細菌的芽孢染色和鞭毛染色.ppt

1、實驗三細菌的鞭毛染色和芽孢染色,主 講:徐爾尼 生命科學學院生物技術系,一、目的與要求 學習細菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。 觀察芽孢桿菌形態(tài)特征和鞭毛的形態(tài)特征。 鞏固無菌操作技術和顯微鏡的油鏡使用。,二、基本原理 1、鞭毛染色法 細菌的鞭毛很纖細，其直徑通常為0.010.02m，所以不能用光學顯微鏡直接觀察到，必須采用特殊的染色方法，才能被觀察。 鞭毛染色原理是在染色前先用媒染劑處理，使它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進行染色。,二、基本原理 2、芽孢染色法 由于芽孢壁厚、透性低、不易著色，因此用著色力強的染色劑孔雀綠或石炭酸復紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進入菌體也可進入芽孢內(nèi)，進

2、入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當用對比度大的復染劑染色后，芽孢仍保留初染劑顏色，而菌體和芽孢囊被染成復染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。,三、實驗器材 1、菌種：普通變形桿菌、枯草芽孢桿菌 2、染色劑：硝酸銀鞭毛染色液:(A液、B液）、芽孢染色液:（5%孔雀綠染液、0.5%番紅染液） 3、儀器或其他用具：載玻片、生理鹽水、酒精燈、木夾、接種環(huán)、雙層瓶、顯微鏡、擦鏡紙、濾紙等,四、操作步驟 1、鞭毛染色（硝酸銀染色法） 取一滴無菌水，滴于玻片一端取一環(huán)菌置于無菌水中，讓菌體利用鞭毛運動開 然后玻片傾斜，讓菌液緩緩流向玻片的另一端 室溫自然干燥 滴加染液A 3-5min

3、 水洗 用染液B沖去殘水 滴加染液B1-1.5min水洗 干燥 鏡檢 結(jié)果：菌體深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形。 操作要點： 菌種的培養(yǎng)時間為8-10h。 玻片要求光滑、潔凈。 勿用接種環(huán)涂布制片。 制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。 為使鞭毛清晰可見，水洗時盡量把載玻片沖干凈。,四、操作步驟 2、芽孢染色 涂片 干燥固定 滴加孔雀綠染液 夾住玻片，微火加熱至蒸汽冒出，維持5min 水洗 番紅復染2min水洗 干燥 鏡檢結(jié)果：芽孢綠色，營養(yǎng)體紅色。 操作要點： 加熱過程中，要及時補充染液，切勿讓涂片干涸。 待玻片冷卻后，用緩流自來水沖洗，以免細菌被水沖掉。,五、實驗數(shù)據(jù)及處理結(jié)果 1、根據(jù)油鏡觀察結(jié)果，繪出枯草芽孢桿菌的形態(tài)特征（注意芽孢的形狀及著生位置）。 2、繪出普通變形桿菌的鞭毛形態(tài)特征。,六、思考與討論 1、用鞭毛染色法準確鑒定一株細菌是否具有鞭毛，要注意哪些環(huán)節(jié)？ 2、若涂片中觀察到的只是大量游離芽孢，很少看到芽孢囊及營養(yǎng)細胞，你認為這是什么原因？ 3、說明芽孢染色法