動物抑郁行為實驗之小鼠CSDS模型的建立及檢測方法

動物抑郁行為實驗之小鼠CSDS模型的建立及檢測方法小鼠CSDS模型的建立及檢測方法一.

CSDS模型的定義CSDS的全稱是chronicsocialdefeatedstress，又稱慢性社會挫敗應激模型，是一種用來制作動物抑郁模型的方法二.

CSDS模型的造模方法該部分實驗內容是參照了有關文獻。首先根據需要選取一定數(shù)量的CD1小鼠作為攻擊性小鼠，在正式實驗前2-3周開始對其攻擊性進行篩選。具體方法就是:每個飼養(yǎng)籠中飼養(yǎng)雄性和雌性兩只周齡相近的CD1小鼠，一定時間內讓CD1雄性小鼠產生領地意識；1周以后，將配對飼養(yǎng)的雌鼠分離出飼養(yǎng)籠，隨機放入一只陌生的C57小鼠作為領地入侵者，如果CD1雄性小鼠在1min之內就開始對C57小鼠發(fā)動攻擊，那么該CD1小鼠則被視為攻擊性CD1小鼠。運用同樣的方法篩選出所有需要的攻擊性雄性CD1小鼠。正式實驗前，選取雄性C57小鼠(7周)，隨機分配成正常組和應激組，每組10只，對照組每2只一籠，其余均單籠飼養(yǎng)，給正常飲食飲水一周充分適應環(huán)境。當實驗開始時，提前分離CD1雌鼠，取模型組C57小鼠一只，直接放入陌生雄性CD1小鼠（8-9周）飼養(yǎng)籠中，使C57小鼠遭受雄性CD1小鼠持續(xù)性攻擊約5-10min;然后將兩只小鼠用帶有密集小孔的透明塑料隔板隔開，使兩只小鼠彼此仍能互視和聞嗅但是無法接觸，運用這種方法持續(xù)到下次進行攻擊前為止，完成該過程后即為第一天應激。第二天再將該C57鼠放入另一不同的CD1雄性鼠的籠中，使C57小鼠受到相同程度的應激;第三天再放入第三只CD1雄性鼠的籠中，同樣使C57小鼠受到同樣程度的應激。如此連續(xù)應激10天，并保證每天同一只C57小鼠受到不同CD1雄性鼠的攻擊。在此期間，對照組和應激組C57小鼠均維持正常飲食飲水，而對照組則保持2只一籠，每天相互更換接觸不同的小鼠。三.

CSDS模型的檢測方法10天連續(xù)應激結束后即開始行為學測試。常規(guī)的抑郁樣行為檢測實驗方法有糖水偏好實驗、強迫游泳實驗、懸尾實驗、高架十字迷宮實驗、O迷宮實驗、明暗箱實驗等。這里重點介紹根據糖水消耗，社會接觸的行為學和懸尾測試的結果將C57小鼠分為正常組，抑郁敏感組，抑郁非敏感組。1.糖水偏好實驗糖水偏好測試是檢測抑郁癥快感缺失的經典方法。測試前用自來水配制好1%蔗糖水，與不含蔗糖的正常自來水同時放在C57模型鼠的鼠籠處，保證其自由飲用，同時提供充足的鼠食，每12h將糖水和白水互換位置，以防止C57模型鼠產生位置偏好。到第三天將所有的水和食物同時撤走，將C57模型鼠禁食24h。禁食結束后分別稱量糖水和白水的重量并記錄，然后將兩瓶水隨機放在飼養(yǎng)籠上供模型鼠自由飲用，1h后取下兩瓶水分別測量兩瓶水剩下的重量，計算出糖水消耗重量A和白水消耗重量B，利用公式A/（A+B）

X100%即得到CSDS模型鼠的糖水偏好率。糖水偏好率的值與動物的快感程度呈正相關，其值越小則表明動物快感缺失越嚴重。2.社會接觸實驗該實驗方法主要用于檢測小鼠對陌生目標的靠近，探索和躲避行為。正常的嚙齒類動物是社會性動物，當正常鼠與陌生鼠相遇后會與陌生鼠頻繁接觸;而遭受過社會挫敗應激的小鼠則會產生孤立和逃避接觸的行為，該行為一般判定為抑郁樣行為;而相比之下，在一定的時間內，正常鼠在單位時間內與正常鼠接觸的時間明顯長于模型鼠在單位時間內與正常鼠接觸的時間，因此，在規(guī)定時間內計算出模型鼠與攻擊鼠接觸的時間能反應出模型鼠的抑郁程度。其具體操作方法是:在敞箱(45X45X45cm)一側的中央放入隔板(10x6cm，底部有密集小孔，用來放置陌生CD1小鼠)，以中央放置CD1小鼠的區(qū)域為中心，劃出一矩形區(qū)域作為接觸區(qū)域(14x26cm)}46}。結果通過由上海欣軟信息科技有限公司公司提供的VisuTrack軟件進行接觸時間的統(tǒng)計。整個實驗步驟如下:（1）打開軟件和攝像頭后將實驗籠放置到合適的位置，然后進行軟件的設置;（2）不放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后開始計時，時間設定為2.5min最后得到接觸區(qū)和非接觸區(qū)的累積時間，此階段為Targetabsent;（3）放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后開始計時，時間設定為2.5min最后得到接觸區(qū)和非接觸區(qū)的累積時間，此階段為Targetpresent;（4）分別統(tǒng)計對照組和模型組的Targetabsent和Targetpresent的累積時間，在Targetabsent階段，對照組和模型鼠無明顯差異，但是在Targetpresent階段，模型鼠的接觸時間明顯降低。3.懸尾實驗將高60cm的架子放置于安靜的實驗環(huán)境中，用夾子夾住小鼠尾巴末端1cm處，然后將夾子固定在架