醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料總結(jié)

1、醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料小結(jié)醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料小結(jié) 1、質(zhì)粒、質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)攜帶的染色體外的 DNA 分子，是共價(jià)閉合的環(huán)狀 DNA 分子，能獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制。質(zhì)粒 只有在宿主細(xì)胞內(nèi)才能夠完成自己的復(fù)制。 2、基因、基因指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或 RNA 序列及表達(dá)這些信息所需的全部核苷酸序列，是核酸分子中貯 存遺傳信息的遺傳單位。 3、癌基因、癌基因是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長和分化的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性，它的結(jié)構(gòu)異?；虮?達(dá)異常，可以引起細(xì)胞癌變。 4 4、基因克隆、基因克隆是指把一個(gè)生物體的遺傳信息（基因片段）轉(zhuǎn)入另一個(gè)生物體內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，得到一群完全 相同的基因片段，又稱 DNA

2、 克隆。 5、抑癌基因、抑癌基因是指存在于正常細(xì)胞內(nèi)的一大類可抑制細(xì)胞生長并具有潛在抑癌作用的基因，當(dāng)這類基因在發(fā) 生突變、缺失或失活時(shí)可引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。 6、基因診斷、基因診斷是以 DNA 和 RNA 為診斷材料，通過檢查基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體狀態(tài)和疾病作 出診斷的方法和過程。 7、管家基因、管家基因是在生命過程都是必需的，是在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因，它較少受環(huán) 境因素的影響，其表達(dá)方式為組成性基因表達(dá)。 8、klenow 片段片段亦稱 DNA 聚合酶 1 大片段，為 DNA 聚合酶 I 經(jīng)枯草桿菌蛋白酶裂解后產(chǎn)生的大片段，它除 了保留 53聚

3、合酶活性及 35外切酶活性外，失去了 53外切酶活性，它具有的 35外切 酶活性能保證 DNA 復(fù)制的準(zhǔn)確性，把 DNA 合成過程中錯(cuò)誤配對(duì)的堿基去除，再把正確的核苷酸接上去。 9、核蛋白體、核蛋白體系 tRNA 與蛋白質(zhì)結(jié)合生成的一種復(fù)合體，是蛋白質(zhì)生物合成的場所。 10、限制性內(nèi)切核酸酶、限制性內(nèi)切核酸酶能識(shí)別 DNA 的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其附近切割雙鏈 DNA 的一類內(nèi)切核酸酶， 是基因克隆中最重要的工具酶，通常所說的限制酶是指 2 型酶。主要從原核細(xì)胞中提取，大多數(shù)限制性內(nèi)切酶 是錯(cuò)位切割雙鏈 DNA，產(chǎn)生粘性末端，部分酶則沿對(duì)稱軸切割 DNA 而產(chǎn)生平端。 11、Tm 值值DN

4、A 變性是在一個(gè)相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成的，在這一范圍內(nèi)，紫外吸收值達(dá)到最大值的 50%時(shí) 的溫度稱為 DNA 的解鏈溫度，又稱融解溫度（Tm），其大小與 G+C 含量成正比?；?雙鏈 DNA 變性一半所需 要的溫度叫 DNA 的融解溫度. 12、DNA 的甲基化的甲基化是指 DNA 的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，有一些堿基可以通過加上一個(gè)甲基而被修飾，其作用是對(duì)自身 DNA 產(chǎn)生保護(hù)作用。 13、原位雜交、原位雜交是核酸保持在細(xì)胞或組織切片中，經(jīng)適當(dāng)方法處理細(xì)胞或組織后，將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或 組織中的核酸進(jìn)行雜交的方法。 1414、DNADNA 微陳列微陳列系直接將大量 DNA 探針以顯微打印的方式有序地

5、固化于支持物表面所組成的微陳列（基因芯 片）稱為 DNA 微陳列。. 15、順序作用元件、順序作用元件是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)，能被基因調(diào)控蛋白異性識(shí)別和結(jié)合的 DNA 序列,抱括 啟動(dòng)子.上游啟動(dòng)子元件.增強(qiáng)子.加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件。 16轉(zhuǎn)位因子是指能夠在一個(gè) DNA 分子內(nèi)或 2 個(gè) DNA 分子之間移動(dòng)的 DNA 片段。 17、基因治療-是指通過在特定靶細(xì)胞中表達(dá)該細(xì)胞本來不表達(dá)的基因，或采用特定方式關(guān)閉和抑制異常表達(dá)基 因，達(dá)到治療疾病目的的治療方法。 二、綜合內(nèi)容 1、DNA 的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及特點(diǎn)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及特點(diǎn) 一級(jí)結(jié)構(gòu)是指 DNA 分子中核苷酸的排列順序，二級(jí)結(jié)構(gòu)是指兩

6、條 DNA 單鏈形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)、三股螺 旋結(jié)構(gòu)和四股螺旋結(jié)構(gòu)；三級(jí)結(jié)構(gòu)是指雙鏈 DNA 進(jìn)一步扭曲盤旋形成的超螺旋結(jié)構(gòu)。DNA 一級(jí)結(jié)構(gòu)的基本 特點(diǎn)：4 種脫氧核糖核苷酸以 3，5磷酸二酯鍵相連，形成長鏈，鏈中的脫氧核糖和磷酸都是相同的。組 成 DNA 的堿基有腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胞嘧啶（C）和胸腺嘧啶（T）。DNA 是由兩條單鏈結(jié)合在 一起形成的雙鏈分子，兩條單鏈都是由 A、T、G、C 以千變?nèi)f化的排列組合而形成的。大多數(shù)生物的遺傳信息 都是儲(chǔ)存在 DNA 分子中。DNA 分子主要攜帶兩類遺傳信息，即有功能活性的 DNA 序列所攜帶的信息和調(diào) 控信息。DNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)是指 DNA

7、的雙螺旋結(jié)構(gòu)，其特點(diǎn)為：脫氧核糖與磷酸交替排列構(gòu)成了 DNA 主鏈； 兩條脫氧核苷酸鏈?zhǔn)欠聪蚱叫信帕?，一條是 53方向，另一條為 35方向；以右手方向盤繞成雙螺旋 構(gòu)型；A 配 T，G 配 C。生物體的閉環(huán) DNA 都以超螺旋形式存在，如細(xì)菌質(zhì)粒、一些病毒、線粒體的 DNA 等。 2、RNA 的結(jié)構(gòu)、功能、特點(diǎn)的結(jié)構(gòu)、功能、特點(diǎn) 由 4 種基本的核苷酸以 3，5-磷酸二酯鍵連接而成的長鏈，堿基中沒有 T，而為尿嘧啶（U）。分為 mRNA（信使 RNA），tRNA（轉(zhuǎn) RNA，轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸）和核蛋白體 RNA（rRNA）。mRNA 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：不穩(wěn)定、 代謝活躍，更新迅速，壽命短。原核生物 mRNA

8、 具有操縱子結(jié)構(gòu)，主要是多順反子，mRNA5端無帽子結(jié)構(gòu)， 3端一般無多聚 A 尾巴，沒有修飾堿基；真核 mRNA5端有帽子結(jié)構(gòu)、3端大多有多聚腺苷酸尾巴、分子 中可能有修飾堿基，主要有甲基化、有編碼區(qū)和非編碼區(qū)。tRNA 的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及作用：作用：在蛋白質(zhì)合成過 程轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸，參與蛋白質(zhì)的翻譯。一級(jí)結(jié)構(gòu)含有稀有堿基如 DHU，3端為 3 個(gè)同樣的核苷酸序列（CCA） 序列，此序列是 tRNA 結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)安基酸而生成氨酰 tRNA 所必需的。5端為 G、具有 TC；二級(jí)結(jié)構(gòu)為三 葉草形，三級(jí)結(jié)構(gòu)為倒 L 形； C、rRNA 即核蛋白體 RNA：為細(xì)胞內(nèi)含量最豐富的 RNA，約占細(xì)胞總 RNA 的

9、 80%以上,參與組成核蛋白體，作為蛋白質(zhì)生物合成的場所。原核生物核糖體的沉降系數(shù)為 70S，由 50S 和 30S 兩個(gè)大小亞基組成，30S 小亞基含 16SrRNA 和 21 種蛋白質(zhì),50S 大亞基含 23S 和 5SrRNA 以及 34 種蛋白質(zhì)；真 核生物細(xì)胞核糖體的沉降系數(shù)為 80S，由大小亞基組成，40S 小亞基含 18SrRNA 及 30 多種蛋白質(zhì)，60S 大亞基 含 3 種 rRNA(28S.5.8S.5S)以及大約 45 種蛋白質(zhì)。hnRNA 即核內(nèi)不均-RNA，為真核生物轉(zhuǎn)錄生成的 mRNA 前體。SnRNA 即小分子核內(nèi) RNA，不單獨(dú)存在，常與多種特異的蛋白質(zhì)結(jié)合在

10、一起，形成小分子核內(nèi)核蛋 白顆粒，在 mRNA 的剪接中起重要作用。反義 RNA，又稱調(diào)節(jié) RNA，主要封閉 RNA。 3、參與蛋白質(zhì)合成的氨基酸在特異的氨基酰 tRNA 合成酶催化下，與其相應(yīng)的 tRNA 結(jié)合成氨基酰 tRNA。真核生物起始 tRNA 結(jié)合的氨基酸為蛋氨酸，結(jié)合形成 Met-tRNAimet，翻譯起始時(shí)首先與 40S 核糖體小 亞基結(jié)合形成復(fù)合物。原核生物的起始氨基酸為甲?；鞍彼?，結(jié)合形成 fMet-tRNAffmet。導(dǎo)致 DNA 變性的常 用方法有熱變性、堿變性和化學(xué)試劑變性。DNA 變性的結(jié)果：粘性降低，密度增加，A260 紫外吸收值增加。 4 4、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功

11、能特點(diǎn)、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能特點(diǎn) 蛋白質(zhì)又稱為“功能分子”，根據(jù)功能分為結(jié)構(gòu)蛋白、活性蛋白和信息蛋白。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)是指蛋白 質(zhì)多肽鏈中氨基酸排列的順序。蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可以使蛋白質(zhì)的功能發(fā)生改變，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病 的發(fā)生。因基因突變而導(dǎo)致的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)改變后表現(xiàn)出生理功能的異常，使機(jī)體出現(xiàn)病態(tài)現(xiàn)象，稱為分 子病。蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)單元（形式）有 a-螺旋、-折疊、-轉(zhuǎn)角、無規(guī)則卷曲。一級(jí)結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵是肽 鍵及二硫鍵；二級(jí)結(jié)構(gòu)主要化學(xué)鍵為氫鍵；三級(jí)結(jié)構(gòu)的主要靠疏水作用、離子鍵、氫鍵和范得華力等；四級(jí)結(jié) 構(gòu)的結(jié)合力主要是疏水作用、氫鍵和離子鍵。 5、端粒的主要特點(diǎn)和功能：、端粒的主要特點(diǎn)

12、和功能：特點(diǎn)為：位于真核生物染色體末端、端粒酶催化端粒 DNA 延長、在決定細(xì)胞壽 命中起重要作用、含短的高度重復(fù)序列。其主要功能有：保護(hù)線性 DNA 的完整復(fù)制、保護(hù)染色體末端、決定 細(xì)胞的壽命。 6、DNA 聚合酶（聚合酶（DNApol） 作用是催化 DNA 合成，其活性需要 Mg2+的存在。大腸桿菌 DNA 聚合酶有 I-II、II3 種（即原核生物 DNA 聚合酶）。DNApolI 的功能有：a、聚合作用，使 DNA 鏈沿 53方向延伸，b、35外切酶活性， 即能從 DNA 鏈 3端開始沿 35進(jìn)行水解反應(yīng)，產(chǎn)生 5單核苷酸，糾正復(fù)制過程中的錯(cuò)誤，保證 DNA 復(fù)制的正確性，因而具有校

13、對(duì)功能；C、53外切酶活性，參與 RNA 生物的切除、填補(bǔ)岡崎片段間的空隙 以及 DNA 損傷的修復(fù)。DNApolII：具有 53DNA 聚合酶活性及 35外切核酸酶活性，可能參與 DNA 損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)。DNApolII： 亞基具有催化合成 DNA 的功能； 亞基具有 35外切酶活 性及編輯和校對(duì)功能， 則為裝配所必需，是原核生物復(fù)制延長中真正起催化作用的酶。DNA 聚合酶的共同 性質(zhì)是：需要 DNA 模板；RNA 或 DNA 作為引物；ATP 與 Mg2+的參與；以 dNTP 作底物；DNA 合成的方向是 53。反應(yīng)特點(diǎn)：新生鏈的延伸方向?yàn)?53；半保留方式合成子代 DNA 雙鏈；反應(yīng)

14、需要 DNA 引物。共 同具有的酶活性：53聚合酶活性；35核酸外切酶活性。 7、RNA 聚合酶聚合酶 RNA 聚合酶也稱依賴 DNA 的 RNA 聚合酶，能以 DNA 為模板，四種核苷三磷酸為底物，按照堿基配對(duì) 原則，從 53方向延長 RNA 鏈。原核生物的 RNA 聚合酶只有一種，是由四種亞基 2 組成的五 聚體蛋白質(zhì)，稱為全酶。去掉 亞基后，剩下的 2稱為核心酶。活細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄起始，需要全酶；而核心 酶負(fù)責(zé)催化 RNA 鏈的延伸。 真核生物 RNA 聚合酶有三種，即 RNA 聚合酶 I、II、III。RNA 聚合酶 I 定位在核 仁，主要轉(zhuǎn)錄 5.8S、18S、28S-rRNA 基因；酶

15、II 定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄編碼蛋白質(zhì)的基因，即主要轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生 mRNA；酶 III 定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄 tRNA 和 5S-rRNA 基因。RNA 聚合酶催化聚合反應(yīng)時(shí)需要有 Mg2+或 Mn2+的 存在，無 35外切酶海性，無校對(duì)功能。 8 8、密碼子分為、密碼子分為起始密碼和終止密碼，起始密碼為 AUG，終止密碼為 UAA、UAG 和 UGA，共有 64 種不同的密碼。可 作為原核生物起始密碼的是：AUG.GUG.UUG。 9 9、遺傳密碼具有以下特點(diǎn)：、遺傳密碼具有以下特點(diǎn)： A、連續(xù)性：兩個(gè)密碼子之間沒有任何核苷酸加以分隔，即密碼是無標(biāo)點(diǎn)的。B、方向性：mRNA 中密碼子的排 列是有方

16、向性的，即起始密碼子總是位于編碼區(qū) 5末端，而終止密碼子位于 3末端。每個(gè)密碼子的三個(gè)核苷 酸也是 53方向閱讀，不能倒讀。C、簡并性：是指遺傳密碼中除色氨酸和甲硫氨酸僅有一個(gè)密碼子外， 其余氨基酸有 26 個(gè)密碼子為其編碼。D、通用性：從最簡單的病毒、原核生物、直至人類，都使用同一套遺 傳密碼。E、擺動(dòng)性：翻譯過程中，氨基酸的正確加入，要靠 mRNA 上的密碼子與 tRNA 上的反密碼子相辯認(rèn)。密 碼子與反密碼子配對(duì)辯認(rèn)時(shí)，有時(shí)不完全遵守堿基互補(bǔ)規(guī)律，即使不嚴(yán)格互補(bǔ)也能辯認(rèn)配對(duì)，這種現(xiàn)象稱為擺 動(dòng)。 1010、轉(zhuǎn)錄的過程及特點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄的過程及特點(diǎn) 轉(zhuǎn)錄是以 DNA 為模板，以 4 種 NTP

17、為原料，依堿基配對(duì)規(guī)律，在 DNA 指導(dǎo)的 RNA 聚合酶催化下合成 RNA 的 過程，其過程包括：起始、延長和終止三個(gè)階段。轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn)：A、對(duì)于一個(gè)基因組來說，轉(zhuǎn)錄只發(fā)生在一部 分基因，而且每個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄都受到相對(duì)獨(dú)立的控制。B、轉(zhuǎn)錄是不對(duì)稱的。C、轉(zhuǎn)錄時(shí)不需要引物，而且 RNA 鏈的合成是連續(xù)的。D、轉(zhuǎn)錄的單向性，即 RNA 生物合成時(shí)，只能向一個(gè)方向進(jìn)行聚合，所依賴的模板 DNA 鏈的 方向?yàn)?35，而 RNA 鏈的合成方向?yàn)?53。E、有特定的起始和終止位點(diǎn)。參與轉(zhuǎn)錄終止的因素為 因子或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的 3端發(fā)夾結(jié)構(gòu),轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn):AATAAA+GT 序列。 1111、原核生物、原核生物

18、 DNADNA 復(fù)制的過程及特點(diǎn)復(fù)制的過程及特點(diǎn) 復(fù)制過程包括：起始（復(fù)制起始位點(diǎn)識(shí)別、解螺旋酶解開 DNA 雙鏈，引發(fā)體合成 RNA 引物）延伸（DNA 聚 合酶催化聚合反應(yīng)，連續(xù)合成前導(dǎo)鏈，不連續(xù)合成隨從鏈）。終止（RNA 引物去除、岡崎片段連接、在特殊的 終止結(jié)構(gòu)區(qū)域停止）。復(fù)制的共同特點(diǎn)為：半保留復(fù)制和半不連續(xù)復(fù)制、聚合反應(yīng)都需要模板、底物、DNA 聚合酶及其它酶和蛋白質(zhì)。 1212、真核生物染色體、真核生物染色體 DNADNA 復(fù)制的特點(diǎn)：（原核相反）復(fù)制的特點(diǎn)：（原核相反） 復(fù)制起始點(diǎn)為多個(gè)；復(fù)制叉移動(dòng)速度慢；復(fù)制方向大多數(shù)為雙向；RNA 引物短；岡崎片段短， 不可連續(xù)復(fù)制 131

19、3、翻譯的主要過程及特點(diǎn)、翻譯的主要過程及特點(diǎn) 起始：形成翻譯起始復(fù)合物延長：指每加一個(gè)氨基酸經(jīng)過進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位，使肽鏈從 N 端向 C 端延長。 終止（當(dāng) mRNA 分子中的終止密碼子出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，肽鏈從肽酰-tRNA 中釋出，mRNA、核蛋白體等 分離）。蛋白制合成是一個(gè)耗能過程，每生成一個(gè)肽鍵，要消耗 2 個(gè)高能磷酸鍵，氨基酸活化要消耗 2 個(gè)高能 磷酸鍵，整個(gè)過程可能多于 4 個(gè)高能磷酸鍵。1414、原核生物、原核生物 mRNAmRNA 的加工：的加工：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA 分子不需加工。tRNA 結(jié)構(gòu)基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要加工，才能成為具有生物功能的成熟分子。tRNA 前體

20、的加工包括剪切作用（切除 多余核苷酸）、添加和修復(fù) 3端 CCA 序列，某些堿基的化學(xué)修飾（成熟 tRNA 分子中有稀有堿基）。 1515、翻譯后的加工修飾：、翻譯后的加工修飾： 加工包括：A、去掉 N-甲?；-蛋氨酸或 N 端序列。B、個(gè)別氨基酸的修飾（羥化、磷酸化形成-S-S-等） 。C、多蛋白水解修飾，D、分子伴侶，蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶，肽-脯氨酰順反異構(gòu)酶輔助折疊成空間構(gòu)象。E、 亞基聚合，F(xiàn)、輔基的結(jié)合（糖基化等）。其中 A、B、C 屬一級(jí)結(jié)構(gòu)修飾，D、E、F 屬空間結(jié)構(gòu)修飾。多肽鏈 形成后，氨基酸殘基可進(jìn)行多種共價(jià)修飾，包括；磷酸化，羥基化，ADP-核糖基化，形成胱氨酸及乙?；?/p>

21、 翻譯過程涉及多種分子之間的相互作用，可以歸納為：RNA-蛋白質(zhì)相互作用，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用及 RNA- RNA 相互作用。參與翻譯終止的蛋白質(zhì)因子包括：RF、PR、IF。廣義的核蛋白體循環(huán)包括：翻譯起始，進(jìn) 位，成肽，轉(zhuǎn)位和翻譯終止。 1616、真核生物、真核生物 mRNAmRNA 的加工包括：的加工包括： 5端加帽（由加帽酶催化 5端加入 7-甲苷烏苷酸，形成帽子結(jié)構(gòu) m7GpppmNP-）。 3端加入 Poly(A)尾 （A、組蛋白的成熟 mRNA 無需加 polyA 尾；B、加尾信號(hào)包括 AAUAAA 和富含 GU 的序列；C、加尾不需模板；D 剪切過程需要多種蛋白質(zhì)因子的輔助）。

22、mRNA 前體的剪接（剪接加工以除去內(nèi)含子序列，并將外顯子序列連 接成為成熟的有功能的 mRNA 分子。內(nèi)含子兩端的結(jié)構(gòu)通常是 5-GUAG-3。選擇性剪接的作用機(jī)制包括； A 使用不同的剪接位點(diǎn)，B 選擇使用外顯子，C、反式剪接，D、使用不同的啟動(dòng)子，E、使用不同的多腺苷酸化 位點(diǎn)）。RNA 的編輯（發(fā)生于轉(zhuǎn)錄后水平，改編 mRNA 序列，CU 或 AG，增加遺傳信息容量）。 17、基因表達(dá)是、基因表達(dá)是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定的蛋白 質(zhì)，進(jìn)而發(fā)揮特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過程。但并非所有基因表達(dá)過程都產(chǎn)生蛋白質(zhì)， tRNA、rRNA

23、編碼基因轉(zhuǎn)錄生成 RNA 的過程也屬于基因表達(dá)。基因表達(dá)受到多級(jí)水平的調(diào)控，具有階段特異 性（時(shí)間特異性）和組織特異性（空間特異性）。基因表達(dá)分為幾個(gè)階段：基因活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻 譯、翻譯后加工等、產(chǎn)物是 RNA 和有功能的蛋白質(zhì)。 18、原核生物基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)，、原核生物基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)，主要在轉(zhuǎn)錄水平，其次是翻譯水平。原核生物基因多以操縱子的形式存 在，轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控涉及到啟動(dòng)子、 因子（能與 RNA 聚合酶結(jié)合）、阻遏蛋白(負(fù)調(diào)控)、正調(diào)控蛋白、倒位 蛋白、RNA 聚合酶抑制物、衰減子等多種因素。而翻譯水平的調(diào)控涉及到 SD 序列（位于 AUG 前）、mRNA 的穩(wěn)定性（不

24、穩(wěn)定，其 5端和 3端的發(fā)夾結(jié)構(gòu)可保護(hù)其不被酶水解，mRNA 的 5端與核糖體結(jié)合，可明顯 提高其穩(wěn)定性）、翻譯產(chǎn)物及小分子 RNA 的調(diào)控作用。 19、真核生物基因表達(dá)的調(diào)控環(huán)節(jié)較多，、真核生物基因表達(dá)的調(diào)控環(huán)節(jié)較多，在 DNA 水平可通過染色體丟失，基因擴(kuò)增、基因重排、DNA 甲基 化以及染色體結(jié)構(gòu)改變影響基因表達(dá)，在轉(zhuǎn)錄水平則主要通過反式作用因子的作用調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子與 TATA 盒的 結(jié)合、RNA 聚合酶與轉(zhuǎn)錄因子-DNA 復(fù)合物的結(jié)合及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成；在轉(zhuǎn)錄后水平主要通過 RNA 修 飾、剪接及 mRNA 運(yùn)輸?shù)目刂苼碛绊懟虮磉_(dá)；影響翻譯水平的因素有影響起始翻譯的阻遏蛋白、 5A

25、UG、5端非編碼區(qū)的長度、mRNA 的穩(wěn)定性調(diào)節(jié)及小分子 RNA 等。真核基因調(diào)控中最重要的環(huán)節(jié)是基 因轉(zhuǎn)錄，真核生物基因表達(dá)需要轉(zhuǎn)錄因子、啟動(dòng)子、沉默子和增強(qiáng)子。 20、反式作用因子：、反式作用因子：指能直接或間接辨認(rèn)和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段 DNA 的蛋白質(zhì)，其主要特點(diǎn)包括三個(gè)功能結(jié) 構(gòu)域（DNA 識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域、結(jié)合其它蛋白的結(jié)合域）、能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)的順式作用元件、 對(duì)基因表達(dá)有正性和負(fù)性調(diào)控作用。其活性調(diào)節(jié)方式：表達(dá)式調(diào)節(jié)，共價(jià)修飾，配體結(jié)合及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互 作用。作用方式:成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozing。DNA 結(jié)構(gòu)域包括：鋅指、螺旋轉(zhuǎn)角螺旋、亮氨酸拉鏈和螺 旋環(huán)螺旋。

26、轉(zhuǎn)錄激活域富含：酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺。 2121、參與、參與 DNADNA 復(fù)制（合成）的物質(zhì)包括：復(fù)制（合成）的物質(zhì)包括： 模板（解開成單鏈的 DNA 母鏈）。引物（提供 3OH 未端使 dNTP 可以依次聚合）。底物 （dATP，dGTP，dCTP 和 dTTP）。聚合酶（依賴 DNA 的 DNA 聚合酶（DNApol）。其它的酶和蛋白質(zhì)因子。 DNADNA 復(fù)制復(fù)制的基本過程包括：DNA 雙鏈解開，RNA 引物的合成，DNA 鏈的延長，切除引物，填補(bǔ)缺口，連 接相鄰 DNA 片段，切除和修復(fù)錯(cuò)配堿基。 2222、結(jié)構(gòu)基因突變的類型包、結(jié)構(gòu)基因突變的類型包括點(diǎn)突變、缺失、插入和倒位

27、四類，遺傳密碼的改變分為錯(cuò)義突變、無義突變、同義 突變和移碼突變。 2323、癌基因惡性激活的機(jī)制包括：、癌基因惡性激活的機(jī)制包括：原癌基因點(diǎn)突變，原癌基因獲得外源啟動(dòng)子而激活，原癌基因因甲基化 程度降低而激活，基因易位或重排使原癌基因激活。 2424、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是基因治療中最常用的載體。造血肝細(xì)胞是基因治療中最重要的靶細(xì)胞，禁用生殖細(xì)胞?；?因轉(zhuǎn)移技術(shù)(基因治療技術(shù))包括生物學(xué)方法和非生物學(xué)方法:生物學(xué)方法有:逆轉(zhuǎn)錄病毒載體.腺病毒載體.腺相 關(guān)病毒載體.單純皰疹病毒載體;非生物學(xué)方法有：脂質(zhì)體、直接注射、受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)、DNA磷酸鈣沉 淀法、電穿孔法、顯微注射、顆

28、粒轟擊。 2525、DNADNA 甲基化甲基化的一個(gè)特點(diǎn)是它們經(jīng)過細(xì)胞許多代分裂之后仍保持穩(wěn)定。在真核生物 DNA 中，幾乎所有甲基化均 發(fā)生于二核苷酸序列 5mCG3上。 2626、一個(gè)基因所、一個(gè)基因所包括的序列有：編碼蛋白質(zhì)肽鏈或 RNA 的核酸序列、保證轉(zhuǎn)錄所必需的調(diào)控序列、位于編碼區(qū) 5端上游的非編碼序列、內(nèi)含子、位于編碼區(qū) 3端下游的非編碼序列。 2727、啟動(dòng)子、啟動(dòng)子是 RNA 聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的 DNA 序列,啟動(dòng)子具有方向性，真核生物的啟動(dòng)子必須與轉(zhuǎn)錄因子 結(jié)合后，才能被 DNA 聚合酶識(shí)別和結(jié)合，真核生物的啟動(dòng)子元件是 TATA 蓋,TATA 盒的核心序列是 TAT

29、A(A/T) A(A/T)，位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游25bp 處,啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄方向.模板鏈及轉(zhuǎn)錄效率。上游啟動(dòng)子元件包括：CAAT 盒，CACA 盒和 GC 盒。 2828、逆轉(zhuǎn)錄：、逆轉(zhuǎn)錄：是指以 RNA 為模板，利用宿主細(xì)胞中 4 種 dNTP 為原料，在引物的 3端以 53方向合成與 RNA 互 補(bǔ)的 DNA 鏈的過程，此過程與中心法則方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。 2929、原癌基因產(chǎn)物的類型及細(xì)胞定位、原癌基因產(chǎn)物的類型及細(xì)胞定位 生長因子及其類似物，由細(xì)胞分泌，如 C-sis 家族 （sis 編碼血小板源生長因子，表達(dá)產(chǎn)物與 PDGF 鏈結(jié) 構(gòu)同源）?？缒どL因子受體型的酪氨酸蛋白激酶，如

30、erb-B,表皮細(xì)胞生長因子（EGF）受體；fims,巨噬細(xì) 胞集落刺激因子受體；定位于質(zhì)膜。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子，定位于胞夜,包括 A、低分子量 G 蛋白，如 H-ras 等基因表達(dá)產(chǎn)物；B、胞內(nèi)蛋白激酶（包括與膜結(jié)合的蛋白酪氨酸激酶和胞漿絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶），如 src、abl。核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子：如 myc、fos 等，定位于細(xì)胞核內(nèi)。胞漿調(diào)節(jié)蛋白，如 crk 的產(chǎn)物是存在于胞漿 中的調(diào)節(jié)蛋白，定位于胞漿?？扇苄缘鞍桌野彼峒っ甘荏w和非蛋白激酶受。 3030、細(xì)胞周期的主要調(diào)控點(diǎn)、細(xì)胞周期的主要調(diào)控點(diǎn) 細(xì)胞周期的運(yùn)行受多種因素所調(diào)控，有 2 個(gè)主要調(diào)控點(diǎn)，亦稱為檢測點(diǎn)。 G1/S 期檢測點(diǎn)：在

31、酵母中稱起 點(diǎn)，在哺乳細(xì)胞中稱限制點(diǎn),是控制細(xì)胞進(jìn)入 S 期檢測點(diǎn)（G1 期檢測點(diǎn)）,cyclinB 與 CDK4 和 CDK6 結(jié)合， cyclinE 與 CDK2，CDK3 結(jié)合，通過磷酸化使它們活化。cyclin-CDK 復(fù)合物可使 Rb 蛋白磷酸化，從而釋放轉(zhuǎn)錄 因子 E2F，促進(jìn) DNA 復(fù)制相關(guān)基因的表達(dá)。CDK2 也可和 cyclinA、cyclinA1 結(jié)合，促進(jìn)早 S 期 DNA 合成的起始。 G2/M 期檢測點(diǎn)：是控制細(xì)胞進(jìn)入 M 期檢測點(diǎn)（G2期檢測點(diǎn)），促有絲分裂因子（MPF）由 cyclinB 和 CDK1 組 成，是啟動(dòng)有絲分裂的關(guān)鍵因子。細(xì)胞何時(shí)進(jìn)入 M 期取決于

32、 Cdc2 的磷酸化狀態(tài)。 3131、真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本方法：、真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本方法： 磷酸鈣沉淀法。電穿孔法。脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因?qū)敕āEAE-葡聚糖法。顯微注射法。 3232、DNADNA 損傷的主要類型損傷的主要類型 堿基和糖基破壞錯(cuò)配DNA 鏈斷裂：電離輻射致 DNA 損傷的主要形式DNA 變聯(lián)。上述 DNA 損傷可導(dǎo)致 DNA 模板發(fā)生堿基的置換、插入、缺失、鏈的斷裂，并可影響到染色體的高級(jí)結(jié)構(gòu)。DNA 鏈中一種嘌呤被另一種 嘌呤取代，或嘧啶被另一種嘧啶所取代，稱為轉(zhuǎn)換；嘌呤被嘧呤取代，或反之，稱為顛換；轉(zhuǎn)換和顛換在 DNA 復(fù)制時(shí)可引起堿基錯(cuò)配，導(dǎo)致基因突變；堿基的插入和缺失可引

33、起移碼突變。 3333、DNADNA 修復(fù)機(jī)制的主要類型修復(fù)機(jī)制的主要類型 光修復(fù)；切除修復(fù)；重組修復(fù)；SOS 修復(fù)；錯(cuò)配修復(fù)。 3434、基因文庫篩選的主要方法及原理、基因文庫篩選的主要方法及原理 (1)根據(jù)抗藥性標(biāo)志篩選：對(duì)于帶有某種抗藥性標(biāo)志基因，只有轉(zhuǎn)化成功的受體菌才可能在含該抗生素的培養(yǎng)基 中生存并形成菌落；而沒有轉(zhuǎn)化成功的受體菌，不能在培養(yǎng)基中生長，以此可選擇陽性菌。(2)根據(jù)菌落的呈色 反應(yīng)篩選（互補(bǔ)、藍(lán)-白篩選）：根椐菌落的顏色并結(jié)合插入片段的序列測定篩選。(3)營養(yǎng)缺陷型標(biāo)記法:(4) 核酸分子雜交法：即采用與目的基因部分互補(bǔ)的 DNA 片段作為探針，與含有重組體的細(xì)菌菌落進(jìn)

34、行雜交，以確 定重組體中帶目的基因。包括原位雜交和 southern 印跡雜交。（5）遺傳互補(bǔ)法：載體上的營養(yǎng)代謝標(biāo)記可以 對(duì)宿主細(xì)胞的營養(yǎng)代謝缺陷進(jìn)行互補(bǔ)，以此作為篩選重組體的標(biāo)記。（6）免疫學(xué)方法：如果克隆基因的產(chǎn)物是 已知的，并且在菌落或噬菌斑中表達(dá)，因而可以用相應(yīng)的抗血清或單克隆抗體，通過放射免疫、化學(xué)發(fā)光或顯 色反應(yīng)進(jìn)行篩選。 3535、PCRPCR 的主要步驟及引物設(shè)計(jì)的基本要求的主要步驟及引物設(shè)計(jì)的基本要求 PCR 的主要步驟：PCR 又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是在體外進(jìn)行的 DNA 復(fù)制反應(yīng)過程。其基本過程包括：A、雙 鏈 DNA 模板加熱變性成單鏈(變性),溫度 95 度左右。B、

35、在低溫下引物與單鏈 DNA 互補(bǔ)配對(duì)(退火),85-90 度。 C、延伸：在四種 DNTP 底物及 Mg2+存在條件下，TaqDNA 聚合酶在最適作用溫度（7075）下，根據(jù)堿基互補(bǔ) 配對(duì)原則，從特異結(jié)合到 DNA 模板上的引物 3-OH 端開始摻入單核苷酸，合成新的 DNA 分子。引物設(shè)計(jì)的基 本要求：A、引物長度一般為 1530 個(gè)核苷酸。B、引物中的堿基組成盡可能隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿 基堆積現(xiàn)象，尤其在 3端避免連續(xù) 3 個(gè) G 或 C。C、引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，引物 自身存在的連續(xù)互補(bǔ)序列，一般不超過 3bp。D、兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避

36、免 3端的互補(bǔ)重 疊。E、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過 70%，引物 3末端連續(xù) 8 個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有 完全互補(bǔ)序列。F、引物與模板結(jié)合時(shí)，引物的 5端可以修飾。 3636、乳糖操縱子的正、負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制、乳糖操縱子的正、負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制 乳糖操縱子包含 3 個(gè)結(jié)構(gòu)基因 Z.Y.A（編碼 -半乳糖苷酶，-半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙?；福?、3 個(gè)調(diào)控元件 （啟動(dòng)子、操縱基因和 CAP 結(jié)合位點(diǎn)）和 1 個(gè)調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄起始是由 CAP 和 阻遏蛋白兩種調(diào)控因子來調(diào)控的。（1）阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控：無乳糖時(shí)，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙 RNA 聚合 酶結(jié)合啟動(dòng)子，從

37、而抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時(shí)，生成半乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，使阻遏蛋白構(gòu)象改 變，變構(gòu)的阻遏蛋白不能與操縱序列結(jié)合，阻遏機(jī)制解除，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄，基因得以表達(dá)。cAMP-CAP 復(fù) 合物的正調(diào)控:無葡萄糖時(shí)，cAMP 濃度高，形成的 cAMP-CAP 復(fù)合物結(jié)合于 CAP 結(jié)合位點(diǎn)，增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性， 促進(jìn)下游基因得以表達(dá)；有葡萄糖時(shí)，cAMP 濃度低，cAMP-CAP 復(fù)合物形成受阻，影響轉(zhuǎn)錄活性。正、負(fù)調(diào)控 機(jī)制相輔相成：cAMP-CAP 復(fù)合物是轉(zhuǎn)錄必需的，同時(shí)阻遏蛋白進(jìn)一步控制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)。綜上，乳糖操縱子最強(qiáng)的 表達(dá)條件是有乳糖而無葡萄糖。 3737、雙脫氧末端終止法、雙脫氧末端

38、終止法 DNADNA 測序的主要步驟：測序的主要步驟：雙脫氧末端終止法是以單鏈或雙鏈 DNA 為模板，采用 DNA 引物引導(dǎo) 新生 DNA 的合成，又稱為引物合成法，或酶促引物合成法。其主要步驟為：制備單鏈模板。模板與測序引 物結(jié)合。摻入法標(biāo)記反應(yīng)。延伸-終止反應(yīng)。 變性膠電泳。放射自顯影。閱讀測序結(jié)果。 3838、常用的分子生物學(xué)技術(shù)的原理、過程及特點(diǎn)、常用的分子生物學(xué)技術(shù)的原理、過程及特點(diǎn) 核酸分子雜交技術(shù)：基本原理是：具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定條件下堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，重 新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及復(fù)性過程中各分子間鍵的形成和斷裂等。 特點(diǎn)：直

39、接檢測血清中病毒基因組，無須擴(kuò)增，靈敏度較 PCR 低。在雜交體系中已知的核酸序列稱作探針。 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：PCR 的原理是根據(jù)待測 DNA 片段兩端的核苷酸序列，設(shè)計(jì)并人工合成兩個(gè)分別與 DNA 片 段兩端互補(bǔ)的寡聚核苷酸引物，在有過量的引物、過量的底物（4 種 dNTP）、DNA 聚合酶以及模板（待擴(kuò)增片 段的 DNA 分子）的反應(yīng)體系中，經(jīng)過高溫變性（使 DNA 鏈解開）、低溫退火（使引物與模板結(jié)合）和適溫延伸 （新合成的 DNA 片段）三個(gè)階段的循環(huán)周期，對(duì) DNA 分子進(jìn)行擴(kuò)增。特點(diǎn):極強(qiáng)的擴(kuò)增能力,度高靈敏性,高度特 異性，只需微量模板,只需數(shù)小時(shí),擴(kuò)增產(chǎn)物量大,變性.復(fù)

40、性.延伸三個(gè)步聚循環(huán)進(jìn)行,操作簡便，適用廣泛，但 可出現(xiàn)假陽性. DNA 序列測定：DNA 序列測定是在高分辨率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的，包括 Sanger 雙脫氧鏈末端終止法和化學(xué)降解法。Sanger 法的基本原理是：雙脫氧核苷酸（ddNTP）在 DNA 合成過程 中代替相應(yīng)的脫氧核苷酸（dNTP）作為底物，不能形成 3，5-磷酸二酯鍵而導(dǎo)致鏈延伸終止?；瘜W(xué)降解法： 是采用化學(xué)試劑處理末端放射性標(biāo)記的 DNA 單鏈片段，造成堿基特異性切割，由此產(chǎn)生一組具有不同長度的 DNA 鏈的反應(yīng)混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小分離和放射自顯影，直接讀出待測 DNA 的核苷酸順序。 DNA

41、 芯片技術(shù)：DNA 芯片技術(shù)是一種大規(guī)模集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核苷酸 片段為探針，檢測樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ)，然后通過定性、定量分析得出待測樣品的基因序列及表達(dá)的 信息。DNA 芯片的主要技術(shù)流程包括：芯片的設(shè)計(jì)與制備、靶基因的標(biāo)記（常用熒光色素.生物素或放射性核 素標(biāo)記 dNTP）、芯片雜交與雜交信號(hào)檢測。特點(diǎn)：高通量.鑒別診斷。酶：DNA 聚合酶。所需探針：合成的寡 核苷酸片段，cDNA，已克隆的基因片段，雙鏈或單鏈 DNA 或 RNA，肽核酸。 基因克隆技術(shù)（重組 DNA 技術(shù)）：基因克隆是指某種目的基因的擴(kuò)增與分離過程，具體是從基因組或 DNA 大片段中分離

42、并獲得某一特定的基因或 DNA 片段，再通過 DNA 序列擴(kuò)增形成由眾多拷貝組成的 DNA 拷 貝群體的過程。其基本過程為：A-目的基因的制備；栽體的選擇與制備；B-DNA 分子的體外連接；C-將外源 DNA 導(dǎo)入宿主細(xì)胞；D-目的基因的篩選與鑒定；E-DNA 重組體的擴(kuò)增與表達(dá) 39、原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控的特點(diǎn)比較：、原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控的特點(diǎn)比較： 兩者均涉及 RNA 聚合酶和轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（啟動(dòng)子等）的相互作用。真核需要多種轉(zhuǎn)錄因子輔助、原核 不需要。真核以正調(diào)控為主，原核以負(fù)調(diào)控為主。真核 3 種 RNA 聚合酶負(fù)責(zé)不同種類基因的轉(zhuǎn)錄，原核只 有 1 種 RNA 聚合酶。 4

43、0、原核生物和真核生基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)的比較。、原核生物和真核生基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)的比較。 相同點(diǎn)：轉(zhuǎn)錄起始是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)不同點(diǎn)：A、原核基因表達(dá)調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真 核基因表達(dá)調(diào)控主要包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個(gè)層次。B、原核基因表達(dá)調(diào)控 主要為負(fù)調(diào)節(jié)，真核主要為正調(diào)節(jié)。C、原核轉(zhuǎn)錄起始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA 聚合酶直接結(jié)合啟動(dòng)子，由 因 子決定基因表達(dá)的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎(chǔ)、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴 DNA-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相 互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。D、原核基因表達(dá)調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子 RNA，實(shí)現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)；真 核基因

44、轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子 RNA，功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達(dá)機(jī)制更為復(fù)雜。 4141、質(zhì)粒的特征：、質(zhì)粒的特征： 原核細(xì)胞中染色體外的共價(jià)閉合的環(huán)狀 DNA 分子。能獨(dú)立于細(xì)胞的染色體而進(jìn)行復(fù)制，并依賴于宿主細(xì)胞。 在同一宿主中具有不相容性，即具有相同復(fù)制起始位點(diǎn)和分配區(qū)的兩種質(zhì)粒不能共存于一個(gè)宿主菌。具有 嚴(yán)格的遺傳控制系統(tǒng)（復(fù)制調(diào)控系統(tǒng)，分配系統(tǒng)，細(xì)胞分裂控制系統(tǒng) ，位點(diǎn)特異重組系統(tǒng)）。其所攜帶的遺 傳信息能賦予宿主細(xì)胞特定的遺傳性狀。是 DNA 重組技術(shù)中所使用的主要載體。作為克隆載體的質(zhì)粒具有的 特點(diǎn)：分子量較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)；具有一個(gè)以上的遺傳標(biāo)志；具有多個(gè)限制酶的單

45、一切點(diǎn)，稱為多克隆位點(diǎn)，便于外源基因的插入。 4242、真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)。、真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)。 每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目， 體細(xì)胞一般為雙倍體。真核基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組， 具有許多復(fù)制起點(diǎn)。真核基因組由一個(gè)結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子，即一分子 mRNA 只能翻譯一種蛋白質(zhì)。真核生物分子含有大量重復(fù)順序。真核生物基因組內(nèi)非編碼的順序占 90%以上。 真核基因是斷裂基因。功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族。真核生物基因組中也存在一些可移動(dòng)的遺傳因 素。 4343、蛋白質(zhì)生物合成后的靶向輸送過程及特點(diǎn)：、蛋白質(zhì)生物合成后的靶向輸送過程及

46、特點(diǎn)： 蛋白質(zhì)合成后，定向地被輸送到最終發(fā)揮生物學(xué)功能的部位稱為靶向輸送。靶向輸送的蛋白質(zhì)的 N 端往往有 一些特異的氨基酸序列，稱為信號(hào)序列，是決定蛋白質(zhì)靶向輸送特性的重要元件，通過信號(hào)序列引導(dǎo)蛋白質(zhì)從 胞漿進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng).線粒體.葉綠體和核內(nèi)，靶向不同的蛋白質(zhì)各有特異的信號(hào)序列。分泌型蛋白合成后進(jìn)入內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)，經(jīng)加工，包裝成分泌小泡，再轉(zhuǎn)移.融合到靶部位或分泌出細(xì)胞，其靶向輸送主要靠信號(hào)肽與胞漿中的信號(hào) 肽識(shí)別粒子（SRP）識(shí)別并特異結(jié)合，然后再通過 SRP 與膜上的對(duì)接蛋白（DP）識(shí)別并結(jié)合后，將所攜帶的蛋白 質(zhì)送出細(xì)胞；線粒體蛋白的靶向輸送靠導(dǎo)肽與多種蛋白復(fù)合體介導(dǎo)進(jìn)入基質(zhì)和膜間腔，然后自發(fā)

47、的或在分子伴 侶 HSP70 幫助下折疊形成有功能的蛋白質(zhì)；而細(xì)胞核蛋白的靶向輸送則通過核定位信號(hào)與核輸入受體結(jié)合形成 核蛋白-受體復(fù)合物，被導(dǎo)出核孔，再與核孔復(fù)合體結(jié)合后進(jìn)入細(xì)胞核。 4444、核酸分子雜交的基本方法、核酸分子雜交的基本方法包括：Southern 印跡雜交（鑒別 DNA 靶分子的雜交、待測核酸是 DNA 片段）、 Northern 印跡雜交（鑒別 RNA 靶分子、待測核酸是 RNA）、斑點(diǎn)雜交、原位雜交和液相雜交。 4545、DNADNA 復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的異同。復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的異同。 相同點(diǎn)：模板是 DNA遵守堿基互補(bǔ)規(guī)律新鏈合成方向?yàn)?53催化核苷酸以磷酸二酯鏈連接合成 部位在細(xì)胞

48、核。 不同點(diǎn)：復(fù)制的原材料是 dNTP，轉(zhuǎn)錄的原料是 NTP復(fù)制的主要酶類是 DNA 聚合酶，轉(zhuǎn)錄酶是 RNA 聚合酶復(fù) 制需要 RNA 引物，轉(zhuǎn)錄不需要引物復(fù)制的產(chǎn)物是雙鏈 DNA，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是單鏈 RNA復(fù)制的模板是 DNA 雙鏈 （半保留復(fù)制），轉(zhuǎn)錄的模板是 DNA 單鏈（不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄）復(fù)制的功能是傳遞遺傳信息給子代 ,轉(zhuǎn)錄是表達(dá)信 息所需步聚. 4646、雙脫氧核苷酸末端終止法、雙脫氧核苷酸末端終止法 DNA 序列測定中所需要的順序試劑：M13載體、dNTP、DNA 聚合酶 I 的 klenow 片段， 逆轉(zhuǎn)錄酶，TqaDNA 聚合酶（耐熱 DNA 聚合酶），經(jīng)過修飾的 T7 噬菌菌體

49、DNA 聚合酶，測序酶 2.0 版，雙脫氧 核苷三磷酸（即 2,3-ddNTP）、dNTP 類似物，放射性標(biāo)記的a-32PdNTP。 4747、PCRPCR 體系的主要成分。體系的主要成分。 引物、TaqDNA 聚合酶、dNTP、模板核酸、緩沖液。 4848、DNADNA 聚合酶聚合酶 I I 的作用特點(diǎn)：的作用特點(diǎn)： 模板為 DNA，底物為 4 種脫氧核苷酸（dATP、dCTP、dGTP、dTTP），Mg2+參與，DNA 合成方向?yàn)?53，具有 DNA 聚合酶活性，35及 53核酸外切酶活性，其 53核酸外切酶活性，用于缺口平移 法標(biāo)記 DNA 探針。 基因治療的方法有兩種：體內(nèi)直接轉(zhuǎn)基因，

50、稱為體內(nèi)法；細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療，稱為回體法?；驕缁罴夹g(shù)有： 反義核酸技術(shù)，核酶技術(shù)，三鏈技術(shù)，干擾 RNA 技術(shù)。人的 DNA 端粒含有 TTAGGG 重復(fù)序列。 49.信號(hào)肽的特點(diǎn):能與細(xì)胞質(zhì)中的信號(hào)識(shí)別顆粒結(jié)合,SRP 受體是蛋白質(zhì)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)所必需的,N 端一小段富含蔬 水氨基酸的序列,翻譯的同時(shí)引導(dǎo)新生多肽鏈穿過內(nèi)質(zhì)網(wǎng). 基因組文庫采用限制酶將基因組 DNA 切成片段，每一 DNA 片段都與一個(gè)載體分子拼接成重組 DNA，將全部 DNA 分子都引入宿主細(xì)胞并擴(kuò)增所得到的分子克隆混合體叫基因組文庫。 50.基因重組是指 DNA 之間的共價(jià)連接.在分子克隆中的克隆是指無性繁殖 DNA?；?/p>

51、工程中目的基因的來源可 以是:化學(xué)合成.PCR 合成.細(xì)胞 DNA.組織 DNA.cDNA 文庫。 分子生物學(xué)需要掌握的重點(diǎn)：分子生物學(xué)需要掌握的重點(diǎn)： DNA、RNA、蛋白質(zhì)、質(zhì)粒、基因、端粒、聚合酶、密碼子、突變、變性的概念或結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及特點(diǎn)； 復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯、加工修飾、靶向輸送的主要過程及特點(diǎn)； 癌基因的概念、原癌基因產(chǎn)物的類型及細(xì)胞定位、癌基因活化致癌的主要機(jī)制； 常用分子生物學(xué)技術(shù)的原理、主要步驟、酶學(xué)及特點(diǎn)； 基因表及其調(diào)控的原理、主要過程或步驟，乳糖操縱子的正、負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制； 常用的基因診斷及基因治療技術(shù)； 基因克隆、基因診斷、基因治療、管家基因、抑癌基因、Klenow

52、片段、核蛋白體、限制性內(nèi)切核酸酶、人類 基因組計(jì)劃、原位雜交的概念； 雙脫氧末端終止法 DNA 測序、重組 DNA 技術(shù)的主要步驟； 結(jié)構(gòu)基因、順式作用元件、啟動(dòng)子、遺傳密碼、反式作用因子、氨基酰-tRNA、基因組文庫、DNA 多態(tài)性、轉(zhuǎn) 位因子、探針、Tm 值、DNA 微陣列、DNA 甲基化的概念、性質(zhì)； 核酸分子雜交的主要類型、PCR 的主要步驟及引物設(shè)計(jì)； DNA、RNA 及多肽鏈的合成方向； 真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本方法； 細(xì)胞周期的主要調(diào)控點(diǎn)； DNA 損傷及修復(fù)的主要類型和機(jī)制； 基因文庫篩選的主要方法及原理。 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)主要內(nèi)容 1、醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)：醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)是分子生物學(xué)的一個(gè)

53、重要分支，是從分子水平研究人體在正常和 疾病狀態(tài)下生命活動(dòng)及其規(guī)律的一門科學(xué)。 2、基因的概念、功能 基因：是貯存遺傳信息的核酸（DNA 或 RNA）片段，包括編碼 RNA 和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控序 列兩部分。 基因的功能：1、利用 4 種堿基的不同排列荷載遺傳信息；2、通過復(fù)制將所有的遺傳信息穩(wěn)定、忠實(shí) 地遺傳個(gè)子代細(xì)胞；3、作為基因表達(dá)的模版。 3、DNA、RNA 的結(jié)構(gòu)和功能 功能：DNA:DNA 的基本功能是以基因的形式荷載遺傳信息，并作為基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的模板。它是生命 遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是個(gè)體生命活動(dòng)的信息基礎(chǔ)。 RNA:1、mRNA：攜帶蛋白質(zhì)的序列信息，在翻譯過程作為模板

54、指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成 2、tRNA:在蛋白質(zhì)生物合成時(shí)運(yùn)輸氨基酸 3、核蛋白體：介導(dǎo) rRNA 與 mRNA 的結(jié)合 rRNA 與核蛋白體蛋白的結(jié)合 rRNA 與 tRNA 的相互識(shí)別和相互作用 4、小分子 RNA：參與 mRNA 的剪接、加工 U3 與 rRNA 加工有關(guān) 4、不同生物基因的基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 原核生物：5-啟動(dòng)子-結(jié)構(gòu)基因-轉(zhuǎn)錄終止子-3 真核生物：由 1 個(gè)結(jié)構(gòu)基因+轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列組成，mRNA 多是單順反子，rRNA 基因結(jié)構(gòu)是多順反子 病毒：與真核基因相比很小，一般沒有內(nèi)含子，調(diào)控序列較少，有不規(guī)則基因 5、原核、真核生物基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列有哪些 （1）原核生物：啟動(dòng)子、終止子、

55、操縱原件、正調(diào)控蛋白結(jié)合位點(diǎn)； 啟動(dòng)子：提供轉(zhuǎn)錄起始信號(hào)，其本身不出現(xiàn)于 RNA 產(chǎn)物中。其中有著“TATAAT”的共有特征序列，稱 為普里布諾盒。 終止子：提供 RNA 合成終止信號(hào)。其含有 GC 富集區(qū)組成的回文特征序列。 操縱元件：被阻遏蛋白識(shí)別與結(jié)合。與啟動(dòng)子通常有部分重疊。 正調(diào)控蛋白結(jié)合位點(diǎn)：加強(qiáng)下游結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。 （2）真核生物：啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)子元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等。 啟動(dòng)子：提供轉(zhuǎn)錄起始信號(hào)，啟動(dòng)子本身通常不被轉(zhuǎn)錄，除了編碼 tRNA 基因的啟動(dòng)子。分為三類： I 類啟動(dòng)子富含 GC 堿基對(duì)，編碼 rRNA 的基因，除了 5SrRNA。II 類啟動(dòng)子具有

56、TATA 盒特征結(jié)構(gòu),編 碼蛋白質(zhì)（mRNA）的基因和一些小 RNA 基因。III 類啟動(dòng)子包括 A 盒、B 盒、C 盒，編碼 5SrRNA、tRNA、U6snRNA。 增強(qiáng)子：順式作用元件，增強(qiáng)鄰近基因的轉(zhuǎn)錄。 沉默子：負(fù)性調(diào)控元件，可抑制基因轉(zhuǎn)錄的特定序列。 6、操縱子、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、斷裂基因、內(nèi)含子和外顯子的概念 操縱子：功能上相關(guān)聯(lián)的數(shù)個(gè)結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，由一套轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列控制其轉(zhuǎn)錄，構(gòu)成的基因表 達(dá)單位。 啟動(dòng)子：指結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近的一段 DNA 序列，它結(jié)合 RNA 聚合酶（真核生物還需要結(jié)合 其他蛋白質(zhì)因子）后能夠開放基因轉(zhuǎn)錄。 增強(qiáng)子：是可以增強(qiáng)真核生物基因啟動(dòng)子

57、的工作效率的順式作用元件。 斷裂基因：真核生物的結(jié)構(gòu)基因中，編碼區(qū)與非編碼區(qū)間隔排列。 內(nèi)含子：指在真核生物的斷裂基因及其初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中出現(xiàn)，但在成熟 RNA 中被剪接除去的核酸序列。 外顯子：指在真核生物的斷裂基因及其成熟 RNA 中都存在的核酸序列。 7、基因組的定義和功能 定義：細(xì)胞或生物體中，一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。 功能：儲(chǔ)存和表達(dá)遺傳信息 8、真核生物基因組的特點(diǎn) 真核生物的基因組龐大，出了結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu)與原核生物大不相同以外，還存在大量的非結(jié)構(gòu)基因區(qū) 域。真核細(xì)胞基因組具有結(jié)構(gòu)基因呈斷裂基因形式、以單順反子轉(zhuǎn)錄、結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占比 例小于非編碼區(qū)域的特點(diǎn)。真核細(xì)胞基

58、因組存在大量重復(fù)序列，可以分為高度重復(fù)序列、中毒重復(fù) 序列和單拷貝或低度重復(fù)序列等 3 種。真核基因組的另一特點(diǎn)是存在多基因家族。 9、原核生物基因組的特點(diǎn) 原核生物的基因組主要是染色體 DNA。 特點(diǎn)：1、基因組中很少有重復(fù)序列；2、編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因多為單拷貝基因，但編碼 rRNA 的基因 仍然是多拷貝基因；3、結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占的比 例遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真核基因組，但小于病毒基因組； 4、許多結(jié)構(gòu)基因在基因組中以操縱子為單位排列。 10、質(zhì)粒、基因重疊、基因組、假基因、核酶 質(zhì)粒：細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的、染色體外的 DNA 分子，是共價(jià)閉合的環(huán)狀 DNA 分子，能夠獨(dú)立于細(xì)胞的染色質(zhì) DNA 而進(jìn)行復(fù)

59、制。 基因重疊：同一 DNA 片段可以是 2 種甚至 3 種蛋白質(zhì)分子的部分編碼區(qū)。 基因組：細(xì)胞或生物體中，一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。 假基因：與有功能的基因同源，但不能產(chǎn)生有功能的基因產(chǎn)物的基因。 核酶：指具有催化活性的 RNA，其作用底物是 RNA，主要參與 RNA 的加工成熟。 11、DNA 復(fù)制過程的共同特點(diǎn) 1、半保留復(fù)制方式保證了遺傳信息的忠實(shí)傳遞；2、基因組 DNA 都有固定的復(fù)制起始點(diǎn)；3、復(fù)制 子是基本復(fù)制單位；4、雙向復(fù)制形成復(fù)制泡和復(fù)制叉；5、半不連續(xù)復(fù)制方式克服了 DNA 空間結(jié)構(gòu) 對(duì) DNA 新鏈合成的制約。 12、DNA 復(fù)制保真性的機(jī)制 1、DNA 聚合酶對(duì)堿基配對(duì)的選擇作用