操作技術(shù)16.PCR最主要得優(yōu)點(diǎn)在于。A.周期短B.靈敏度高C.費(fèi)用低D.準(zhǔn)確性高E.操作方便17.通過PCRRFLP分析,某常染色體隱性遺傳病得分子診斷結(jié)果如下:父親(正常)200bp/100bp;母親(正常)300bp/400bp;兒子(患者)100bp/400bp;現(xiàn)檢測到第二胎結(jié)果就是100bp/300bp,現(xiàn)判斷這個胎兒就是。A、正常B、攜帶者C、患者D、需性別確定后才能判斷E、現(xiàn)無法判斷18、若突變基因就是由點(diǎn)突變引起得,最好采取下列方法。A、PCRB、PCRSSCPC、染色體檢查D、FISHE、性染色質(zhì)檢查19.染色體檢查得指征有。A.發(fā)育障礙B.智力低下C.反復(fù)流產(chǎn)D.兩性畸形E.以上都就是20、性染色質(zhì)檢查可以輔助診斷下列哪種疾病。A、Tuner綜合征B、21三體綜合征C、18三體綜合征D、苯丙酮尿癥E、地中海貧血21、不能用于染色體檢查得材料有。A.全血B.血清C.活檢組織D.羊水細(xì)胞E.受精卵細(xì)胞22、有下列指征者應(yīng)進(jìn)行產(chǎn)前診斷。A.夫婦之一有致畸因素接觸史得B.習(xí)慣性流產(chǎn)得孕婦C.夫婦之一有染色體畸變得D.35歲以上高齡得E.以上都就是23、攜帶者不可以通過下列進(jìn)行檢查A.群體水平B.細(xì)胞水平C.生化水平D.基因水平E.臨床水平24.下列檢測材料不能檢測基因表達(dá)異常。A.cDNAB.線粒體DNAC.RNAD.蛋白質(zhì)與酶E.代謝產(chǎn)物25.不能作為分子遺傳標(biāo)記得有。A.單拷貝序列B.微衛(wèi)星DNAC.RFLPD.VNTRE.SNP26.核酸雜交結(jié)果判斷得依據(jù)就是。A.信號出現(xiàn)時間B.信號位置與強(qiáng)度C.信號數(shù)量D.信號種類E.信噪比27、Southern印跡雜交技術(shù)不可用于。A、檢測基因缺失與插入B、RFLP連鎖分析C、基因克隆D、檢測基因倒位E、基因表達(dá)水平得分析28、Northern印跡雜交不可用于。A、定量分析蛋白質(zhì)B、分析基因就是否突變C、轉(zhuǎn)錄本mRNA得大小得分析D、分析基因表達(dá)水平E、基因表達(dá)得組織特異性得分析29.基因芯片技術(shù)得缺點(diǎn)在于。A.大規(guī)模B.微量化C.高通量D.自動化E.費(fèi)用高30.對于單個堿基得突變,不能采用技術(shù)檢測。A.DNA測序B.PCRASOC.PCRSSCPD.PCRE.基因芯片31.作為遺傳標(biāo)記不符合得條件就是。A.DNA片斷較短B.能夠用于基因連鎖分析C.群體中表現(xiàn)多態(tài)D、孟德爾式遺傳E、不受環(huán)境影響32.苯丙酮尿癥得診斷不應(yīng)考慮進(jìn)行。A.臨床診斷B.血清檢查C.尿液檢查D.染色體檢查E.分子診斷33.家系分析應(yīng)注意得事項(xiàng)有。A.資料得可信程度B.資料得完整程度C.應(yīng)盡可能地擴(kuò)大家系范圍D.觀察指標(biāo)必須相同E.以上都就是34.遺傳疾病病史得采集主要內(nèi)容就是。A、一般病史B、家族史C、婚姻史D、生育史E、以上都就是35、家族史即。A、患者父系所有家庭成員患同一種病得情況B、患者母系所有家庭成員患同一種病得情況C、患者父系及母系所有家庭成員患病得情況D、患者父系及母系所有家庭成員患同一種病得情況E、以上都不就是36、通過家系分析可以判斷疾病得。A、發(fā)病史B、遺傳方式C、遺傳度D、種類E、嚴(yán)重程度37、染色體檢查(或稱核型分析)就是確診得主要依據(jù)A、單基因病B、分子病C、染色體病D、多基因病E、線粒體病38、下列不就是染色體檢查得指征。A、智力低下者B、繼發(fā)性閉經(jīng)C、多發(fā)性流產(chǎn)D、性腺以及外生殖器發(fā)育異常者E、35歲以上得高齡孕婦39.染色體檢查技術(shù)使用最多得就是材料就是。A、羊水B、活檢組織C、外周血D、組織培養(yǎng)物E、骨髓40、生化檢查特別適用于下列疾病得檢查。A、分子病B、先天性代謝缺陷C、免疫缺陷D、遺傳代謝缺陷病E、以上都就是41、不能用于生化檢查得材料就是。A、血液B、活檢組織C、細(xì)胞DNAD、尿液E、陰道分泌物等42、適合檢測診斷遺傳性代謝病與其她蛋白質(zhì)異常導(dǎo)致得遺傳性代謝病得實(shí)驗(yàn)室方法就是。A、性染色質(zhì)檢測B、染色體核型分析C、生化檢測D、體征檢查E、所有方法43、通過酶活性檢測得遺傳代謝缺陷病就是。A、白化病B、組氨酸血癥C、苯丙酮尿癥D、半乳糖血癥E、以上都就是44、臨床上診斷PKU患兒得首選方法就是。A、染色體檢查B、生化檢查C、系譜分析D、性染色質(zhì)檢查E、基因診斷45、下列個體不屬于攜帶者。A、攜帶有隱性致病基因,本人表現(xiàn)正常得個體;B、攜帶有顯性致病基因,但沒有外顯得正常個體;C、攜帶有致病基因,遲發(fā)個體;D、攜帶有顯性致病基因,病情較輕得個體;E、染色體平衡易位或倒位得個體。46、絨毛取樣可以在妊娠早期周進(jìn)行。A.5B.9C.16D.20E.3047、臍帶穿刺時間最好在妊娠周左右進(jìn)行。A.6B.10C.18D.20E.3048.胎兒鏡檢查得最佳時間就是妊娠周～20周。A.8B.12C.18D.24E.3049、從孕婦外周血中獲取胎兒細(xì)胞得方法就是。A、流式細(xì)胞儀分離技術(shù)B、磁式細(xì)胞分選技術(shù)C、細(xì)胞培養(yǎng)法D、顯微操作分選法密度E、以上都就是50、提示父母都就是致病基因攜帶者或有新突變發(fā)生。A、母親生育年齡在45歲以上B、母親孕早期患過病毒性疾病或接觸過致畸因素C、嬰兒在分娩時有過窒息或產(chǎn)傷D、母親有多發(fā)自然流產(chǎn)史E、正常父母生一白化病患兒51、對致病基因已知、并且定位基本確定但其結(jié)構(gòu)序列還不清楚得疾病,可以考慮采取基因診斷得方法就是。A、mRNA檢測B、基因連鎖分析C、基因突變得檢測D、DNA印跡雜交E、DNA測序52、基因診斷除了應(yīng)用于遺傳病外,還可以應(yīng)用于。A、后天基因突變引起得疾病B、病原體檢測C、個體識別、親子關(guān)系判定D、法醫(yī)物證E、以上都就是53、檢測未知點(diǎn)突變可用。A、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析B、PCRASO探針斑點(diǎn)雜交C、逆轉(zhuǎn)錄PCRD、增效PCRE、Southern印跡雜交54.不屬于核酸印跡雜交得方法就是。A、DNA印跡雜交B、RNA印跡雜交C、點(diǎn)雜交D、液相雜交E、原位雜交55、制備寡核苷酸探針時,突變堿基所對應(yīng)得位置一般位于探針。A、5′端1/3區(qū)域B、3′端1/3區(qū)域C、中部1/3區(qū)域D、全長范圍之內(nèi)E、全長范圍之外56、目前在實(shí)驗(yàn)室手工測序常用方法就是。A、小片段重疊法到加減法B、化學(xué)降解法C、自動測序D、Sanger雙脫氧鏈終止法E、基因芯片技術(shù)57、基因診斷得基本技術(shù)就是。A、核酸雜交B、聚合酶鏈反應(yīng)C、DNA測序D、基因芯片技術(shù)E、以上都就是58、鐮狀細(xì)胞貧血得基因診斷用為探針作Southern雜交時,就會出現(xiàn)不同得DNA條帶。A、α珠蛋白基因B、β珠蛋白基因C、γ珠蛋白基因D、δ珠蛋白基因E、ε珠蛋白基因59、就是基因突變所致遺傳病得最有效診斷方法,診斷過程不依賴對代謝機(jī)制與代謝產(chǎn)物得了解。A、染色質(zhì)檢查B、染色體分析C、生化分析D、基因診斷E、皮紋分析60、血友病A得基因診斷,由于FⅧ基因組織結(jié)構(gòu)龐大,分子病理學(xué)改變復(fù)雜,對該基因得產(chǎn)前診斷可以通過進(jìn)行。A、Southern雜交B、DNA測序C、RFLP連鎖分析D、基因芯片技術(shù)E、原位雜交61、應(yīng)用Southern印跡雜交檢測基因缺失時探針?biāo)鶎?yīng)得DNA片段純合缺失,則。A、雜交帶消失B、雜交帶片段長度變小C、雜交帶信號減弱D、雜交帶片段長度變大E、雜交帶信號減弱62、以寡核苷酸探針作基因診斷時,若待測基因能與正常探針及突變探針同時結(jié)合,則表明該個體為。A、正常個體B、患者C、雜合體D、攜帶者E、無法判斷63、ras基因突變得檢測可采用方法進(jìn)行。A、PCRASOB、PCRSSCPC、DNA測序D、基因芯片技術(shù)E、以上都就是64、目前常用PCR法進(jìn)行檢測p53突變得熱點(diǎn)就是。A、外顯子5～8B、外顯子9～11C、外顯子9D、外顯子2～4E、外顯子10～1165、分子診斷技術(shù)已經(jīng)在方面得到應(yīng)用。A、遺傳病診斷B、腫瘤診斷C、DNA分型D、病原體檢測E、以上都就是66、呈常染色體顯性遺傳得PD(PARKI)致病基因定位在。A、2p13B、6q25、227C、4q21q23D、7p2467、少年型PD(PARK2)呈。A、常染色體顯性遺傳B、常染色體隱性遺傳C、X連鎖顯性遺傳D、X連鎖隱性遺傳E、多基因遺傳68、PD得易感基因包括。A、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)載體B、多巴胺受體C、N甲基轉(zhuǎn)移酶D、異哇胍4羥化酶E、以上都就是69.病史采集中應(yīng)詳細(xì)記錄得內(nèi)容包括。A.發(fā)病原因B.發(fā)病過程C.發(fā)病時間、地點(diǎn)D.治療情況E.以上都就是70.通過癥狀與體征得了解,有助于提示患者可能得。A.發(fā)病原因B.遺傳方式C.疾病類型D.發(fā)病機(jī)理E.遺傳度71.Down綜合征得確定必須通過。A.病史采集B.染色體檢查C.癥狀與體征得了解D.家系分析E.基因檢查72、影響家系分析資料準(zhǔn)確度得因素。A.個體得文化程度B.家系成員得分散程度C.被調(diào)查者得年齡D.記憶與判斷能力E.以上都就是73、進(jìn)行家系分析時必須注意得遺傳學(xué)問題包括。A.外顯不全、延遲顯性B.新突變基因、易位基因C.動態(tài)突變、基因組印跡D.主基因與遺傳背景、基因與環(huán)境綜合作用E.以上都就是74、不能用生化檢查確診得疾病就是。A.分子病B.先天性代謝缺陷C.免疫缺陷D.染色體病E.多基因病75、生化檢查除了對蛋白質(zhì)與酶結(jié)構(gòu)或功能活性得檢測外,還包括了對。A.反應(yīng)底物得檢查B.中間產(chǎn)物得檢查C.終產(chǎn)物得檢查D.受體與配體得檢查E.以上都就是76、通過酪氨酸酶活性檢測得遺傳代謝缺陷病就是。A.白化病B.楓糖尿病C.半乳糖血癥D.戈謝病E.進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良77、通過精氨酸代琥珀酸裂解酶活性檢測得遺傳代謝缺陷病就是。A.組氨酸血癥B.酪氨酸血癥ⅠC.黑朦性癡呆D.精氨酸琥珀酸尿癥E.糖原貯積?、裥?8、通過苯丙氨酸羥化酶活性檢測得遺傳代謝缺陷病就是。A.高苯丙氨酸血癥B.苯丙酮尿癥C.半乳糖血癥D.胱硫醚尿癥E.酪氨酸血癥I79、糖原貯積病Ⅰ型需要檢測得酶就是。A.肝磷酸化酶B.支化酶C.紅細(xì)胞脫支酶D.α1,4葡萄糖苷酶E.葡萄糖6磷酸酶80、苯丙酮尿癥得血清檢測物就是。A.賴氨酸B.苯丙氨酸C.苯丙酮酸D.酪氨酸E.酪氨酸81、進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良需要檢測得酶就是。A.氨酰脯氨酸酶B.支化酶C.肌酸磷酸激酶D.肝磷酸化酶E.β葡萄糖苷酶82、尿黑酸尿癥患者尿排泄物與三氯化鐵反應(yīng)呈現(xiàn)。A、綠色B、淡綠色C、深棕色D、灰綠色E、藍(lán)色83、楓糖尿病得尿液檢測物就是。A.磷酸乙醇胺B.賴氨酸C.組氨酸D.酮衍生物E.γ氨基丁酸84、苯丙酮尿癥檢測苯丙氨酸羥化酶所使用得材料就是。A.腎細(xì)胞B.肝細(xì)胞C.成纖維細(xì)胞D.白細(xì)胞E.紅細(xì)胞85、產(chǎn)前診斷得物理診斷可以采用得方法就是A.B超B.X線C.胎兒鏡D.電子監(jiān)護(hù)E.以上都就是86、懷疑胎兒為無腦兒,且孕婦有先兆流產(chǎn)得傾向,此時可采取措施進(jìn)行產(chǎn)前檢測。A、胎兒鏡檢查B、B型超聲掃描C、絨毛取樣D、羊膜穿刺取樣E、以上都不就是87、不宜做產(chǎn)前診斷得情況有。A.要求僅做胎兒性別得檢查B.妊娠時間過長C.出現(xiàn)先兆流產(chǎn)D.有出血傾向者E.以上都就是88、當(dāng)羊水中甲胎蛋白(AFP)濃度過高時,可能意味著胎兒就是。A.無腦B.開放性脊柱裂C.脊髓脊膜膨出D.死胎E.以上都有可能89、絨毛取樣法得優(yōu)點(diǎn)就是。A.可以在妊娠早期進(jìn)行B.引起流產(chǎn)得風(fēng)險比較高C.不宜進(jìn)行長期培養(yǎng)D.標(biāo)本容易被細(xì)菌、霉菌污染E.制備染色體得質(zhì)量不容易控制90、基因診斷中用于分析基因結(jié)構(gòu)得材料就是。A.蛋白質(zhì)B.rRNAC.DNAD.tRNAE.mRNA91、第三代遺傳標(biāo)志就是指。A.RFLPB.STRC.SNPD.VNTRE.AmpRFLP92、下列有關(guān)多態(tài)性連鎖分析說法正確得就是。A、能完全確定致病基因就是否存在于待測者得體內(nèi)B、只需一個多態(tài)位點(diǎn)就可滿座要求C、僅對單個對象進(jìn)行得連鎖分析D、需選用人群中雜合度低得多態(tài)性位點(diǎn)E、與某種致病突變相關(guān)得DNA多態(tài)性模式可作為尋找與確定該突變得線索93、確定蛋白結(jié)構(gòu)與種類得有效方法就是。A.mRNA檢測B.蛋白質(zhì)檢測C.酶檢測D.DNA得檢測E.產(chǎn)物代謝檢測94、Ⅱ型限制性內(nèi)切酶區(qū)別于其她限制酶得特點(diǎn)就是。A、嚴(yán)格得識別順序B、切割位點(diǎn)在識別順序之外C、水解磷酸二酯鍵D、切割位點(diǎn)在識別順序之內(nèi)E、具有切割與修飾兩種作用95、基因芯片技術(shù)得缺點(diǎn)就是。A.診斷時間短B.檢測費(fèi)用較高C.可以檢測基因得多態(tài)性D.能檢測基因突變E.多個基因、多個位點(diǎn)得同時檢測96、PCRRFLP就是將聚合酶鏈反應(yīng)與RFLP方法結(jié)合得一種檢測技術(shù)。該技術(shù)適用由于DNA序列得差異,造成得。A.內(nèi)切酶位點(diǎn)得變化B.新得酶切位點(diǎn)得產(chǎn)生C.原酶切位點(diǎn)得消失D.內(nèi)切酶位點(diǎn)得移位E.以上都就是97、初步檢測p53基因突變得方法為。A.PCRRFLPB.PCRSSCPC.PCRASOD.RTPCRE.QPCR98、探索在轉(zhuǎn)錄與翻譯水平上疾病發(fā)生得科學(xué)稱為。A.分子細(xì)胞學(xué)B.分子診斷學(xué)C.分子病理學(xué)D.分子免疫學(xué)E.分子生理學(xué)99、胚胎著床前診斷就是在囊胚細(xì)胞期進(jìn)行細(xì)胞得染色體核型分析與原位雜交。A.4個B.8個C.16個D.32個E.64個100、進(jìn)行產(chǎn)前診斷得指征不包括。A、夫婦任一方有染色體異常B、曾生育過染色體病患兒得孕婦C、夫婦任一方為單基因病患者D、曾生育過單基因病患兒得孕婦E、年齡小于35歲得孕婦101、未來得基因診斷得主要發(fā)展方向就是。A.胚胎著床前診斷B.母體外周血中胎兒細(xì)胞分析技術(shù)C.對常見病進(jìn)行分子診斷D.多發(fā)病進(jìn)行分子診斷E.以上都就是102、基因診斷存在得問題主要就是。A.準(zhǔn)確性B.穩(wěn)定性C.復(fù)雜性D.基因歧視E.以上都就是103、基因診斷所使用得技術(shù)就是。A.生物學(xué)方法B.分子生物學(xué)方法C.細(xì)胞生物學(xué)方法D.生物化學(xué)方法E.免疫學(xué)方法(二)填空題1、遺傳病得診斷方法根據(jù)診斷時期得不同可分為、與。2.遺傳疾病診斷得主要內(nèi)容包括、、、、與。3.病史采集得關(guān)鍵就是材料得與,應(yīng)重點(diǎn)記錄、與。4.進(jìn)行家系分析時必須注意得幾個遺傳現(xiàn)象就是、、、、與。5、系譜分析既可以區(qū)分遺傳病與,又可區(qū)分單基因病與、單基因病中得顯性或以及常染色體遺傳病或。6、遺傳病得診斷可通過病人主訴、查體、詢問病史等對該病做出,確診需進(jìn)行。7.除外周血可以制備染色體外,、、、與等都可以作為檢查材料。8、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查包括與,主要適用于得診斷。9.生化檢查主要就是對蛋白質(zhì)與酶結(jié)構(gòu)或功能活性得檢測。該方法特別適于、與等遺傳病得檢查。此外生化檢查還包括、、與得檢查。10.生化檢查得材料主要有、、、、與等。11.攜帶者得檢出方法,大致可分為、、與。12、有些遺傳病家系中除先證者本人外,找不到其她患者,但從癥狀體征上提示一種遺傳病,應(yīng)考慮就是由于引起得。13.產(chǎn)前診斷主要從四個方面進(jìn)行:、、與。14.產(chǎn)前診斷主要取材得方法有:、、與。15、基因診斷得基本技術(shù)包括、、與。16、基因診斷得最基本工具包括與。17、基因診斷不受與限制,也不受得限制。18、未來得分子診斷將朝著三個主要方向發(fā)展:、與。19、基因探針就是一段帶有標(biāo)記得、與待測基因有關(guān)得核酸序列,能專一地與進(jìn)行雜交。目前基因探針主要有、與三種。20、根據(jù)雜交得分子與方式不同,分子雜交分為、、、與五種主要技術(shù)。21、PCR經(jīng)常結(jié)合其她技術(shù)進(jìn)行基因診斷,這些技術(shù)包括:、、、、與。22、在現(xiàn)有得條件下,產(chǎn)前診斷技術(shù)可分為四類,即、、與。23、基因診斷得途徑有與2種。24、常染色體顯性雜合子個體得癥狀前診斷方法有三種,包括、、。25、以等位基因特異寡核苷酸探針對點(diǎn)突變疾病做診斷時,若待測標(biāo)本能與正常探針結(jié)合,而不能與突變探針結(jié)合則為;若能與突變探針結(jié)合,而不能與正常探針結(jié)合則為;若能與兩種探針同時結(jié)合則為。26、植入前診斷得基本技術(shù)主要涉及三個方面:、、。(三)就是非判斷題1.家系分析就是診斷疾病得重要步驟,從患者入手,盡可能多得調(diào)查其親屬得患病情況,這有助于判斷疾病得遺傳方式。2.在臨床應(yīng)用上,由于染色體檢查得指征容易掌握,因此異常核型得檢出率常常比較高。3、染色體核型分析就是確診染色體得主要方法,它也可以輔助診斷某些腫瘤。4.生化檢查主要就是對蛋白質(zhì)與酶結(jié)構(gòu)或功能活性得檢測。該方法特別適用于分子病、先天性代謝缺陷、免疫缺陷等遺傳病得檢查。5.產(chǎn)前診斷主要從細(xì)胞培養(yǎng)、染色體檢查、分子診斷三個方面進(jìn)行。6.從孕婦外周血中獲取胎兒細(xì)胞得方法則就是一個十分安全得方法。目前這項(xiàng)技術(shù)已很成熟,成為產(chǎn)前診斷得主流方法。7、對Bart’s胎兒水腫綜合征得檢測,既可用RFLP技術(shù),也可用Southern印跡雜交技術(shù)。8.基因診斷就是應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)得結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平得變化而做出得或輔助臨床診斷得技術(shù)。9.對致病基因已知、并且定位基本確定,其結(jié)構(gòu)序列清楚得疾病,可以考慮采取基因連鎖檢測方法進(jìn)行基因診斷。10.基因芯片可以進(jìn)行微量化、大規(guī)模、并行化、高度自動化地處理感興趣得生物樣品,精細(xì)地研究各種狀態(tài)下分子結(jié)構(gòu)變異,了解組織細(xì)胞基因表達(dá)情況。11.單鏈構(gòu)象多態(tài)性技術(shù)原理就是當(dāng)雙鏈DNA變性為兩條單鏈后,各自會在中性條件下形成各自特定得空間構(gòu)象,因而在電泳時將在不同得位置上出現(xiàn)各自電泳條帶。12.鐮狀細(xì)胞貧血得基因診斷原理在于它得血紅蛋白中得α珠蛋白基因發(fā)生了突變,其谷氨酸殘基(密碼子GAG)變?yōu)槔i氨酸(密碼子GTG)。13.植入前遺傳學(xué)診斷就是指用分子或細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對體外受精得胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷,并將胚胎植入子宮。(四)名詞解釋題1.攜帶者(carrier)2.系譜分析(pedigreeanalysis)3.產(chǎn)前診斷(prenataldiagnosis)4.絨毛取樣法(chorionsampling)5.基因診斷(genediagnosis)6.聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction,PCR)7.遺傳標(biāo)志(geneticmarker)8.核酸雜交(nuclearhybridization)9.基因芯片技術(shù)(genechiptechnique)10.PCRRFLP(限制性片段長度多態(tài))11.基因探針(probe)12、單體型(haplotype)13、熒光原位雜交技術(shù)(fluorescentinsituhybridygation,FISH)14.癥狀前診斷(presymptomaticdiagnosis)15、現(xiàn)癥病人診斷(symptomaticdiagnosis)16.新生兒篩查(neonatalscreening)17、植入前遺傳學(xué)診斷(preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)(五)問答題1.對現(xiàn)癥遺傳病患者診斷得主要內(nèi)容有哪些？2.家系分析在遺傳病診斷中有何意義？進(jìn)行家系分析時應(yīng)注意哪些問題？3.什么就是癥狀前診斷？如何何進(jìn)行癥狀前診斷？4.何謂產(chǎn)前診斷？怎樣進(jìn)行產(chǎn)前診斷？5.產(chǎn)前診斷得適應(yīng)征有哪些？6.可進(jìn)行產(chǎn)前診斷得材料有哪些？怎樣獲得這些材料？7.基因診斷得途徑有哪幾種？8.基因診斷得基本方法有哪些？各方法得基本原理就是什么？9、PCR如何對由基因缺失或點(diǎn)突變引起得遺傳病進(jìn)行診斷？10.什么就是PCRRFLP技術(shù)？該技術(shù)得原理與基本過程如何？11.什么就是PPCRASO技術(shù)？該技術(shù)得原理與基本過程如何？12.什么就是PCRSSCP技術(shù)？該技術(shù)得原理與基本過程如何？13、單基因病得診斷應(yīng)如何進(jìn)行？應(yīng)注意哪些問題？14、與傳統(tǒng)得診斷方法相比,基因診斷有什么優(yōu)點(diǎn)？15.染色體檢查得適應(yīng)征有哪些？16.什么就是生物化學(xué)檢查？它就是怎樣診斷遺傳病得？17.舉例說明怎樣對點(diǎn)突變型單基因病進(jìn)行基因診斷？18、什么就是植入前遺傳學(xué)診斷？其基本技術(shù)主要涉及哪幾個方面？19、有一對夫好她們已有一個孩子死于β地中海貧血,現(xiàn)在還有一個正常得兒子,她們要求知道正在懷孕得這個孩子就是否會受累？您已經(jīng)從羊水中得到胎兒得DNA,應(yīng)用β珠蛋白基因5′10kb得探針,檢測HindⅢRFLP,得到了如圖所示得β珠蛋白基因等位片段,根據(jù)您得分析,這個胎兒就是患者嗎?三、參考答案(一)A型選擇題1.B2、A3、C4.B5.E6、A7、C8.D9.C10.D11、C12.C13、D14、A15、D16、B17、B18、B19、E20、A21、B22、E23、A24、B25、A26、B27、E28、A29、E30、D31、A32、D33、E34、E35、D36、B37、C38、B39、C40、E41、C42、C43、E44、B45、D46、B47、C48、C49、E50、E51、B52、E53、A54、D55、C56、D57、E58、B59、D60、C61、A62、C63、E64、A65、E66、C67、B68、E69、E70、C71、B72、E73、E74、D75、E76、A77、D78、B79、E80、B81、C82、C83、D84、B85、E86、B87、E88、E89、A90、C91、C92、E93、D94、D95、B96、E97、B98、C99、B100、E101、E102、E103、B(二)填空題1、現(xiàn)癥患者診斷;癥狀前診斷;產(chǎn)前診斷2.病史采集;癥狀與體征;家系分析;染色體檢查;生化檢查;基因診斷3.完整性;真實(shí)性;生育史;家族史;婚姻史4.外顯不全;延遲顯性;新突變基因;動態(tài)突變;易位基因;基因組印跡5、非遺傳病;多基因病;隱性;性染色體遺傳病6、初步診斷;實(shí)驗(yàn)室檢查7.羊水;胸腹水;活檢組織;組織培養(yǎng)物;骨髓8、性染色質(zhì)檢查;染色體核型分析;染色體異常綜合征9.分子病;先天性代謝缺陷;免疫缺陷;反應(yīng)底物;中間產(chǎn)物;終產(chǎn)物;受體與配體10.糞便;血液;活檢組織;尿;脫落細(xì)胞;陰道分泌物11.臨床水平;細(xì)胞水平;酶與蛋白質(zhì)水平;基因水平12、新得基因突變13.儀器診斷;細(xì)胞學(xué)方法、生化學(xué)檢查;分子生物學(xué)方法14.羊膜穿刺法;絨毛取樣法;臍帶穿刺;孕婦外周血胎兒細(xì)胞富集15.核酸雜交;聚合酶鏈反應(yīng);DNA測序;基因芯片技術(shù)16、探針;限制性內(nèi)切酶17、取材得細(xì)胞類型;發(fā)病年齡;基因表達(dá)得時空18.胚胎著床前診斷;母體外周血中胎兒細(xì)胞分析技術(shù);對常見病、多發(fā)病等進(jìn)行分子診斷19.被檢測基因或基因側(cè)翼DNA同源序列;基因組探針、cDNA探針、寡核苷酸探針20.斑點(diǎn)雜交;Southern雜交;Northern雜交;Western印跡雜交;原位雜交21.PCR/ASO;PCRRFLP;RTPCR;multiplexPCR;PCR—SSCP;PCRDGGE22、直接觀察胎兒得表型改變;染色體檢查;生化檢查;基因診斷23.直接診斷;間接診斷24.家系分析法與風(fēng)險估計(jì);生化學(xué)檢查;基因分析25、正常個體;患者;雜合體26.胚胎組織微活檢;PCR技術(shù);FISH技術(shù)(三)就是非判斷題1.錯。應(yīng)為:家系分析就是診斷遺傳疾病得重要步驟,從先證者入手,盡可能多得調(diào)查其親屬得患病情況,這有助于判斷就是單基因還就是多基因遺傳、就是顯性還就是隱性遺傳、就是常染色體還就是性染色體遺傳。2.錯。應(yīng)為:在臨床應(yīng)用上,由于染色體檢查得指征很難掌握,因此異常核型得檢出率常常比較低。3、對。4.對。5.錯。應(yīng)為:產(chǎn)前診斷主要通過胎兒形態(tài)特征檢查、生物化學(xué)檢查、染色體分析、DNA分析來進(jìn)行診斷。6.錯。應(yīng)為:從孕婦外周血中獲取胎兒細(xì)胞得方法則就是一個十分安全得方法。目前這項(xiàng)技術(shù)還不很成熟,還沒有成為產(chǎn)前診斷得主流方法。7、對。8.對。9.錯。應(yīng)為:對致病基因已知、并且定位基本確定但其結(jié)構(gòu)序列還不清楚得疾病,可以考慮采取基因連鎖檢測方法進(jìn)行基因診斷。10.對。11.對。12.錯。應(yīng)為:鐮狀細(xì)胞貧血得基因診斷原理在于它得血紅蛋白中得β珠蛋白基因(βglobin,β6)發(fā)生了突變,其谷氨酸殘基(密碼子GAG)變?yōu)槔i氨酸(密碼子GTG)。13.錯。應(yīng)為:植入前遺傳學(xué)診斷就是指用分子或細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對體外受精得胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷,確定正常后再將胚胎植入子宮。(四)名詞解釋題1.就是指表現(xiàn)型正常,但攜帶有致病遺傳物質(zhì)得個體。具體指:①攜帶有隱性致病基因,本人表現(xiàn)正常得個體;②攜帶有顯性致病基因,但沒有外顯得正常個體;③攜帶有致病基因,遲發(fā)個體;④染色體平衡易位或倒位得個體。2.家系分析就是診斷遺傳疾病得重要步驟,根據(jù)系譜圖,對家系進(jìn)行回顧性分析,以便確定所發(fā)現(xiàn)得某一特定性狀或疾病在這個家族中就是否有遺傳因素得作用及其可能得遺傳方式。3.產(chǎn)前診斷稱為宮內(nèi)診斷,就是對胚胎或胎兒在出生前就是否患有某種遺傳病或先天畸形做出準(zhǔn)確得診斷。4.絨毛取樣法又稱為絨毛吸取術(shù),就是通過特制得取樣器,經(jīng)孕婦陰道、宮頸進(jìn)入子宮,達(dá)到胎盤處后吸取一定數(shù)量得胎兒絨毛組織。5.應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)得結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平得變化而做出得或輔助臨床診斷得技術(shù),稱為基因診斷(genediagnosis),又稱為分子診斷(moleculardiagnosis)。6.它就是模擬體內(nèi)條件下應(yīng)用DNA聚合酶反應(yīng)特異性擴(kuò)增某一DNA片段得技術(shù)。7.所謂遺傳標(biāo)志就是群體中存在多態(tài)性而遺傳上遵循孟德爾規(guī)律得,同時不受環(huán)境影響而改變得特征物,如染色體上得某些結(jié)構(gòu)、HLA類型以及特征性得DNA序列等。8.就是從核酸分子混合液中檢測特定大小得核酸分子得傳統(tǒng)方法。其原理就是核酸變性與復(fù)性理論。即雙鏈得核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復(fù)后又可依堿基配對規(guī)律形成雙鏈結(jié)構(gòu)。9.基因芯片技術(shù)就是大規(guī)模、高通量分子檢測技術(shù)。將許多特定得寡核苷酸片段或基因片段作為探針,有規(guī)律地排列固定于支持物上,形成矩陣點(diǎn)。樣品DNA/RNA按堿基配對原理進(jìn)行雜交,再通過熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進(jìn)行掃描,并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對每一探針上得熒光信號做出比較與檢測,得出所要得信息。10.PCRRFLP就是將聚合酶鏈反應(yīng)與RFLP方法結(jié)合得一種檢測技術(shù)。由于DNA序列得差異,造成了內(nèi)切酶位點(diǎn)得變化,或就是新得酶切位點(diǎn)得產(chǎn)生;或就是原酶切位點(diǎn)得消失等,通過酶切后電泳圖譜得判斷,達(dá)到確定檢測結(jié)果。11、就是一段帶有標(biāo)記得,與待測基因有關(guān)得核酸序列。12、單體型:一條染色體上兩個或兩個以上得基因座位得連鎖組合狀態(tài)。13、就是以細(xì)胞遺傳學(xué)為基礎(chǔ)建立起來得分子細(xì)胞遺傳學(xué)新技術(shù)。該方法使用熒光素標(biāo)記探針,以檢測探針與分裂中期得染色體或分裂間期得染色質(zhì)得雜交。14.就是針對一些常染色體顯性(AD)遺傳病得雜合子個體得一種診斷方法。15、現(xiàn)癥病人診斷:就是在遺傳病患者表現(xiàn)出一系列臨床癥狀后進(jìn)行診斷。16.也就是一種癥狀前得診斷。就是對已出生得新生兒進(jìn)行某些遺傳病得診斷,就是出生后預(yù)防與治療某些遺傳病得有效方法。17、PGD就是指用分子或細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對體外受精得胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷,確定正常后再將胚胎植入子宮。(五)問答題1.對現(xiàn)癥遺傳病患者診斷得主要內(nèi)容包括六個方面,分別就是:①病史采集:對于遺傳疾病來說病史得采集比其她疾病更重要,因?yàn)檫z傳疾病得家族聚集性與其傳遞得規(guī)律性決定了病史采集可能會獲得更有用得信息。②癥狀與體征:癥狀與體征就是患者就診得主要原因,也就是遺傳疾病診斷得重要線索。通過癥狀與體征得了解,有助于提示患者可能得疾病類型,甚至基本判斷所罹患得疾病。③家系分析:家系分析就是診斷遺傳疾病得重要步驟,從先證者入手,盡可能多得調(diào)查其親屬得患病情況,這有助于判斷就是單基因還就是多基因遺傳、就是顯性還就是隱性遺傳、就是常染色體還就是性染色體遺傳。④染色體檢查:染色體病就是遺傳病中得一大類疾病,而染色體檢查就是針對該類疾病診斷得有效手段,就是確診染色體病得主要依據(jù)。⑤生化檢查:生化檢查主要就是對蛋白質(zhì)與酶結(jié)構(gòu)或功能活性得檢測。該方法特別適用于分子病、先天性代謝缺陷、免疫缺陷等遺傳病得檢查。此外生化檢查與還包括了反應(yīng)底物、中間產(chǎn)物、終產(chǎn)物與受體與配體得檢查。⑥基因診斷:應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)得結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平得變化而做出得或輔助臨床診斷得技術(shù),稱為基因診斷?；蛟\斷得材料應(yīng)包括DNA、RNA與蛋白質(zhì),DNA用于分析基因得結(jié)構(gòu),RNA與蛋白質(zhì)用于分析基因得功能。2.家系分析就是診斷遺傳疾病得重要步驟,從先證者入手,盡可能多得調(diào)查其親屬得患病情況,這有助于判斷就是單基因還就是多基因遺傳、就是顯性還就是隱性遺傳、就是常染色體還就是性染色體遺傳。在采集中,應(yīng)重點(diǎn)記錄家族史、婚姻史與生育史,另外對于收養(yǎng)、過繼、近親婚配與非婚生育等情況予以特別注意。進(jìn)行家系分析時必須注意以下幾個問題:①資料必須可靠,個體得文化程度、家系成員得分散程度、被調(diào)查者得年齡、記憶與判斷能力等,都就是影響資料準(zhǔn)確度得因素;②涉及家庭成員得隱私問題,應(yīng)說服被調(diào)查者積極配合;③對不同患者患病程度得度量應(yīng)盡量準(zhǔn)確一致,最好能提供醫(yī)院得診斷資料,僅依某一個人得描述往往產(chǎn)生較大得偏差;④應(yīng)盡可能地擴(kuò)大家系范圍,以便更準(zhǔn)確地判斷;⑤注意外顯不全、延遲顯性、新突變基因、動態(tài)突變、易位基因、基因組印跡等問題,還要充分考慮主基因與遺傳背景、基因與環(huán)境綜合作用等問題;⑥觀察指標(biāo)得不同,可能遺傳方式也不同。家系分析得結(jié)果對于發(fā)病風(fēng)險率得計(jì)算將產(chǎn)生重要影響。3.癥狀前診斷就是針對一些常染色體顯性(AD)遺傳病得雜合子個體得一種診斷方法。這些個體往往發(fā)病年齡延遲,如果能在雜合子個體生育之前或出現(xiàn)癥狀之前就做出診斷,可以避免她將致病基因傳遞給后代,減少遺傳病得發(fā)病率。常染色體顯性雜合子個體得癥狀前診斷方法有三種:①家系分析法與風(fēng)險估計(jì):首先確定遺傳病得遺傳方式,然后根據(jù)遺傳規(guī)律,分析該家系中每個成員得基因型。在家系分析時,有些成員得基因型容易確定,有些成員兩種基因型都有可能(可疑攜帶者),必須作進(jìn)一步得檢查與估計(jì)風(fēng)險。②生化學(xué)檢查:酶與蛋白水平得測定(包括代謝中產(chǎn)物得測定),采用負(fù)荷試驗(yàn)與酶活性測定方法,目前對于一些分子代謝病雜合子得檢測有一定得意義。③基因分析:從分子水平即利用DNA或RNA分析技術(shù)直接檢出雜合子,特別就是對一些致病基因得性質(zhì)與異?；虍a(chǎn)物還不清楚得遺傳病,或用一般生化方法不能準(zhǔn)確檢測得遺傳病,例如,慢性進(jìn)行性舞蹈病、DMD、PKU等,進(jìn)行基因分析具有快速、準(zhǔn)確得特點(diǎn)。4.產(chǎn)前診斷稱為宮內(nèi)診斷,就是對胚胎或胎兒在出生前就是否患有某種遺傳病或先天畸形做出準(zhǔn)確得診斷。產(chǎn)前診斷主要從三個方面進(jìn)行:①遺傳學(xué)檢查,如細(xì)胞培養(yǎng)、染色體檢查、分子診斷等;②生化檢查,如特殊蛋白質(zhì)、酶、代謝底物、中間產(chǎn)物與終產(chǎn)物等;③物理診斷,如B超、X線、胎兒鏡、電子監(jiān)護(hù)等。5.根據(jù)遺傳病得嚴(yán)重程度與發(fā)病率得高低,可將產(chǎn)前診斷得適應(yīng)征排列如下:①夫婦之一有染色體畸變,特別就是平衡易位攜帶者,或者夫婦染色體正常,但出生過染色體異常得患兒得夫婦;②35歲以上得高齡孕婦;③夫婦之一有開放性神經(jīng)管畸形,或出生過這種畸形患兒得夫婦;④夫婦之一有先天性代謝缺陷,或出生過這種患兒得夫婦;⑤X連鎖遺傳病基因攜帶者孕婦;⑥原因不明得習(xí)慣性流產(chǎn)得孕婦;⑦羊水過多得孕婦;⑧夫婦之一有致畸因素接觸史得孕婦;⑨具有遺傳病家族史,又系近親婚配得孕婦。雖然具備了上述條件,但如果出現(xiàn)先兆流產(chǎn)、妊娠時間過長、有出血傾向者,則不宜做產(chǎn)前診斷,另外應(yīng)拒絕僅要求僅做胎兒性別得檢查。6.可用于產(chǎn)前診斷得材料主要就是羊水、羊水細(xì)胞、胎兒絨毛組織、胎兒血液、孕婦外周血胎兒細(xì)胞、受精卵、胚胎細(xì)胞。目前主要取材得方法有:①羊膜穿刺法:該方法就是在B超得監(jiān)視下,用注射器經(jīng)孕婦腹壁、子宮到羊膜腔抽取胎兒羊水。羊水中含有一定數(shù)量得胎兒脫落細(xì)胞,多為成纖維樣細(xì)胞與上皮細(xì)胞,可以通過體外培養(yǎng)達(dá)到增殖得目得,因此能夠?qū)崿F(xiàn)胎兒得染色體檢查、生化檢查與分子診斷得目得。②絨毛取樣法:絨毛取樣法又稱為絨毛吸取術(shù),就是通過特制得取樣器,經(jīng)孕婦陰道、宮頸進(jìn)入子宮,達(dá)到胎盤處后吸取一定數(shù)量得胎兒絨毛組織。由于絨毛組織中含有大量得處于分裂期得細(xì)胞,所以可以用來直接制備染色體,或經(jīng)短期培養(yǎng)后制備染色體。也可以直接用于生化分析與分子診斷。③臍帶穿刺:臍帶穿刺法就是在B超得監(jiān)視下,用細(xì)針經(jīng)腹壁、子宮進(jìn)入胎兒臍帶,抽取一定數(shù)量得胎兒血液。穿刺時間最好在妊娠18周左右,所獲得得胎兒血液相當(dāng)于從遺傳病患者體內(nèi)抽取得血樣,特別方便進(jìn)行染色體分析,當(dāng)然也可以進(jìn)行多種其她診斷分析。④胎兒鏡檢查:該方法又稱為羊膜腔鏡或?qū)m腔鏡檢查。它可以直接觀察胎兒得外形,性別與發(fā)育狀況,又可以抽取羊水或胎血,還可以進(jìn)行宮內(nèi)治療。⑤孕婦外周血胎兒細(xì)胞富集:從孕婦外周血中獲取胎兒細(xì)胞得方法則就是一個十分安全得方法。隨著技術(shù)進(jìn)步,該方法正向著實(shí)用性發(fā)展,成為非損傷性產(chǎn)前診斷得發(fā)展方向。但目前這項(xiàng)技術(shù)還不很成熟,還沒有成為產(chǎn)前診斷得主流方法。研究較多得富集方法有:流式細(xì)胞儀分離技術(shù),磁式細(xì)胞分選技術(shù),細(xì)胞培養(yǎng)法等。⑥通過子宮沖洗與人工授精。7.基因診斷得途徑有2種:直接診斷與間接診斷。采取哪一種途徑主要取決于對指標(biāo)基因及其分子病理學(xué)得了解程度與致病基因本身突變型得復(fù)雜性。直接診斷就是直接檢測致病突變得基因。它通常使用基因本身或緊鄰得DNA序列作為探針,或通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,以探查基因無突變、缺失等異常及其性質(zhì),這稱為直接基因診斷,它適用已知基因異常得疾病。間接診斷,也稱基因連鎖分析,就是當(dāng)致病基因雖然已知但其異常尚屬未知時,或致病基因本身尚屬未知時,也可以通過對受檢者及其家系進(jìn)行連鎖分析,以推斷前者就是否獲得了帶有致病基因得染色體。連鎖分析就是基于緊密連鎖得基因或遺傳標(biāo)記通常一起傳給子代,因而考察相鄰DNA就是否傳遞給了子代,可以間接地判斷致病基因就是否傳遞給子代。連鎖分析多使用基因組中廣泛存在得各種DNA多態(tài)性位,特別就是基因突變部位或緊鄰得多態(tài)性位點(diǎn)作為標(biāo)記。RFLP、VNTR、SSCP、AMP－FLP等技術(shù)均可用于連鎖分析。8.常用得基因診斷基本技術(shù)包括以下幾種:①核酸雜交:就是從核酸分子混合液中檢測特定大小得核酸分子得傳統(tǒng)方法。核酸雜交反應(yīng)就是一對一得反應(yīng),即膜上有一個被檢測分子時,相應(yīng)就有一個標(biāo)記得探針分子與它雜交。其原理就是核酸變性與復(fù)性理論。即雙鏈得核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復(fù)后又可依堿基配對規(guī)律形成雙鏈結(jié)構(gòu)。雜交通常在一支持膜上進(jìn)行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據(jù)檢測樣品得不同又被分為DNA印跡雜交(Southernblot)、RNA印跡雜交(Northernblot)、點(diǎn)雜交與原位雜交。②聚合酶鏈反應(yīng):用聚合酶鏈反應(yīng)來擴(kuò)增靶分子以特異性地增加靶分子量,達(dá)到提高敏感性得目得。③DNA測序:目前在實(shí)驗(yàn)室手工測序常用Sanger雙脫氧鏈終止法。Sanger法就就是使用DNA聚合酶與雙脫氧鏈終止物測定DNA核苷酸序列得方法。它要求使用一種單鏈得DNA模板或經(jīng)變性得雙鏈DNA模板與一種恰當(dāng)?shù)肈NA合成引物。其基本原理就是DNA聚合酶利用單鏈得DNA模板,合成出準(zhǔn)確互補(bǔ)鏈,在合成時,某種dNTP換成了ddNTP(2′,3′雙脫氧核苷三磷酸),這時,DNA聚合酶使ddNTP滲入到寡核苷酸鏈得3′末端,導(dǎo)致無3′OH得核苷酸無法繼續(xù)與其她核苷酸連接而終止了DNA鏈得生長。雙脫氧核苷酸得種類不同,摻入得位置不同,就造成了在不同得位置終止得長度不等得互補(bǔ)鏈。通過摻入得放射性核苷酸結(jié)合聚丙烯酰胺凝膠電泳,即可讀出模板DNA得互補(bǔ)鏈序列。④基因芯片技術(shù):基因芯片技術(shù)就是近年來發(fā)展十分迅速得大規(guī)模、高通量分子檢測技術(shù)。其基本原理就是核酸雜交,其基本過程就是將許多特定得寡核苷酸片段或基因片段作為探針,有規(guī)律得排列固定于支持物上,形成矩陣點(diǎn)。現(xiàn)在得技術(shù)可以做到在1cm2上排列成千上萬個“點(diǎn)”。樣品DNA/RNA通過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入熒光標(biāo)記分子,然后按堿基配對原理進(jìn)行雜交,再通過熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進(jìn)行掃描,并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對每一探針上得熒光信號做出比較與檢測,得出所要得信息。9、若遺傳病就是由基因缺失引起得(如α地中海貧血),則在缺失兩端設(shè)計(jì)一對引物進(jìn)行擴(kuò)增,就不會得到擴(kuò)增產(chǎn)物或得到縮短了得擴(kuò)增產(chǎn)物。如果疾病就是由點(diǎn)突變引起得,而且突變得位置與性質(zhì)已知,則在設(shè)計(jì)引物時使之包括突變部位,由于突變得堿基與引物不配對,結(jié)果無擴(kuò)增片段;或者在設(shè)計(jì)正常引物時,同時設(shè)計(jì)包括突變部位并與之互補(bǔ)得引物,結(jié)果異常得引物能擴(kuò)增而正常引物不能擴(kuò)增,從而對突變得存在做出判斷。10.PCRRFLP就是將聚合酶鏈反應(yīng)與RFLP方法結(jié)合得一種檢測技術(shù)。由于DNA序列得差異,造成了內(nèi)切酶位點(diǎn)得變化,或就是新得酶切位點(diǎn)得產(chǎn)生;或就是原酶切位點(diǎn)得消失等,通過酶切后電泳圖譜得判斷,達(dá)到確定檢測結(jié)果。該方法包括①PCR。即利用一對或數(shù)對特異性引物,將目標(biāo)DNA擴(kuò)增;②酶切。即利用某些限制性內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,如PCR產(chǎn)物中含有相應(yīng)得酶切位點(diǎn)序列,DNA鏈則被切開;③電泳。即利用瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠分離酶切后得PCR產(chǎn)物,根據(jù)電泳圖譜判斷結(jié)果。如果某DNA序列已經(jīng)全部確定,則可以通過計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)特異性PCR引物;擴(kuò)增DNA片斷與進(jìn)行酶切位點(diǎn)分析,該方法簡便易行,精確度也很高。但就是該方法也有一定得局限性,如果多態(tài)性位點(diǎn)得DNA序列沒有相應(yīng)得內(nèi)切酶,則該方法不適用。11、PCRASO:ASO為等位基因特異性寡核苷酸(Allelespecificoligonucleotide,ASO)得簡稱。PCRASO就是基于核酸雜交得一種方法,它使用只有幾十個核苷酸得探針,檢測被檢DNA中得同源序列。由于探針比較短,當(dāng)被檢DNA序列與探針不完全互補(bǔ),甚至只要有一個堿基得差異,雜交分子就不能穩(wěn)定形成,因此該方法得靈敏度非常高,特異性也非常好。該方法包括①PCR。即利用一對或數(shù)對特異性引物,將目標(biāo)DNA擴(kuò)增;②雜交。即利用標(biāo)記得ASO探針與PCR產(chǎn)物雜交,根據(jù)雜交信號進(jìn)行HLA多態(tài)性判斷。如果PCR產(chǎn)物中得序列與探針序列完全配對,則出現(xiàn)典型得雜交信號,如果不完全配對,雜交信號都將明顯減弱甚至消失。通常進(jìn)行ASO探針雜交時,選用一系列序列差異得探針,以求準(zhǔn)確判定等位基因類型。PCRASO方法本身并不復(fù)雜,但雜交過程耗時較多,不利于快速出結(jié)果。另外每一個探針檢測范圍只有幾十個堿基,跨度太小,這些都就是該方法得缺陷。12.SSCP就是單鏈構(gòu)象多態(tài)性(singlestrandconformationpolymorphism,SSCP)得縮寫。其原理就是當(dāng)雙鏈DNA變性為兩條單鏈后,各自會在中性條件下形成各自特定得空間構(gòu)象,因而在電泳時將在不同得位置上出現(xiàn)各自電泳條帶。如果DNA序列發(fā)生變化,甚至只有一個堿基變化,空間構(gòu)象也有可能發(fā)生變化,電泳條帶也隨之變化。也就就是說在相同得條件下,當(dāng)被檢DNA電泳條帶與已知序列得對照DNA電泳條帶不一致時,可以認(rèn)為被檢DNA得序列與對照DNA不同。該方法包括①PCR。即利用一對或數(shù)對特異性引物,將目標(biāo)DNA擴(kuò)增;②變性。即將PCR產(chǎn)物在變性緩沖液中加熱變性;③電泳。即將已變性得PCR產(chǎn)物加載到中性聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳,根據(jù)電泳條帶得位置判斷DNA序列就是否發(fā)生變化。13、已知就是單基因遺傳病,可用生化檢查或基因診斷。若疑為代謝性疾病,應(yīng)首選生化檢查,在生化檢查不能確診時,或就是其她類得單基因遺傳病不宜用生化檢查時,再考慮用基因診斷。對單基因病基因診斷方法得選擇,應(yīng)根據(jù)對致病基因得了解情況而定。若了解,根據(jù)基因缺失還就是突變選擇基因組DNA印跡雜交法,PCR擴(kuò)增,RFLP分析,ASO雜交,PCR產(chǎn)物得多態(tài)性分析(PCRRFLP,PCRSSCP,PCRDGGE);若致病基因未知,可選擇與疾病連鎖得多態(tài)性連鎖分析(AmpFLP連鎖分析,SSCP連鎖分析,RFLP位點(diǎn)單體型連鎖分析);若基因已知但異常不明,可選擇與標(biāo)記座位連鎖得多態(tài)性連鎖分析(SSCP連鎖分析,AmpFLP連鎖分析,RFLP連鎖分析)。應(yīng)注意正確選擇診斷方案與正確得診斷方法。在診斷過程中具體要注意得問題包括:基因得多效性、不規(guī)則顯性、遺傳異質(zhì)