藥物分析課件-第二章 藥物的鑒別試驗(yàn).ppt

1、藥物分析Pharmaceutical Analysis,主講：王慶,第二章 藥物的鑒別試驗(yàn),（一）教學(xué)目的與要求： 掌握鑒別試驗(yàn)的目的、藥物性狀和物理常數(shù)的測(cè)定及其對(duì)藥物鑒別的作用，常用鑒別方法與選擇。 熟悉鑒別試驗(yàn)的影響因素與注意事項(xiàng)。 了解鑒別試驗(yàn)方法的驗(yàn)證。 （二）教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)： 化學(xué)鑒別法，光譜鑒別法，X射線粉末衍射法，色譜鑒別法，生物學(xué)法。,第一節(jié) 藥物鑒別試驗(yàn)定義與目的,定義：根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法來(lái)判斷藥物的真?zhèn)巍?目的：不是對(duì)未知物進(jìn)行定性分析，而是證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其所收載的藥物。 意義：它是藥品質(zhì)量檢驗(yàn)工作中的首項(xiàng)任務(wù)，只

2、有在藥物鑒別無(wú)誤的情況下，進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定等分析才有意義。,第一節(jié) 藥物鑒別試驗(yàn)定義與目的,性質(zhì)：藥物鑒別試驗(yàn)的試驗(yàn)方法雖有一定的專屬性，但不足以確證其結(jié)構(gòu)，因此不能賴以鑒別未知物。 化學(xué)藥物的結(jié)構(gòu)確證不同于藥物鑒別試驗(yàn)，其主要任務(wù)是確認(rèn)所制備的原料藥的結(jié)構(gòu)是否正確，適用于未知化合物的鑒別或者目標(biāo)對(duì)象的結(jié)構(gòu)確認(rèn)。,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,項(xiàng)目鑒別項(xiàng)下規(guī)定的試驗(yàn)方法僅用于鑒別藥物的真?zhèn)危瑢?duì)于原料藥，還應(yīng)結(jié)合性狀項(xiàng)下的外觀和物理常數(shù)進(jìn)行確認(rèn)。 一：性狀 性狀：反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、溶解度和物理常數(shù)等。 （一）外觀 指藥品的外表感觀和色澤，包括藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤

3、以及臭、味等性質(zhì)。,例子：CHP2010中鹽酸氯丙嗪的性狀描述： 本品為白色或乳白色結(jié)晶性粉末；有微臭，味極苦；有引濕性；遇光漸變色；水溶液顯酸性反應(yīng)。 鹽酸氯丙嗪片的性狀描述：本品為糖衣片，除去包衣后顯白色。,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,色澤,晶型,聚集狀態(tài),氣味,（二）溶解度 一定程度上反映了藥品的純度。 極易溶：1份溶質(zhì)在不到1份溶劑中溶解 易溶：1份溶質(zhì)在1份不到10份溶劑中溶解 溶解：1份溶質(zhì)在10份不到30份溶劑中溶解 略溶：1份溶質(zhì)在30份不到100份溶劑中溶解 微溶：在100份不到1000份溶劑中溶解 極微溶解：在1000份不到10000份溶劑中溶解 幾乎不溶或不溶：10000份溶

4、劑中不完全溶 例：尼莫地平的溶解度：在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中幾乎不溶。,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,（三）物理常數(shù) 用于藥品鑒別，反映其純雜程度。 藥典收載的物理常數(shù)包括：相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,1、熔點(diǎn),第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,固體熔化成液體的溫度 熔融同時(shí)分解的溫度 自初熔至全熔的一段溫度,測(cè)定方法：第一法：易碎的固體藥品 第二法：不易碎的固體藥品（脂肪酸、石蠟等 第三法：凡士林或其他類似的物質(zhì),例子：雌二醇熔點(diǎn)：本品的熔點(diǎn)為175180oC; 格列本脲的熔點(diǎn)：本

5、品的熔點(diǎn)為170174oC.,2、比旋度 在一定波長(zhǎng)與溫度下，偏振光透過(guò)1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。 作用：反映手性藥物特性及其純度的主要指標(biāo)，用以區(qū)別藥品、檢查藥物的純度和測(cè)定制劑的含量。,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,3、吸收系數(shù) 在給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱為吸收系數(shù)。有摩爾吸收系數(shù)與百分吸收系數(shù)兩種。 中國(guó)藥典收載是,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,不僅可以用來(lái)考 察原料藥的質(zhì)量， 還是UV測(cè)定含 量的依據(jù),鹽酸氨溴索吸光系數(shù)測(cè)定其為233247,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,二：一般鑒別試驗(yàn)（General Identifi

6、cation Test) 依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或物化性質(zhì)的特征，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)巍?只能證實(shí)是某一類藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥物！ 只適用于純品，混合藥物或有干擾時(shí)不適用！,中國(guó)藥典附錄收載的一般鑒別項(xiàng)目： 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟類、無(wú)機(jī)金屬類（Na, K, Li, Ca, Ba, Fe.,Al, Zn,Cu, Ag,Hg等）、有機(jī)酸鹽類（水楊酸鹽，苯甲酸等）、無(wú)酸鹽類（亞硫酸，亞硫酸氫鹽等）。,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,(一)有機(jī)氟化物,有機(jī)氟,氧瓶燃燒,無(wú)機(jī)氟離子,pH4.3,茜素氟藍(lán),硝酸亞鈰,藍(lán)紫色絡(luò)合物,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,二：一般鑒別試驗(yàn)（

7、General Identification Test),(二)有機(jī)酸鹽,1.水楊酸鹽,(1) 水楊酸 + FeCl3,中性條件,弱酸性條件,紅色配位化合物,紫色配位化合物,（酚OH）,(2) 加稀HCl，即析出白色沉淀；分離，沉淀溶于醋酸銨溶液。,(2) 酒石酸鹽,供試品溶液（中性）+ 氨制硝酸銀,水浴中,（還原性）,供試品,+,稀鹽酸 亞硝酸鈉 堿性-萘酚試液,橙黃到猩紅色,(三)芳香第一胺類：,(三)芳香第一胺類：,偶氮反應(yīng),縮合反應(yīng),橙黃到猩紅色,(四)托烷生物堿類：,具有莨菪酸結(jié)構(gòu)，可發(fā)生Vitali反應(yīng),顯紫色。,(五)無(wú)機(jī)金屬鹽,1、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋇鹽的焰色反應(yīng) Na+顯鮮黃

8、色 K+顯紫色 Ca2+顯磚紅色 Ba2+顯黃綠色，自綠色玻璃中透視，火焰顯藍(lán)色,(五)無(wú)機(jī)金屬鹽,鈉光譜的主要譜線有589.0nm、589.6nm，故顯黃色。鉀光譜的主要譜線有766.49nm、769.90nm等，鈣光譜的主要譜線有622nm、554nm、442.67nm與602nm，其中622nm的譜線最強(qiáng)，故顯磚紅色。,2、銨鹽,供試品,+ NaOH,氨氣,臭：氨臭,(五)無(wú)機(jī)金屬鹽,1、氯化物 鑒別一：硝酸銀鑒定法 取供試品溶液，加稀硝酸酸化后，滴加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀復(fù)生成。如供試品為生物堿或其他有機(jī)堿的鹽酸鹽，須先加氨試

9、液使成堿性，將析出的沉淀濾過(guò)除去，取濾液進(jìn)行試驗(yàn)。 鑒別二：二氧化錳氧化法 取供試品少量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤(rùn)，緩緩加熱，即產(chǎn)生氯氣，能使用水濕潤(rùn)的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色。,(六)無(wú)機(jī)酸根,2、硫酸鹽 鑒別一：氯化鋇鑒定法 取供試品溶液，滴加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。 鑒別二：醋酸鉛鑒定法 取供試品溶液，滴加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。 鑒別三：鹽酸排除法 取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀（與硫代硫酸鹽區(qū)別）。,(六)無(wú)機(jī)酸根,3、硝酸鹽 鑒別一：硫酸及硫酸亞鐵顯棕色法 鑒別二：與銅反應(yīng)生

10、成紅棕色蒸氣 鑒別三：高錳酸鉀排除法,(六)無(wú)機(jī)酸根,三、專屬鑒別試驗(yàn),是證實(shí)某一種藥物的依據(jù)，是根據(jù)每一種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性不同，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)，來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)巍Ｔ诘诹乱院髸?huì)詳細(xì)講解。,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,如：母核相同， 取代基不同,一般鑒別試驗(yàn),某一類藥物,專屬鑒別實(shí)驗(yàn),此類藥物中的某一種藥物,苯巴比妥,司可巴比妥鈉,巴比妥,要求：專屬性強(qiáng)、再現(xiàn)性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便快速,第三節(jié) 鑒別方法,一、化學(xué)鑒別法,三氯化鐵呈色反應(yīng)(Ar-OH, Ar-OCOCH3) 托烷生物堿類的Vitali反應(yīng) 1. 顯色反應(yīng)鑒別法 茚三酮呈色反應(yīng)(脂肪氨基,氨

11、基酸） 重氮化-偶合呈色反應(yīng)(Ar-NH2;-NHCOR) 氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng),第三節(jié) 鑒別方法,與金屬離子的沉淀反應(yīng) 2. 沉淀生成鑒別法 與硫氰化鉻銨的沉淀反應(yīng) 其它沉淀反應(yīng)(如生物堿沉淀劑）,藥物本身在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光 藥物溶液加硫酸后在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光 3. 熒光反應(yīng)鑒別法 藥物與溴反應(yīng)后，在可見(jiàn)光下發(fā)出熒光 藥物與間苯二酚溴反應(yīng)后，發(fā)射出熒光 藥物其它反應(yīng)后，發(fā)射出熒光 制備衍生物： 藥物試劑 具有熒光的衍生物,1. 胺類、酰脲類、酰胺類藥物經(jīng)強(qiáng)堿處 理生成氨氣 ( NH3 ；NH(C2H5)2) 2.含硫藥物經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，生成 4. 氣體生成反應(yīng)鑒別法 硫化氫氣體

12、(H2S+Pb2+ PbS +2H+) 3.含碘有機(jī)藥物，加熱。生成紫色碘蒸 汽 4.含醋酸酯和乙酰胺類藥物酸水解后， 加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯,5. 使試劑褪色的鑒別法 如維生素C的二氯靛酚反應(yīng)；氧烯洛爾的高錳酸鉀反應(yīng)；司可巴比妥鈉的碘試液反應(yīng),6. 測(cè)定生成物的熔點(diǎn) 藥物試劑 新化合物有一定mp; 藥物酸化或堿化生成游離酸或堿。 操作繁瑣費(fèi)時(shí)間，應(yīng)用較少。,二、光譜鑒別法,（一）紫外光譜鑒別法 原理：有機(jī)藥物具有能吸收紫外可見(jiàn)光的基團(tuán)，則顯示特 征的吸收光譜，不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)可產(chǎn)生不同的紫外 可見(jiàn)吸收光譜 缺點(diǎn)：光譜較簡(jiǎn)單，曲線性狀變化不大，專屬性小于IR 方法：P76 (1)- (5) 特點(diǎn)：

13、具有一定的專屬性，儀器普及率高，操作簡(jiǎn)單，應(yīng) 用范圍廣,二、 光譜鑒別法,（一）紫外光譜鑒別法,（二）紅外光譜鑒別法,特點(diǎn)：能反映出藥物分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適合不易區(qū)別的同類藥物，專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣泛 方法：標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法 試樣制備方法：壓片法、糊法、膜法、溶液法,二、 光譜鑒別法,紅外光譜鑒別法,（三）近紅外光譜法,（四）原子吸收法 利用原子蒸氣可以吸收由該元素作為陰極的空心陰極燈發(fā)出的特征的特性，根據(jù)供試溶液在特征譜線處的最大吸收和特征譜線的強(qiáng)度減弱程度進(jìn)行定性、定量分析。 （五）核磁共振法 （六）質(zhì)譜鑒別法 （七）X射線粉末衍射法 晶體對(duì)X射線會(huì)產(chǎn)生衍射現(xiàn)象

14、，不同的物質(zhì)有其特定的衍射圖。,二、 光譜鑒別法,二、 光譜鑒別法,利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（Rf值或保留時(shí)間）進(jìn)行的鑒別試驗(yàn)。,三、 色譜鑒別法,TLC （Rf樣Rf對(duì)） 方法： PC HPLC 、 GC （tR樣tR對(duì)）,原理：不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（比移值或保留時(shí)間）。 與對(duì)照品在相同條件下進(jìn)行色譜分離，并進(jìn)行比較，根據(jù)兩者保留行為和檢測(cè)結(jié)果是否一致來(lái)驗(yàn)證藥品的真?zhèn)巍?三、 色譜鑒別法,1 2樣品 3 標(biāo)準(zhǔn)品,薄層色譜法 比移值(Rf)定性參數(shù),GC和HPLC鑒別法,四、顯微鑒別法,利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有關(guān)技術(shù)來(lái)鑒定藥物品質(zhì)的一種

15、方法，主要用于抗生素、生物藥物以及中藥的鑒別，通常分為生物效應(yīng)鑒別法和基因鑒別法兩大類。 按對(duì)象目的不同可分為：免疫鑒別法、細(xì)胞生物學(xué)鑒別法、生物效價(jià)鑒別法、純指標(biāo)鑒別法、DNA遺傳標(biāo)記法、mRNA差異顯示鑒別法,五、生物學(xué)鑒別法,六、指紋圖譜與特征圖譜鑒別法,第四節(jié) 鑒別試驗(yàn)條件,第四節(jié) 鑒別試驗(yàn)條件,（一）溶液的濃度 溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小影響結(jié) 果的判斷。如化學(xué)法中要觀察沉淀、顏色；UV法中max, A、 （二）溶液的溫度 溫度過(guò)高可使產(chǎn)物分解，導(dǎo)致顏色變淺，甚至觀察不 到結(jié)果。,（三）溶液的酸堿度 使反應(yīng)物處于活化狀態(tài)、反應(yīng)產(chǎn)物處于穩(wěn)定和易觀察狀態(tài)。 （四）試驗(yàn)時(shí)間

16、有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)較慢，需要一定的反應(yīng)時(shí)間和條件。 （五）干擾成分的存在 藥物制劑的鑒別，其它成分則會(huì)干擾檢查結(jié)果的現(xiàn)象觀察。,第四節(jié) 鑒別試驗(yàn)條件,鑒別方法的驗(yàn)證,對(duì)方法的專屬性和耐用性進(jìn)行鑒別,是否準(zhǔn)確？,微小條件變 化是否允許,藥品的鑒別是證明 A未知藥物的真?zhèn)?B已知藥物的真?zhèn)?C已知藥物的療效 D藥物的純度 E藥物的穩(wěn)定性,練習(xí)與思考,在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，藥品的外觀、臭、味等內(nèi)容歸屬的項(xiàng)目是： A性狀 B一般鑒別 C專屬鑒別 D檢查 E含量測(cè)定,練習(xí)與思考,取供試品少量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤(rùn)，緩緩加熱，即產(chǎn)生氯氣，能使用水濕潤(rùn)的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色。下列物質(zhì)可用上述試驗(yàn)鑒別的是： A托烷生物堿類 B酒石酸鹽 C氯化物 D硫酸鹽 E有機(jī)氟化物,練習(xí)與思考,A、取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。 B、取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘?jiān)?，放冷，加乙?3滴濕潤(rùn)，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。 C、取鉑絲，用鹽酸濕潤(rùn)后，蘸取供試品，在無(wú)色火焰中燃燒，火焰顯鮮黃色。 D、取供試品，加過(guò)量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇用水濕潤(rùn)的紅色石蕊試紙，能使之變藍(lán)色，并能使硝酸亞汞試液濕潤(rùn)的濾紙顯黑色。 E、取供試品溶液，滴加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。 以下各