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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)二 葉綠體的分離與熒光觀察,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1 了解葉綠體等細(xì)胞器分離的一般原理和方法 2 熟悉熒光顯微鏡的使用方法,觀察葉綠體的自發(fā)熒光和間接熒光。,1,二、原理,差速離心是分離細(xì)胞器的一般方法。通過離心力和時(shí)間的增加,可將不同的組分分批次沉降,從而分離出各種亞細(xì)胞組分。 葉綠體是植物細(xì)胞中較大的一種細(xì)胞器,能發(fā)生特有的能量轉(zhuǎn)換。利用低速離心機(jī)可以分離葉綠體,其分離在等滲溶液(0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液)中進(jìn)行,目的是為了防止?jié)B透壓的改變引起葉綠體的損傷。,2,某些物質(zhì)在一定短波長的光(如紫外光)的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài),從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí),就能在極短的時(shí)間內(nèi)放

2、射出比照射光波長更長的光(如可見光),這種光就稱為熒光。有些生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后,可直接發(fā)出熒光(稱為自發(fā)熒光),如葉綠素的火紅色熒光。有的生物材料本身不發(fā)熒光,但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光(稱為間接熒光),如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)橘紅色熒光。,3,三、材料和試劑,1 新鮮菠菜 2 0.35mol/L NaCl、0.01%吖啶橙,4,四、操作步驟,1 將新鮮菠菜葉洗凈擦干后,加入少量0.35 mol/L NaCl勻漿,并懸浮于0.35 mol/L NaCl中;每組4-5g葉片,共30ml生理鹽水。 24-6層紗布過濾,濾液1000rpm離心2min,去除其中的組織殘?jiān)鸵恍┪幢黄扑榈耐暾?xì)胞,然后,取上清液再在3000 rpm離心5min,即可獲得沉淀的葉綠體(混有部分細(xì)胞核);,5,3棄去上清液,用約0.5-1ml 0.35mol/L NaCl懸浮沉淀。 在室溫下進(jìn)行分離要迅速。 4觀察:取懸液直接滴片觀察; 5葉片斜向切面(或手斯葉面下表皮)觀察; 6再分別用吖啶橙染色觀察。,6,五、結(jié)果和討論,1 葉綠體自發(fā)熒光和激發(fā)的次生熒光在顯微鏡下有何不同?

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