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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)二 葉綠體的分離與熒光觀察,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1 了解葉綠體等細(xì)胞器分離的一般原理和方法 2 熟悉熒光顯微鏡的使用方法，觀察葉綠體的自發(fā)熒光和間接熒光。,1,二、原理,差速離心是分離細(xì)胞器的一般方法。通過離心力和時(shí)間的增加，可將不同的組分分批次沉降，從而分離出各種亞細(xì)胞組分。 葉綠體是植物細(xì)胞中較大的一種細(xì)胞器，能發(fā)生特有的能量轉(zhuǎn)換。利用低速離心機(jī)可以分離葉綠體，其分離在等滲溶液（0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液）中進(jìn)行，目的是為了防止?jié)B透壓的改變引起葉綠體的損傷。,2,某些物質(zhì)在一定短波長的光（如紫外光）的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，就能在極短的時(shí)間內(nèi)放

2、射出比照射光波長更長的光（如可見光），這種光就稱為熒光。有些生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后，可直接發(fā)出熒光（稱為自發(fā)熒光），如葉綠素的火紅色熒光。有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光（稱為間接熒光），如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)橘紅色熒光。,3,三、材料和試劑,1 新鮮菠菜 2 0.35mol/L NaCl、0.01%吖啶橙,4,四、操作步驟,1 將新鮮菠菜葉洗凈擦干后，加入少量0.35 mol/L NaCl勻漿，并懸浮于0.35 mol/L NaCl中；每組4-5g葉片，共30ml生理鹽水。 24-6層紗布過濾，濾液1000rpm離心2min，去除其中的組織殘?jiān)鸵恍┪幢黄扑榈耐暾?xì)胞，然后，取上清液再在3000 rpm離心5min，即可獲得沉淀的葉綠體（混有部分細(xì)胞核）；,5,3棄去上清液，用約0.5-1ml 0.35mol/L NaCl懸浮沉淀。 在室溫下進(jìn)行分離要迅速。 4觀察：取懸液直接滴片觀察； 5葉片斜向切面（或手斯葉面下表皮）觀察； 6再分別用吖啶橙染色觀察。,6,五、結(jié)果和討論,1 葉綠體自發(fā)熒光和激發(fā)的次生熒光在顯微鏡下有何不同？

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