GB 5009.84-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B1的測定

016 前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替003食品中硫胺素(維生素測定、010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素76282008谷物中維生素008肉與肉制品 維生素本標(biāo)準(zhǔn)與003相比,主要變化如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素增加了高效液相色譜法,作為第一法,將熒光光度法作為第二法;修改了檢出限的表達(dá),增加了方法的定量限;增加了人造沸石預(yù)處理中氯離子的定性鑒別方法;增加了溴甲酚綠為指示劑時(shí),溶液顏色的變化特征;刪去了圖1(反應(yīng)瓶)和圖2(鹽基交換管)結(jié)構(gòu)圖;增加了人造沸石以濕重表示時(shí)的稱取量。0161 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高效液相色譜法、熒光光度法測定食品中維生素標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中維生素一法 高效液相色譜法2 原理樣品在稀鹽酸介質(zhì)中恒溫水解、中和,再酶解,水解液用堿性鐵氰化鉀溶液衍生,正丁醇萃取后,經(jīng)高效液相色譜標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。丁醇(氰化鉀N)6。氧化鈉(酸(酸鈉(乙酸(醇(色譜純。氧化二磷(者氯化鈣(瓜蛋白酶:應(yīng)不含維生素活力800U(活力單位)/0 淀粉酶:應(yīng)不含維生素活力3700U/g。氰化鉀溶液(20g/L):稱取2水溶解并定容至100勻。臨用前配制。氧化鈉溶液(100g/L):稱取25水溶解并定容至250勻。性鐵氰化鉀溶液:將5勻。臨用前配制。酸溶液():水稀釋至1000勻。酸溶液():鹽酸溶液50水稀釋并定容至500勻。酸鈉溶液():900水定容至10000162 酸鈉溶液():水溶解并定容至100勻。合酶溶液:水定容至50旋,使呈混懸狀液體,冷藏保存。臨用前再次搖勻后使用。準(zhǔn)品維生素酸硫胺素(,7度生素00g/相當(dāng)于50鹽酸溶液溶解并定容至100勻。置于04冰箱中,保存期為3個(gè)月。生素水稀釋并定容至100勻。臨用前配制。生素取維生素00L、200L、400L,800L,1000L,用水定容至10準(zhǔn)系列工作液中維生素用時(shí)配制。4 效液相色譜儀,配置熒光檢測器。析天平:心機(jī):轉(zhuǎn)速4000r/.4 織搗碎機(jī)(最大轉(zhuǎn)速不低于10000r/熱恒溫干燥箱或高壓滅菌鍋。5 體或固體粉末樣品:將樣品混合均勻后,立即測定或于冰箱中冷藏。鮮水果、蔬菜和肉類:取500類取250g),用勻漿機(jī)或者粉碎機(jī)將樣品均質(zhì)后,制得均勻性一致的勻漿,立即測定或者于冰箱中冷凍保存。他含水量較低的固體樣品:如含水量在15%左右的谷物,取100粉碎機(jī)將樣品粉碎后,制得均勻性一致的粉末,立即測定或者于冰箱中冷藏保存。液提取稱取3g5g(體試樣或者10g20有軟質(zhì)塞子),鹽酸溶液,充分搖勻,塞上軟質(zhì)塞子,高壓滅菌鍋中121保持30解結(jié)束待冷卻至40以下取出,輕搖數(shù)次;用根據(jù)酶活力不同適當(dāng)調(diào)整用量)混合酶溶液,搖勻后,置于培養(yǎng)箱中37過夜(約16h);將酶解液全部轉(zhuǎn)移至100水定容至刻度,搖勻,離心或者過濾,取上清液備用。0163 旋混勻后,充分分層后,吸取正丁醇相(上層)濾液于2分析用。若試液中維生素取上清液稀釋適宜倍數(shù)后,重新衍生后進(jìn)樣。試液同步進(jìn)行衍生化。注1:室溫條件下衍生產(chǎn)物在42:3:辣椒干等樣品,提取液直接衍生后測定時(shí),維生素取液經(jīng)人造沸石凈化后,再衍生時(shí)維生素對于個(gè)別特殊樣品,當(dāng)回收率偏低時(shí),樣品提取液應(yīng)凈化后再衍生,譜柱:徑5m,250相當(dāng)者。動(dòng)相:乙酸鈉溶液5+35)。速: 檢測波長:激發(fā)波長375射波長435 進(jìn)樣量:20L。準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液衍生物注入高效液相色譜儀中,測定相應(yīng)的維生素標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度(g/橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣衍生物溶液注入高效液相色譜儀中,得到維生素?fù)?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測液中維生素 分析結(jié)果的表述試樣中維生素硫胺素計(jì))含量按式(1)計(jì)算:X=cV000100(1)式中:X試樣中維生素硫胺素計(jì))的含量,單位為毫克每百克(00g);c由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試液(提取液)中維生素位為微克每毫升(g/V試液(提取液)的定容體積,單位為毫升(f試液(上清液)衍生前的稀釋倍數(shù);m試樣的質(zhì)量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。注:得鹽酸硫胺素的含量。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。0164 8 照本標(biāo)準(zhǔn)方法的定容體積,00g,00g。第二法 熒光分光光度法9 原理硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成噻嘧色素,在紫外線照射下,噻嘧色素發(fā)出熒光。在給定的條件下,以及沒有其他熒光物質(zhì)干擾時(shí),此熒光之強(qiáng)度與噻嘧色素量成正比,即與溶液中硫胺素量成正比。如試樣中含雜質(zhì)過多,應(yīng)經(jīng)過離子交換劑處理,使硫胺素與雜質(zhì)分離,然后以所得溶液用于測定。10 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的二級水。丁醇(水硫酸鈉(560烘烤6氰化鉀N)6。氧化鈉(酸(酸鈉(乙酸(造沸石。酸銀(甲酚綠(氧化二磷(者氯化鈣(化鉀(粉酶:不含維生素活力3700U/g。瓜蛋白酶:不含維生素活力800U(活力單位)/鹽酸溶液:水稀釋并定容至1000勻。鹽酸溶液:鹽酸溶液50水稀釋并定容至500勻。乙酸鈉溶液:稱取272水溶解并定容至1000勻。合酶液:化鉀溶液(250g/L):稱取250水溶解并定容至1000勻。性氯化鉀(250g/L):250g/勻。0165 氧化鈉溶液(150g/L):稱取150水溶解并定容至1000勻。氰化鉀溶液(10g/L):稱取1水溶解并定容至100勻,于棕色瓶內(nèi)保存。性鐵氰化鉀溶液:移取4鐵氰化鉀溶液(用150g/勻。用時(shí)現(xiàn)配,避光使用。酸溶液:量取30水稀釋并定容至1000勻。硝酸銀溶液:100棕色瓶中保存。氫氧化鈉溶液:水溶解并定容至100勻。甲酚綠溶液():于小研缽中,氫氧化鈉溶液研磨片刻,再加入少許水繼續(xù)研磨至完全溶解,用水稀釋至250性人造沸石:0目)0目)的人造沸石于2000入10倍于其體積的接近沸騰的熱乙酸溶液,振蕩10置后,棄去上清液,再加入熱乙酸溶液,重復(fù)一次;再加入5倍于其體積的接近沸騰的熱250g/蕩15出上清液;再加入乙酸溶液,振蕩10出上清液;反復(fù)洗滌,最后用水洗直至不含氯離子。氯離子的定性鑒別方法:取1滌液)于5硝酸銀溶液,振蕩,觀察是否有渾濁產(chǎn)生,如果有渾濁說明還含有氯離子,繼續(xù)用水洗滌,直至不含氯離子為止。將此活性人造沸石于水中冷藏保存?zhèn)溆?。使用時(shí),倒入適量于鋪有濾紙的漏斗中,準(zhǔn)品鹽酸硫胺素(7度生素00g/相當(dāng)于硫胺素為100鹽酸溶液溶解,并稀釋至1000勻。于04冰箱避光保存,保存期為3個(gè)月。生素鹽酸溶液稀釋10倍,搖勻,在冰箱中避光保存。生素水稀釋、定容至100勻。臨用前配制。11 光分光光度計(jì)。心機(jī):轉(zhuǎn)速4000r/1.3 熱恒溫箱。基交換管或?qū)游鲋?60000平:0166 12 樣預(yù)處理用勻漿機(jī)將樣品均質(zhì)成勻漿,于冰箱中冷凍保存,用時(shí)將其解凍混勻使用。干燥試樣取不少于150g,將其全部充分粉碎后備用。取準(zhǔn)確稱取適量試樣(估計(jì)其硫胺素含量約為10g30g,一般稱取2g10置于100鹽酸溶液,使得樣品分散開,將樣品放入恒溫箱中于121水解30束后,涼至室溫后取出。用2g/定至溶液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)綠色。酶解:于水解液中加入24550溫箱中保溫過夜(16h)。待溶液涼至室溫后,轉(zhuǎn)移至100水定容至刻度,混勻、過濾,即得提取液?；b柱:根據(jù)待測樣品的數(shù)量,取適量處理好的活性人造沸石,經(jīng)濾紙過濾后,放在燒杯中。用少許脫脂棉鋪于鹽基交換管柱(或?qū)游鲋?的底部,加水將棉纖維中的氣泡排出,關(guān)閉柱塞,加入約20濕重計(jì),預(yù)先處理的活性人造沸石,要求保持鹽基交換管中液面始終高過活性人造沸石。活性人造沸石柱床的高度對維生素度不低于45品提取液的凈化:準(zhǔn)確加入20層析柱)中,使通過活性人造沸石的硫胺素總量約為2g5g,流速約為1滴/s。加入10速約為1滴/s,棄去淋洗液,如此重復(fù)三次。于交換管下放置25兩次加入20酸性氯化鉀溶液,每次10速為1滴/s。待洗脫液涼至室溫后,用250g/勻,即為試樣凈化液。標(biāo)準(zhǔn)溶液的處理:重復(fù)上述操作,取20替試樣提取液,同上用鹽基交換管(或?qū)游鲋?凈化,即得到標(biāo)準(zhǔn)凈化液。化將5兩支已標(biāo)記的50避光條件下將3氫氧化鈉溶液加入離心管A,將3入離心管B,渦旋15s;然后各加入10A、置分層后吸取上層有機(jī)相于另一套離心管中,加入2g3旋20s,使溶液充分脫水,待測定。光測定條件激發(fā)波長:365射波長:435縫寬度:50167 次測定下列熒光強(qiáng)度a) 試樣空白熒光強(qiáng)度(試樣反應(yīng)管A);b)標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度(標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)管A);c)試樣熒光強(qiáng)度(試樣反應(yīng)管B);d)標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度(標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)管B)。13 分析結(jié)果的表述試樣中維生素硫胺素計(jì))的含量按式(2)計(jì)算:X=(cV(V1m1001000(2)式中:X試樣中維生素硫胺素計(jì))的含量,單位為毫克每100克(00g)。U試樣熒光強(qiáng)度;試樣空白熒光強(qiáng)度;S標(biāo)準(zhǔn)管熒光強(qiáng)度;標(biāo)準(zhǔn)管空白熒光強(qiáng)度;c硫胺素標(biāo)準(zhǔn)使用液的濃度,單位為微克每毫升(g/V用于凈化的硫胺素標(biāo)準(zhǔn)使用液體積,單位為毫升(試樣水解后定容