腸胃舒膠囊等種中成藥微生物.ppt

1、腸胃舒膠囊等6種中成藥微生物限度檢查法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)總結(jié),一目的,香港仁奇診所：受你診所的委托，我所抗生素室對(duì)腸胃舒膠囊等6種中成藥微生物限度檢測，并對(duì)其進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，歸納總結(jié)如下：,二樣品,骨絡(luò)通酒011362北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、化瘤膠囊302107北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、腎寧丸21006北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、消渴丸0201960北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、腸胃舒膠囊030610北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、防癌膠囊100210北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司,三菌種,枯草桿菌63501、金黃色葡萄球菌26003、大腸桿菌44102、白色念珠菌98001、黑曲霉98003、沙門氏菌50094。,四方法,中國藥典2000版

2、與2019版微生物限度檢查法方法驗(yàn)證的比較實(shí)驗(yàn)。,五方法驗(yàn)證：,（一）菌液制備,1取經(jīng)37培養(yǎng)18-24小時(shí)，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌肉湯培養(yǎng)物1ml+9ml鹽水10倍稀釋至10-5 10-7為50100個(gè)/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。 2取經(jīng)25 培養(yǎng)1824小時(shí)的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml+9 ml鹽水10倍稀釋至10-5 10-7為50100個(gè)/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。 3取經(jīng)25 培養(yǎng)1周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加35ml鹽水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，與濁度相當(dāng)后，取1 ml +9 ml鹽水=10-1，逐管10倍稀釋為10- 4約50100個(gè)/ ml，做活菌計(jì)數(shù)備用

3、。,（二）供試液制備,稱取各品種樣品10 g，加0.1%胨水氯化鈉稀釋液100 ml濃度均為1：10供試液，分別人工污染上述5種試驗(yàn)菌株。,（三）培養(yǎng)基稀釋法,采用加0.5 ml、0.2 ml、0.1 ml /皿供試液，再加1520 ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)2448小時(shí)觀察結(jié)果，細(xì)菌計(jì)數(shù)，測定回收率。,（四）離心集菌薄膜過濾法,分別取不同品種的1：10供試液10 ml，移至滅菌的離心管中，以500轉(zhuǎn)/分5分種后，取上清液1 ml，加入薄膜過濾器中，采用0.1%蛋白胨氯化鈉沖洗液300ml/膜，再加規(guī)定菌株沖洗后，取膜貼于瓊脂平板，置規(guī)定溫度培養(yǎng)2472小時(shí)觀察結(jié)果,（五）回收率

4、測定：,1) 試驗(yàn)組,分別取不同品種的1：10供試液1 ml、50100個(gè)/ ml 試驗(yàn)菌株，同時(shí)加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)2472小時(shí)觀察結(jié)果。薄膜過濾法以最后一次的沖洗液加入試驗(yàn)菌。,2) 活菌組,測定每一菌株加的試驗(yàn)菌數(shù),3) 供試液對(duì)照,測定供試品本底菌數(shù),4) 稀釋劑對(duì)照組,四結(jié)果見表1.2.3.,表1結(jié)果可見,1.采用常規(guī)方法檢驗(yàn)個(gè)品種，人工污染5株代表菌株，其中化瘤膠囊、腎寧丸，個(gè)品種供試品的回收率均高于70%，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，無抗菌活性，可采用常規(guī)方法檢驗(yàn)。 2有3個(gè)品種對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草桿菌有不同程度的抗菌活性，腸胃舒膠囊、骨絡(luò)通酒、消渴丸3個(gè)

5、品種供試品回收率為166.6%，有明顯的抗菌活性。此外防癌膠囊對(duì)大腸桿菌的回收率為 35.4%低于70%，有抗菌作用，不可采用常規(guī)方法，可采用適宜方法進(jìn)行檢驗(yàn),3采用培養(yǎng)基稀釋法,測定上述含抑菌成份的中成藥微生物限度驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表2.3。,其回收率顯示，骨絡(luò)通酒、消渴丸稀釋0.5ml/皿對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草桿菌回收率均超過70%，可用此法測定。防癌膠囊對(duì)枯草桿菌回收率超過70%，而對(duì)大腸桿菌回收率低于70%，稀釋至0.2ml/皿對(duì)大腸桿菌回收率超過70%，可采用稀釋法0.2ml/皿測定。胃腸舒膠囊對(duì)枯草桿菌采用稀釋法0.2ml/皿，仍不可除去其抗菌成分，應(yīng)采用薄膜過濾法進(jìn)行測定。,表2結(jié)

6、果證明,采用培養(yǎng)基稀釋法，人工污染金黃色葡萄球菌、枯草桿菌可消除抗菌作用。 回收率達(dá)到70%以上的骨絡(luò)通酒、消渴丸可采用培養(yǎng)基稀釋法（0.5ml/皿）檢驗(yàn)。其中腸胃舒膠囊對(duì)金黃色葡萄球菌回收率低于70%，防癌膠囊對(duì)大腸埃希菌回收率低于70%，故應(yīng)降低稀釋度（0.1、0.2ml/皿），進(jìn)行檢驗(yàn)。,培養(yǎng)基稀釋法和薄膜過濾法回收率結(jié)果 表3,表3結(jié)果證明,采用培養(yǎng)基稀釋法0.2 ml /皿，人工污染大腸埃希菌，防癌膠囊回收率達(dá)到70%以上；人工污染金黃色葡萄球菌，腸胃舒膠囊回收率達(dá)到70%以上，而對(duì)枯草桿菌回收率62.0%，仍不可消除抗菌作用，采用薄膜過濾法進(jìn)行測定，回收率為100 %。,五、結(jié)論,通過方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明，上述6個(gè)品種中，腎寧丸、化瘤膠囊可采用常規(guī)方法檢驗(yàn)；骨絡(luò)通酒、消渴丸采用稀釋法（0.5ml/皿）；防癌膠囊