實驗一、普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察.ppt

1、實驗一 普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察,主 講:徐爾尼 生命科學(xué)學(xué)院生物技術(shù)系,一、目的與要求 了解顯微鏡的構(gòu)造和各部分的作用，掌握顯微鏡的 使用方法 學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法 了解細(xì)菌的三種基本形態(tài),二、顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)及油鏡的工作原理 1、普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造可分為兩部分： 1）機械裝置：鏡座、鏡筒、鏡臂、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、標(biāo)本移動螺旋、粗調(diào)螺旋和細(xì)調(diào)螺旋等部件組成。 2）光學(xué)系統(tǒng)：目鏡、物鏡、聚光器、虹彩光圈、光源等組成,普通光學(xué)顯微鏡基本構(gòu)造,放大倍數(shù)= 物鏡放大倍數(shù)目鏡放大倍數(shù),在顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關(guān)鍵，它直接影響著顯微鏡的分辨

2、率。而在普通光學(xué)顯微鏡配置的幾種物鏡中，油鏡的放大倍數(shù)最大，對微生物學(xué)研究最為重要。與其他物鏡相比，油鏡的使用比較特殊，需在載玻片和鏡頭之間加滴鏡油。,二、顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)及油鏡的工作原理 2、油鏡的工作原理 1）增加照明亮度 2) 增加數(shù)值孔徑(NA)，提高顯微鏡的分辨率,三、實驗器材 1、標(biāo)本片：細(xì)菌三形片 2、試劑：香柏油、二甲苯 3、儀器及其它用具：顯微鏡、擦鏡紙等,四、操作步驟 1、顯微觀察步驟 1）低倍鏡觀察（10）： 2）高倍鏡觀察（40）： 3）油鏡觀察（100）：,低倍鏡的操作 1. 置顯微鏡于固定的桌上。 2. 旋動轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡移到鏡筒下方與之對直。 3. 轉(zhuǎn)動反光鏡向

3、著光源處，同時用眼對準(zhǔn)目鏡，仔細(xì)觀察，視野亮度均勻。 4. 將標(biāo)本放在載物臺上，使觀察的目的物置于圓孔的正中央。 5. 將粗調(diào)節(jié)器向下旋轉(zhuǎn)，眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰，當(dāng)物鏡的尖端距載玻片約0.5cm處時停止旋轉(zhuǎn)。 6. 左眼向目鏡觀察，調(diào)節(jié)粗、細(xì)調(diào)節(jié)器直至目的物清晰為止。,高倍鏡的操作 1. 使用高倍鏡之前，先用低倍鏡觀察，將目的物移至視野正中央。 2. 旋動轉(zhuǎn)換器換成高倍鏡，調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器直至目的物清晰；如果高倍鏡觸及載玻片應(yīng)立即停止旋動，說明原來低倍鏡沒有調(diào)準(zhǔn)焦距，應(yīng)重調(diào)低倍鏡，找到目的物。,油鏡的操作 1. 如果用高倍鏡未能看清目的物，則可用油鏡。應(yīng)先用低倍鏡和高倍鏡檢查標(biāo)本片，

4、將目的物移到視野正中。 2.下降載物臺在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中央，使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。用細(xì)調(diào)節(jié)器微微向上調(diào)即可。,四、操作步驟 2、顯微鏡用畢后的處理 拔掉電源插頭 下降載物臺 取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油 取干凈擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡 取干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯 將顯微鏡的各部位還原，物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。,五、實驗數(shù)據(jù)及處理結(jié)果 繪出你在油鏡下觀察到的細(xì)菌的三種形態(tài)及其不同細(xì)菌細(xì)胞的排列方式。,六、思考與討論 用油鏡觀察時應(yīng)注意那些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油？起什么作用？ 下次實驗項目名稱：細(xì)菌的簡單染色和革蘭

5、氏染色,增加照明亮度 油鏡的放大倍數(shù)可達(dá)100 ，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。,從承載標(biāo)本的玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進(jìn)入空氣，再進(jìn)入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進(jìn)入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為 了不使通過的光線有所損失， 在使用油鏡時需在油鏡和玻 片之間加入與玻璃的折射率 相仿的鏡油（通常使用香柏 油，其折射率n =1.52）。 增加了視野的進(jìn)光量，從而 使物象更加清晰。,增加顯微鏡的分辨率 顯微鏡的分辨率或分辨力（resolution or resolving power）是指顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。從物理學(xué)角度看，光學(xué)顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：,式中：=光波波長（平均0.55m) NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。,數(shù)值孔徑則取決于物鏡的鏡口 角和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率， 可表示為： NA=n sin(/2） n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折 射率。 ：鏡口角。 以香柏油為介質(zhì)的油鏡所能達(dá) 到的數(shù)值孔徑（NA一般在1.2 1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡 等物鏡（NA都低于1.0）。數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨距離不小于0.4m的物