食用真菌的組織分離、液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng).ppt

1、食用真菌的組織分離、液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng),于躍 20068101050 張騰岳 20068101057,步驟： 選取生長(zhǎng)良好的側(cè)耳子實(shí)體，用75%酒精做表面消毒，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，按無(wú)菌操作將子實(shí)體縱剖，用無(wú)菌刀在子實(shí)體上四個(gè)不同部位劃“井”字用接種鉤勾取2*3*3mm大的組織塊，接種于馬鈴薯培養(yǎng)基試管斜面正中。將試管放入25的恒溫箱中培養(yǎng)，等待菌絲長(zhǎng)滿斜面，預(yù)計(jì)時(shí)間7-10天。,注意： PDA培養(yǎng)基在滅菌后易分層，所做試管斜面需先搖勻再擺斜面。,1.子實(shí)體的組織分離獲取純菌種,結(jié)果：接種斜面培養(yǎng)2-3天后，3支試管內(nèi)均長(zhǎng)出大量雜菌，種類各異，平菇菌絲生長(zhǎng)不良。 分析：可能是由于勾取的組織塊表面僅

2、用75%酒精消毒不能達(dá)到理想的消毒效果。,用75%酒精對(duì)平菇做表面消毒后，用無(wú)菌鑷子將平菇表面膜撕掉，取摸下和平菇內(nèi)部組織培養(yǎng)?？赡芸梢越鉀Q以上問(wèn)題。,因組織培養(yǎng)失敗，故將實(shí)驗(yàn)室保存的純種平菇接種到PDA培養(yǎng)基平板上，25培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。,結(jié)果： 經(jīng)7-8天的培養(yǎng)，生長(zhǎng)出直徑為5cm的菌落，菌絲生長(zhǎng)稀疏。,注意： 由于培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，倒平板時(shí)將培養(yǎng)基倒得較厚（約20ml），防止培養(yǎng)基干裂。,分析： 經(jīng)與其他組比較發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中加入少量維生素B1，可加快菌絲生長(zhǎng)速度并使菌絲生長(zhǎng)致密。,因試管斜面面積過(guò)小，不利于菌種純化，改用培養(yǎng)皿平板培養(yǎng)。,步驟: 將培養(yǎng)皿中菌絲連同少量表層培養(yǎng)基鏟下約4cm2的

3、菌塊至裝有50ml玉米粉蔗糖培養(yǎng)基的250ml錐形瓶中。在26-28的培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)2天（靜止培養(yǎng)促使鏟斷菌絲的愈合，有利于繁殖。），再置于搖床中28 120r/min,培養(yǎng)4天。,注意：錐形瓶中不宜裝入過(guò)多培養(yǎng)基，錐形瓶?jī)?nèi)液面的上升使液體與空氣的接觸面積變小，減小了氧的溶解速度，不利于菌絲生長(zhǎng)。,2.液體培養(yǎng)：,結(jié)果： 在搖床培養(yǎng)后期，培養(yǎng)基由黃色漸漸變白，并在靜止一段時(shí)間后有團(tuán)塊出現(xiàn)。 可能為菌體大量生長(zhǎng)、繁殖所致。,(1)二級(jí)種培養(yǎng),(2).發(fā)酵培養(yǎng)：搖床種子以10%接種量接入玉米粉綜合培養(yǎng)基，接種后保持液面不要過(guò)高。25-28培養(yǎng)3-4天。,分析：本步實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑閿U(kuò)增出足量的菌絲體，以

4、備后期發(fā)酵用。由于接種玉米粉綜合培養(yǎng)基時(shí)帶入大量原培養(yǎng)基固體成分，加之玉米粉綜合培養(yǎng)基內(nèi)含部分固體成分。干重中培養(yǎng)基固體成分過(guò)多，難以與菌絲體分離，對(duì)測(cè)得的干重生物量影響過(guò)大。故未進(jìn)行生物量的測(cè)定。,3.固體栽培,(1)配料，裝瓶，消毒：3個(gè)鋁制啤酒罐。按下述配方配制棉籽殼培養(yǎng)基：棉籽殼50% 過(guò)磷酸鈣7% 水65-70%（棉籽殼330g）裝瓶時(shí)，底部壓得松，瓶口壓得緊些，罐體上柱扎一些小孔，用報(bào)紙將罐口封好，121濕熱滅菌2小時(shí)。,(2)待溫度降到室溫，用移液槍將液體培養(yǎng)基內(nèi)的菌液接入到棉籽殼培養(yǎng)基內(nèi)，將槍頭插到罐底，一邊向外拔出槍頭一邊注射，直到表面。均勻注射3-5ml后再在表面加上一些菌

5、液。用報(bào)紙封口后移入實(shí)驗(yàn)室抽屜內(nèi)。白天實(shí)驗(yàn)室內(nèi)氣溫在16-20內(nèi)變化，變化稍低，由于在室內(nèi)，晝夜變溫不大。,分析：實(shí)驗(yàn)室要求控溫在20-23，最高不超過(guò)29，由于瓶?jī)?nèi)溫度高于實(shí)驗(yàn)室4-6，所以在實(shí)驗(yàn)室自然條件下可達(dá)到菌絲生長(zhǎng)溫度要求。若置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)可能會(huì)造成溫度過(guò)高。相對(duì)濕度70%-75%可由在報(bào)紙（瓶口處相當(dāng)于瓶蓋）上灑適量水來(lái)控制。由于培養(yǎng)量少，空間足夠大，故不需過(guò)多考慮CO2濃度問(wèn)題。7天后菌絲生長(zhǎng)速度較快，14天左右長(zhǎng)滿全罐。,(3) 16天時(shí)將瓶口的報(bào)紙換成透明的塑料片，將罐移到宿舍陽(yáng)臺(tái)處，接受散射自然光照。由于所處宿舍陽(yáng)臺(tái)面向北，培養(yǎng)基不會(huì)受到陽(yáng)光直射。周期低溫刺激由晝夜溫差調(diào)節(jié)。,(4)兩周左右以后，表面貼近罐壁的菌絲開(kāi)始產(chǎn)生瘤狀突起，為子實(shí)體原基，去掉塑料膜。一到兩天后，成為有菌蓋的微小子實(shí)體，菌蓋中央凹陷，一些菌蓋低于菌柄頂，形成傘形。子實(shí)體相繼產(chǎn)生并日益長(zhǎng)大。,分析：在宿舍培養(yǎng)期間，連續(xù)降水。濕度極大，溫度較低，適于菌蕾發(fā)育。,出菇第一天,出菇第二天,出菇第三天,出菇第五天,結(jié)果：在第五天至第七天，平菇不再長(zhǎng)大，表現(xiàn)為缺水。固體培養(yǎng)基逐漸縮小、變硬。在第七天后，平菇菌蓋變硬。,分析：培養(yǎng)后期少雨，空氣濕度小，氣溫偏高。培養(yǎng)基中水