藥物雜質質控方法與質量標準研究培訓匯報.ppt

1、藥物(雜質)質控方法與質量標準研究培訓匯報,2009.03.2024,本次培訓的主要內(nèi)容 一 化學藥物雜質研究與標準制定方面（重點） 二 中藥質量標準制定與分析方法驗證方面 三藥物安全性評價與GLP管理方面 四 國內(nèi)外質量標準發(fā)展方面 五 輔料質量標準方面 六 質譜技術應用方面,一、化學藥物雜質研究與標準制定,三個相關的指導原則 (廣州藥檢所 楊仲元) 雜質控制與測定方法(中檢所化藥 張啟明) 雜質研究基本思路(醫(yī)藥生物技術研究所 李眉) 抗生素雜質控制(中檢所抗生素 胡昌勤),二、中藥質量標準,1、中藥質量標準制定的若干思路 中檢所中藥室 林瑞超 強調(diào)中藥質量控制理念 2、中藥質量標準制定與

2、分析方法驗證 藥典委 王旭 鑒別 溶殘 含量測定 限度（轉移率） 分析方法驗證指導原則 （一部藥典附錄） 加樣回收方法 范圍,三、安全性評價,1、藥品質量標準與安全性評價 天津藥檢所 唐元泰 各種雜質對人體的危害 質量標準中控制的限度 2、新藥申報安全性研究方面資料的要求 中檢所 王秀文 GLP試驗的范圍 毒理研究 關于推進實施藥物非臨床研究質量管理規(guī)范的通知 未在國內(nèi)上市的化學原料藥及制劑、生物制品 未在國內(nèi)上市的中藥有效成分、有效部位及制劑 中藥注射劑的新藥 2007.1.1起必須在經(jīng)過GLP認證的試驗室進行,四、國內(nèi)外質量標準發(fā)展,藥典委 王平 理念性 科學發(fā)展觀 標準提高行動計劃 20

3、10年藥典制定 統(tǒng)一標準時 就高不就低 淘汰落后的標準與工藝 積極采用國外藥品標準的先進方法 探索以企業(yè)為主體承擔藥品標準修訂工作的機制,五、輔料質量標準 中檢所輔料室 孫會敏 藥用輔料標準的制定原則 起草標準的研究思路 輔料中的雜質控制 六、質譜技術應用 美國AB公司 （美國應用生物系統(tǒng)公司） 質譜的工作原理 LC-MS在藥品雜質和降解產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)和分析中應用 配套軟件系統(tǒng)的認證,歸納總結,一、雜質的定義與分類 二、國內(nèi)外雜質研究的相關技術要求 三、雜質研究的基本思路與方法 四、雜質控制標準（限度）制定原則 五、分析方法驗證 六、穩(wěn)定性試驗研究,一、定義與分類,ICH：藥物中存在的，化學結構與

4、該藥物不一致的任何成分 中國藥典： 附錄（雜質分析指導原則） 任何影響藥品純度的物質。 凡例 對于規(guī)定中的各種雜質檢查項，系指在按既定工藝進行生產(chǎn)和正常貯藏過程中可能含有或產(chǎn)生并需要控制的雜質。,1、無機雜質 2、有機雜質（特定雜質 、非特定雜質 ） 3、 揮發(fā)性雜質（殘留溶劑 、其他揮發(fā)性雜質） 特定雜質：指在標準中分別規(guī)定了明確的限度，并單獨 進行控制的雜質。 包括結構已知的和結構未知的 對于結構未知的雜質，在標準中一般用代號（如#雜質A），并用相對保留時間（如相對保留時間0.8）來加以區(qū)分。,分類,非特定雜質 指在標準中未單獨列出，而僅用一個通用的限度進行控制的一系列雜質。,二、國內(nèi)外雜

5、質研究的相關技術要求,ICH：人用藥品注冊技術要求國際協(xié)調(diào)會（ 1990年美國、歐盟和日本三方組成） Q3A 新原料藥的雜質研究指導原則 Q3B 新制劑的雜質研究指導原則 Q3C 殘留溶劑的研究指導原則,原料藥雜質限度,制劑雜質限度,三個限度的含義,報告限度：超出此限度的雜質均應在檢測報告中報告，并報告具體的檢測數(shù)據(jù)。 鑒定限度：超出此限度的雜質均應進行定性分析，確定其化學結構。 質控限度：質量標準中一般允許的雜質限度，如制訂的限度高于此限度，則應有充分依據(jù)。,ICH規(guī)定在原料藥質量標準中任一非特定雜質的限度不得過鑒定限度；在制劑中可僅控制降解雜質，在制劑質量標準中任一非特定雜質的限度不得過鑒

6、定限度。,1、滿足以下一點或幾點要求則可認為是某雜質得到了合理控制： -當實測水平和擬接受的雜質標準沒有超過FDA已批準同類藥品的雜質水平； -當雜質本身就是原料藥的主要代謝產(chǎn)物； -當實測水平和擬接受的雜質標準得到科學文獻的充分論證； -當實測水平和擬接受的雜質標準未超過體內(nèi)遺傳毒性研究的雜質水平。,FDA 仿制藥申請：原料藥雜質控制指導原則,2、藥物制劑質量標準,雜質可接受限定不應高于質控水平（若USP對某雜質有規(guī)定限度，則不能超過藥典限度）。 降解雜質實測水平超過藥典限度，需證實其合理性。 若某特定降解雜質的可接受限度未納入USP，應與已批準制劑進行對比確認，保持該雜質可接受限度與上市制

7、劑實測水平一致。 在其他一些情況下（如已有資料證明該雜質毒性較大），降解雜質可接受限度需要低于控制限度。 非特定雜質可接受限度可參考ICH Q3B中控制限度。,制定原料藥的雜質標準,制訂仿制劑的雜質標準,國內(nèi) 化藥雜質研究指導原則,1、新原料藥和新制劑 - 應按ICH 的Q3A和Q3B進行研究，對于表觀含量在0.1%及以上的雜質，以及表觀含量在0.1%以下的具有強烈生物作用的雜質或毒性雜質，應予以定性或確證其結構，對于穩(wěn)定性試驗中出現(xiàn)的降解產(chǎn)物，也應按此規(guī)定進行研究。,-質量標準中的雜質檢查項目應包括經(jīng)研究和穩(wěn)定性考察檢出的，并在批量生產(chǎn)中出現(xiàn)的雜質和降解產(chǎn)物，并包括相應的限度。除降解產(chǎn)物和毒

8、性雜質外，在原料中已控制的雜質，在制劑中可不再控制。無機雜質，根據(jù)生產(chǎn)工藝情況確定檢查項目，對于毒性的無機雜質，應在標準中規(guī)定檢查項。,2、仿制產(chǎn)品,在仿制藥品的研制和生產(chǎn)中，如發(fā)現(xiàn)其雜質模式與其原始開發(fā)藥品的不同，或與已有法定質量標準規(guī)定不同，應按上述方法進行研究，申報新的質量標準或對原質量標準進行修訂，并報有關藥監(jiān)部門審批。,幾個關注點,1、共存的異構體和抗生素多組分一般不作為雜質檢查項目，作為共存物質，必要時，在質量標準中規(guī)定其比例，以保證生產(chǎn)用的原料藥與申報注冊時的一致性。但當共存物質為毒性雜質時，該物質就不再認為是共存物質。,2、單一對映體藥物，其可能共存的其他對映體，應作為雜質檢查

9、。消旋體藥物，當已有其單一對映體藥物的法定質量標準時，應在該消旋體藥物的質量標準中設旋光度檢查項。,3、新藥研究中的雜質和降解產(chǎn)物，或仿制藥研制中發(fā)現(xiàn)的新雜質和新降解產(chǎn)物，應進行分離純化制備，以供進行安全性和質量研究。對于確實無法獲得的雜質和降解產(chǎn)物，應在申報資料和質量標準起草說明中寫明理由。,4、在創(chuàng)新藥的研究過程中，已通過一系列的藥理毒理研究及臨床研究來證實該藥品的安全性，而研究所用的樣品本身會包含一定種類和數(shù)量的雜質，如果在這些研究中并未明顯反映出與雜質有關的毒副作用，即使有些雜質的含量超出了附件1、附件2的質控限度，仍可認為該雜質的含量已通過了安全性的驗證。,5、在此前提下，如果該雜質

10、的含量同時也在正常的制備工藝所允許的限度范圍內(nèi)，那么根據(jù)試驗樣品中雜質的含量所確定的限度可認為是合理的。但由于動物與人體反應的差異以及臨床病例數(shù)的限制，其申請上市時的安全性數(shù)據(jù)仍很有限，故新產(chǎn)品在上市后應監(jiān)測不良反應，并對新增加不良反應的原因進行分析，如與雜質相關，應降低雜質含量，制訂合理的限度。,6、如某雜質也是該藥物在動物或人體中的主要代謝產(chǎn)物，則對該雜質可不考慮其安全性，但仍需制訂合理的限度。,三、雜質研究的思路與方法,基本方法 無機雜質研究：ICP-MS（電感耦合等離子體質譜，陽離子）；離子色譜（陰離子）。 揮發(fā)性雜質：HS-GC（溶殘），GC-MS（其他揮發(fā)性雜質） 有機雜質：HPL

11、C、HPTLC、HPCE、LC-MS,溶劑殘留的研究與控制,一類：5種，禁止使用 二類：27種，限制使用，氯仿60PPM、甲醇3000PPM 三類：27種，GMP要求限制使用，乙醇、乙醚等，限量0.5% 四類：10種，無足夠毒理數(shù)據(jù)，異丙醚、石油醚等,雜質分析指導原則規(guī)定：殘留溶劑，應根據(jù)生產(chǎn)工藝所用的溶劑及其殘留情況，確定檢查項目。對殘留的毒性溶劑，應規(guī)定其檢查項目。 申報要求：在原料藥的申報中，若無溶殘研究，一律退審；在制劑過程中使用了有機溶劑，也應按規(guī)定進行溶殘研究。 目前存在情況：申報單位隱瞞生產(chǎn)工藝所用溶劑，中檢所在復核標準時發(fā)現(xiàn)色譜圖中有其他雜峰，則按照殘留溶劑測定法規(guī)定，同時采用

12、極性柱與非極性柱進行定性鑒定，必要時采用GC-MS確證，然后在進行定量測定。 建議：申報單位也采用此方法進行溶殘研究。,有機雜質的研究思路與方法,雜質譜分析（概念） ：包括藥物中所有雜質的種類、含量、來源及結構等信息。 藥學研究過程：預測、分離、鑒定、分析方法的建立、數(shù)據(jù)積累、制訂限度。 安全性研究：采用雜質純品進行毒理學研究；或對毒理學和臨床用樣品中雜質毒性的評估，為最終產(chǎn)品中雜質限度的確定提供安全性依據(jù)。,斑馬魚毒性快速評價平臺 利用顯微注射的方法，對雜質的胚胎毒性、神經(jīng)毒性、心臟毒性等進行評價 優(yōu)點：僅需微量（ug級）的純品可用于試驗 無需知道雜質結構 實驗周期短（3、4天1個周期）,特

13、定的降解反應產(chǎn)生雜質,制備HPLC分離雜質,斑馬魚平臺進行毒性評價,雜質的結構分析,顯微注射 微量雜質到 斑馬魚胚胎,觀察胚胎的 發(fā)育過程,選擇特定的靶 基因通過分子 生物學方法 觀察其變化,結合形態(tài) 觀察對毒 性結果進 行判斷,預測：,1、分析起始原料中可能存在的雜質 2、分析合成過程中副反應引入的雜質 3、分析合成過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物 通過強制降解試驗，分析潛在的降解產(chǎn)物，考察藥品在酸、堿、高溫、光照、氧化等因素影響下的降解產(chǎn)物。,制劑中雜質來源的分析,原料藥引入的雜質 降解產(chǎn)物（制劑雜質研究的重點） 制劑制備過程產(chǎn)生的雜質 貯藏期間的降解產(chǎn)物 原料藥與輔料相互作用產(chǎn)生的雜質 復方制劑各組

14、分相互作用產(chǎn)生的雜質,分離與鑒定,色譜分離技術 TLC、GC、HPLC、UPLC 鑒定結構 LC-MS技術 根據(jù)雜質來源、產(chǎn)生條件，結合母核的質譜裂解規(guī)律推斷雜質的可能結構。 1、鑒定未知同系物： 紫外光譜圖得到有關母核結構的信息 一級質譜得到分子量 二級質譜得到碎片峰信息，推斷出有關取代基的情況 利用色譜保留行為來驗證推測結果是否正確,2、鑒定未知降解雜質結構 對于反應機理已知的降解雜質： 根據(jù)反應原理設計加速實驗 一級質譜得到分子量信息 二級質譜得到碎片峰信息，進一步推測降解 產(chǎn)物的結構 利用UV特征和色譜保留行為來驗證推測結果是否正確,3、確定未知雜質 推測雜質的可能結構 反合成推測的可

15、能雜質 LC/MS通過質譜裂解規(guī)律和色譜保留時間確定所推測雜質結構的準確性,雜質分析方法的研究,色譜方法（HPLC、TLC、GC） 分析方法各有局限，注意不同原理分析方法間的相互補充和驗證 采用HPLC，應能回答以下幾個問題： 是否有雜質吸附到色譜柱上未被洗脫？ 是否有雜質在色譜柱上未被保留，隨流動相一起出來？ 是否所檢測到的色譜峰存在共出峰？ 是否所有峰能被檢測器檢測到？,此外，還應考慮溶液是否穩(wěn)定、方法本身是否引起藥物降解？,雜質的定量方法-HPLC法,峰面積歸一法-簡便、快捷、重現(xiàn) 不加校正因子的主成分自身對照法-解決雜質量與主成分量不在同一線性范圍內(nèi) 加校正因子的主成分自身對照法-解決

16、雜質與主成分響應值不一致 雜質對照法-定位、定量準確,雜質限度的確定,創(chuàng)新藥物雜質限度確定的思路 安全性評價-綜合藥學、藥理毒理及臨床研究結果 -含有一定雜質量樣品的安全性試驗和臨床試驗 -雜質單體直接進行安全性評價 -參考相關文獻 生產(chǎn)可行性評價-考慮工藝的正常波動 -分別計算各批樣品中該雜質的平均值與標準差，平均值+3*SD 產(chǎn)品穩(wěn)定性評價-考慮穩(wěn)定性的影響因素,創(chuàng)新藥雜質研究的階段性,申報臨床階段 應對已有批次產(chǎn)品的雜質進行比較全面的檢測，根據(jù)安全性研究用樣品的雜質含量情況來證明臨床研究用藥品是安全的。 申報生產(chǎn)階段 臨床研究結束后，應將放大生產(chǎn)的樣品與臨床研究樣品中的雜質進行詳細比較；

17、如因生產(chǎn)規(guī)模放大而產(chǎn)生了新的雜質，或已有雜質含量超過原有的限度時，應根據(jù)ICH規(guī)定的限度來判斷該雜質的含量是否合理，如不合理，應參照決策樹來考慮下一步研究。,仿制藥物雜質限度確定的思路,確定依據(jù) -指導原則要求（報告限度、鑒定限度、質控限度） -擬仿品質量標準（該質量標準是否完善） -擬仿品實測結果（雜質種類、雜質含量） -試制樣品研究結果（雜質種類、雜質含量） - 相關文獻資料,1、直接采用擬仿品質量標準中限度 -擬仿品質量標準中雜質控制方法規(guī)范、完善 -擬仿品質量標準中檢測方法適用于試制樣品 -試制樣品雜質水平不超過擬仿品（雜質種類、雜質含量）,2、以擬仿品質量標準中方法及限度為基礎，放寬

18、對個別單一雜質的控制（慎重） -擬仿品質量標準中雜質控制方法規(guī)范、完善 -擬仿品質量標準中檢測方法適用于試制樣品 -試制樣品雜質譜與擬仿品一致，個別已知雜質通過改進工藝，含量已降至較低水平，但仍超過擬仿品標準中限度，在有充分的安全性支持的情況下（比如該雜質為人體內(nèi)主要代謝物質）,3、以擬仿品質量標準中方法及限度為基礎，增加對單一雜質的控制 -擬仿品質量標準中雜質控制方法規(guī)范、完善 -擬仿品質量標準中檢測方法適用于試制樣品 -試制樣品已知雜質水平不超過擬仿品 -有超過鑒定限度的新雜質，經(jīng)過改進工藝后仍超過鑒定限度，但已確證其結構，有安全性支持的情況下 根據(jù)樣品實際的雜質水平、安全性可支持的雜質水

19、平綜合考慮確定雜質限度。,4、根據(jù)指導原則、對比研究結果確定限度 適合以下情況 -擬仿品質量標準中雜質控制方法不完善 -擬仿品質量標準中無有關物質檢查項 -試制樣品雜質譜或雜質含量與擬仿品有較大差異（高于擬仿品實測值2倍） 根據(jù)指導原則中限度控制要求、樣品實際的雜質水平、安全性資料可支持的雜質水平綜合考慮，確定各已知雜質、未知雜質（非特定雜質）、總雜質限度 與新藥的雜質限度確定原則一致,其他類的新藥雜質研究限度確定的思路,改變給藥途徑的產(chǎn)品，其雜質限度的確定參照創(chuàng)新藥物的要求。 改劑型不改變給藥途徑，如果能獲得上市的對照樣品，可參照仿制藥的研究思路，在詳細的質量對比研究的基礎上，確定雜質的限度

20、。如果不能獲得對照樣品，應按照創(chuàng)新藥物的要求確定雜質限度，或通過詳細的安全性試驗來證明已有的雜質限度是安全的,復方制劑的雜質研究,雜質的預測 主藥的穩(wěn)定性 將不穩(wěn)定主藥的降解產(chǎn)物和主藥帶進的毒性雜質或含量較高的雜質（已知雜質）作為重點，在無法兼顧其他雜質時，首先保證此類雜質監(jiān)控。 主藥之間、主藥與輔料之間的相容性 主藥之間的相互作用，應作為重點,研究的思路 1、復方制劑中的已知雜質，應采用雜質對照品法進行檢查 2、復方制劑中各雜質結構相近時，在確保方法專屬性的前提下，可采用一種色譜條件進行雜質研究 3、各雜質結構差異較大，可采用不同檢測方法進行研究 4、各主藥穩(wěn)定性相差較大時，可針對不穩(wěn)定主藥

21、的雜質進行研究 5、各主藥含量相差較大，但穩(wěn)定性均較好，可針對量大的主藥進行研究,6、各主藥穩(wěn)定均較差，或者各主藥量相近、穩(wěn)定性也相近時，建議均進行相應雜質的研究 7、對組分較（多復方氨基酸、多種維生素），應詳細分析各組分的穩(wěn)定性情況，有針對性地進行雜質研究。重點要關注方法的專屬性 8、對多層片但不同片層含不同成分的，如能（切開、分揀）用物理方法簡單分離，可參照單方制劑來進行雜質研究。但應證明主藥之間無遷移現(xiàn)象。,雜質歸屬 相關文獻分析各主藥獨自的已知雜質 HPLC-MS進行定性歸屬 根據(jù)雜質的分子離子峰、特征基團的特征峰、特征元素產(chǎn)生的特征峰 雜質定量 對已知雜質最好用雜質對照品 對未知雜質

22、建議采用含量較?。ɑ蝽憫^弱）的主成分來進行對照 對于各主成分含量相近、響應因子也相近時可采用峰面積的平均值來計算,質量標準中雜質對照品的使用,1、色譜系統(tǒng)適用性試驗需要 2、該雜質與主成分的相對響應因子差異過大（超出0.5-2.0）時，特別是響應因子較小的雜質，怕低估其雜質含量。 3、該雜質的毒性較大，需要專門嚴格控制 4、雜質定位需要,質量標準中雜質的命名,1、通用名稱 該雜質也是一個藥物，且已有藥品通用名稱 2、化學名稱 沒有藥品通用名稱，且化學名稱比較簡單 3、“#雜質A、#雜質B”的命名形式 化學名稱比較長，使用不方便易出現(xiàn)差錯,需要注意的幾點： 1、使用簡稱要謹慎 2、當只有一個已

23、知雜質時，仍要用#雜質A，給將來增加雜質時命名留空間。 3、質量標準中，第一次出現(xiàn)，按照“#（活性組分）雜質A對照品”給出全稱，再次提到可簡稱“雜質A” 4、 “#（活性組分）雜質A對照品”不應寫成“鹽酸#雜質A對照品” 5、在B品種中采用的化學對照品在A品種已出現(xiàn)過，應使用A品種中已出現(xiàn)的對照品全稱，同時在括號中給出該雜質在B品種中的命名。,分析方法的驗證,藥典附錄-藥品質量標準分析方法驗證指導原則 審評中心電子刊物 引用ICH有關物質檢測方法驗證的可接受標準 雜質檢測方法的驗證項目： 定量測定 準確度、精密度、專屬性、定量限、線性、范圍、耐用性 限度檢測 專屬性、檢測限、耐用性 重點在于專

24、屬性和靈敏度的驗證,專屬性 雜質可得-最難分離物質的分離試驗、粗品中間體分離試驗、輔料與雜質及主成分的分離試驗 雜質不可得-強制降解試驗、與另一成熟方法比對峰純度（二極管陣列、質譜，改變流動相比例） 方法不夠專屬時，應多個方法予以補充,破壞性試驗,酸降解，一般用0.1M-1M鹽酸或硫酸 堿降解，一般用0.1M-1M的氫氧化鈉溶液 氧化降解，用合適濃度的過氧化氫溶液 必要時可以加熱 高溫試驗，通常高于加速試驗溫度的10，如50、60。 光照試驗，可采用4500LX 注意：對于原料藥要考慮水溶液或混懸液的降解， 考慮在不同PH值條件下的降解,靈敏度：試樣中能被檢測（或定量）的最低量,通常用檢測限及定量限表征 直觀評價、信噪比、響應值的標