【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）川崎病患兒血清TPO、TSP-1動(dòng)態(tài)變化的研究及意義

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 1 前言 川崎?。?稱皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合癥， 1967年由日本醫(yī)生川崎富作首次報(bào)道，至今病因尚不明確，以非特異性全身性血管炎為主要特征，在 免疫活化過(guò)程中，凝血系統(tǒng)被激活，血小板數(shù)量增加，活性增強(qiáng)，形成炎癥 管內(nèi)皮細(xì)胞受損和活化，出現(xiàn)廣泛的血管炎，進(jìn)而形成冠狀動(dòng)脈狹窄及栓塞等并發(fā)癥。 月至 5歲嬰幼兒，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì) 1。 民族，其中亞洲地區(qū)發(fā)病率相對(duì)較高，位居兒童血管炎的第二位，已經(jīng)取代風(fēng)濕性心臟病等，成為目前歐美國(guó)家獲 得性心臟病最常見(jiàn)的原因 2。 在我國(guó)， 前發(fā)病機(jī)制尚不明確， 探討 療及 預(yù)后評(píng)估等具有重要意義。 血小板的動(dòng)態(tài)變化與 研究 3顯示： 個(gè)重要的病理生理階段，第一階段出現(xiàn)發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、皮膚黏膜的相應(yīng)改變，此期血小板數(shù)量正常；第二階段發(fā)熱等癥狀消退，開(kāi)始出現(xiàn)趾指末端脫屑，此期外周血血小板數(shù)量劇增，是冠狀動(dòng)脈病變及血栓事件發(fā)生的最常見(jiàn)階段；第三階段上述臨床表現(xiàn)消失，血小板數(shù)量逐漸恢復(fù)正常。能夠順利渡過(guò)前兩階段 的患兒病情會(huì)逐漸好轉(zhuǎn)，但發(fā)生冠狀動(dòng)脈病變的患兒可能會(huì)面臨心肌梗死或冠脈血栓形成等危及生命的事件?；谘“逶?兒病程中的動(dòng)態(tài)變化與臨床表現(xiàn)及冠狀動(dòng)脈病變等并發(fā)癥相關(guān)，巨核細(xì)胞生成增多及外周血血小板數(shù)量及功能狀態(tài)改變?cè)?研究發(fā)現(xiàn) 量增多，產(chǎn)生血小板功 能增強(qiáng)，外周血血小板數(shù)量增多并且體積增大 4。血小板的生成經(jīng)過(guò)增殖、定向分化等復(fù)雜過(guò)程，受到多重因素調(diào)控， 外周血血小板數(shù)量最終取決于正向及負(fù)向調(diào)控因素 作用 的總體效應(yīng)。 當(dāng)血小板被激活后，即可 發(fā)生釋放反應(yīng)，釋放其內(nèi)容物，促進(jìn)血小板進(jìn)一步增多、聚集，參與血栓形成 ，與 兒并發(fā)癥的發(fā)生有關(guān) 。血小板相關(guān)參數(shù)與血小板產(chǎn)生、活化、降解相關(guān)，其動(dòng)態(tài)變化可以間接反應(yīng)血小板的功能狀態(tài)。血小板貫穿于 性癥狀消退后，給予阿司匹林、雙嘧達(dá)莫等抗血小板聚集治療可有效預(yù)防血栓形成 ，與繼發(fā)性血小板增多癥的特點(diǎn) 符合，深入研究導(dǎo)致血小板升高的機(jī)理對(duì)闡明 調(diào)控巨核細(xì)胞及血小板生成的因素眾多，其中最受關(guān)注的是血小板生成素 （ 被認(rèn)為是促進(jìn)血小板生成的最基本細(xì)胞因子。 通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的受體 起受體同源二聚蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 2 化，二聚化的受體與胞內(nèi) 導(dǎo) 而調(diào)節(jié)基因的表達(dá)， 促進(jìn)造血祖細(xì)胞向巨核細(xì)胞系分化，促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖、分化、成熟并分裂形成有功能的血小板， 是巨核細(xì)胞特有的造血生長(zhǎng)因子 。 后活性消失 5。目前多數(shù)研究認(rèn)為循環(huán) 核細(xì)胞表面 6。 有研究認(rèn)為 血小板敏感蛋白 也稱作血小板反應(yīng)素 以抑制巨核細(xì)胞生長(zhǎng)，減弱 巨核細(xì)胞的促進(jìn)作用 7,8。張戰(zhàn)軍等研究發(fā)現(xiàn)特發(fā)性血小板減少性紫癜 （ 患兒外周血 為是因?yàn)?過(guò)多的 療后 明血小板破壞減少， 9。 松婷等報(bào)道 ，與正常對(duì)照兒童相比， 兒骨髓中 小板減少的原因可能為過(guò)量的 從上述研究可以發(fā)現(xiàn)： 小板功能增強(qiáng)，處于活化狀態(tài)時(shí)，或被破壞時(shí)，外周血中 升高。 兒病程中 血小板關(guān)系對(duì)于研究血小板變化機(jī)制有價(jià)值，值得關(guān)注。 本研究 通過(guò)檢測(cè) 清 周血血小板計(jì)數(shù)（ 及血小板相關(guān)參數(shù)，分析血清 清 進(jìn)一步了解血小板數(shù)量及活化程度的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律， 闡明 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 3 第一章 材料與方法 究對(duì)象 收集 2011 年 9 月 1 日至 2012 年 12 月 31 日 我院兒科收治并確診為 住院患兒 32例 ，均符合第 7次世界小兒川崎病研討會(huì)修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn) 12，男 21例，女 11 例，男女比例為 ，年齡 2 月 ，平均年齡為 ，中位年齡為 22月，其中 7例患兒 1歲， 12 例 2歲， 4例 3歲， 2例 4歲，4例 5歲， 2例 6歲， 1例患兒 7歲。小于 5歲患兒占 全年各個(gè)季節(jié)均有發(fā)生，春夏季多見(jiàn)。發(fā)熱見(jiàn)于所有納入患兒，頸部淋巴結(jié)腫大，唇和口腔黏膜改變，皮疹，雙側(cè)結(jié)膜非化膿性充血，指趾末端改變常見(jiàn)，肛周、陰囊皮膚潮紅、脫屑及卡介苗接種部位紅斑等見(jiàn)于部分患兒。絕大多數(shù)患兒入院時(shí)合并感染，其中呼吸道感染最多見(jiàn)，其次為消化道的感染，泌尿系統(tǒng)感染等?；純涸谠\斷為1g/g/果 療效不佳，出現(xiàn) g/ 2g/時(shí)給予阿司匹林 30d，待患兒發(fā)熱消退三天后減量至5d，兩周左右減量至 3d。絕大多數(shù)患兒體溫于 用后 2 天內(nèi)降至正常， 3 例患兒出現(xiàn) 抗，其中 2 例患兒未再使用 1例患兒 3天后體溫正常，于亞急性期出現(xiàn)左冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張， 1例患兒 4天后體溫恢復(fù)正常，病程未出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈病變。 1例患兒再次給予 g/熱隨之消退， 此患兒于急性期出現(xiàn)雙側(cè)冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張，直徑達(dá) 7持續(xù)到恢復(fù)期無(wú)明顯改善。 實(shí)驗(yàn)中，急性期指病程的 1要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，球結(jié)膜非化膿性充血，口唇粘膜改變，指趾端腫脹，頸部淋巴結(jié)腫大；亞急性期指病程 11溫下降，上述癥狀緩解，指趾端出現(xiàn)膜狀脫皮，血小板數(shù)量明顯升高。恢復(fù)期指病程 21床癥狀消退，如無(wú)明顯冠狀動(dòng)脈病變，患兒病情逐漸恢復(fù)，血小板數(shù)量降低，有冠狀動(dòng)脈瘤者病情持續(xù)發(fā)展 1。 照組患兒 30例同期收住我院 小兒外科住院治療的擇期腹股溝疝患兒 被納為對(duì)照組。 30例患兒中，男 20例 ，女 10例，男女比例為 ，年齡 3月 均年齡為 位年齡為 20月，其中 6例患兒 1歲， 12例 2歲， 3例 3歲， 3例蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 4 4歲， 3例 5歲， 2例 6歲 ,1例患兒 90月，小于 5歲患兒占 齡差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 驗(yàn)過(guò)程 要試劑、儀器和設(shè)備 上?？婆d生物科技有限公司 4冰箱保存 上海科興生物科技有限公司 4冰箱保存 自動(dòng)血細(xì)胞分析儀 E 5000 酶標(biāo)儀 蕩培養(yǎng)箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠 超低溫冰凍冰箱（ （ 00 離心機(jī)（ 普通醫(yī)用冰箱 真空采血管（無(wú)抗凝劑真空采血管， 微量加樣器： 1050200加樣槽 燒杯 濾紙 超凈水 本的采集 分別采集 急性期 、恢復(fù)期及對(duì)照組患兒靜脈血 4求無(wú)菌、無(wú)溶血， 2溫靜置 602000轉(zhuǎn) /分，離心 10離血清，置于 存于 箱待檢。余 2 凝劑真空采血管，立即送我院檢驗(yàn)中心進(jìn)行檢測(cè)。 標(biāo)檢測(cè) 小板平均體積（ 血小板容積（ 血小板分布寬度（ 大血小板比率（ 由自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)。 血清 清 用酶聯(lián)免疫吸附法（ 州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 5 測(cè)。具體操作如下： （ 1）標(biāo)本準(zhǔn)備： 實(shí)驗(yàn)前 1天將血樣從 低溫冰箱轉(zhuǎn)入 箱，試驗(yàn)前 1小時(shí)將血樣轉(zhuǎn)入 4冰箱，而后將血樣置于室溫（ 20，平衡 30分鐘。采用逐步解凍法，以避免血清解凍時(shí) 因?yàn)闇囟润E變產(chǎn)生沉淀。同時(shí)將試劑盒室溫平衡 1小時(shí)后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。 （ 2）血清 作步驟如下： 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品，分別按照下圖在 行稀釋。 240pg/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 120pg/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 60pg/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 30pg/號(hào)標(biāo)準(zhǔn) 品 150 l 的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 15pg/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 240ng/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 120ng/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 60ng/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 30ng/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 15ng/號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔占用三孔，在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50 l，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40 l，然后再加待測(cè)樣品 10 l（樣品最終稀釋度為 5 倍）。將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37溫育 30 4. 配液：將 30倍濃縮洗滌液 1090 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30此重復(fù) 5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50 l，空白孔除外。 7. 溫育：操作同 3。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 6 8. 洗滌：操作同 5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50 l，再加入顯色劑 B 50 l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色 15 分鐘。 10. 終止：每孔加終止液 50 l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零， 450）。 測(cè)定在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 （ 3）血清 算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， 為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)（ 5倍），即為樣品的實(shí)際濃度。 血清 空白孔 準(zhǔn)孔 別對(duì)應(yīng) 15pg/30pg/60pg/120pg/240pg/80pg/ 清 制標(biāo)準(zhǔn)曲線，方程為：y=圖 血清 空白孔 準(zhǔn)孔 別對(duì)應(yīng) 15ng/30ng/60ng/120ng/40ng/480ng/ 清 程為： y=圖 y = 2 3 4 5 6y = 101002003004005006000 圖 圖 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 7 作程序總結(jié) 計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 果表示為均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（ ），急性期組、亞急性期組及恢復(fù)期組 性期組、亞急性期組及恢復(fù)期組 采用方差分析 。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為 側(cè)）， P 準(zhǔn)備試劑、 樣品和標(biāo)準(zhǔn) 品 加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品， 37反應(yīng) 30板 5 次，加入酶標(biāo)試劑， 37反應(yīng) 30板 5 次，加入顯色液 A、 B， 37反應(yīng) 15入終止液 15讀 計(jì)算 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 8 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖 研究對(duì)象 兒 急性期 亞急性期 恢復(fù)期 清晨空腹收集 2脈血置于凝的真空采血管 對(duì)照組患兒 即刻檢測(cè) 小板 相關(guān)參數(shù) 清晨空腹收集 2脈血置于不含抗凝 劑 的真空采血管 收據(jù)數(shù)據(jù)并整理 2000r/心，留取上清，置于 冰箱 待檢 測(cè)血清 清 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)合臨床得出結(jié)論 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 9 第二章 結(jié)果 清 血清 急性期及恢復(fù)期與對(duì)照組患兒血清 血清 見(jiàn)圖 急性期 現(xiàn)為血清 清 小板數(shù)量增多，活化程度增強(qiáng)； 亞急性期血清 處于較高水平，血小板數(shù)量增多最明顯，血小板活化程度較急性期降低； 恢復(fù)期血清 清 小板 活化程度 與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但 圖 圖 血清 圖 血清 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 10 圖 與對(duì)照組相比 05101520253035性期 急性期 復(fù)期 對(duì)照組f l)圖 與對(duì)照組相比 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 11 表 32例 0例對(duì)照組患兒血清 組別 pg/ng/l) DW( 對(duì)照組 ：與對(duì)照組相比， P P *P 州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 12 急性期及恢復(fù)期血清 見(jiàn) 圖 表 急性期血清 著病情變化 ，兩者均逐漸降低，亞急性期兩者仍然處于較高水平； 性期與恢復(fù)期無(wú)明顯差異； 血小板參數(shù)變化提示血小板急性期活化程度最高，之后逐漸降低。 010 020 030 040 050 060 070 0性期組 急性期 復(fù)期T p g/ m l)T (n g/m l) l)圖 兒三期血清 05101520253035性期組 急性期 復(fù)期f l)圖 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 13 表 急性期及恢復(fù)期血清 清 組別 pg/ng/l) DW(1 1 1 1 1 *1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 3 ： 1指急性期與亞急性期比較， 2指亞急性期與恢復(fù)期比較， 3指急性期與恢復(fù)期比較； P P *P 州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 14 清 清 相關(guān)性分析 清 血清 相關(guān)性分析 （見(jiàn)圖 表 血清 清 例數(shù) pg/ ng/ 相關(guān)系數(shù)（ r） P 32 31 30 200400600800100012000 100 200 300 400 500 600 700 800圖 急性期 020040060080010000 100 200 300 400 500 600圖 亞急性期 性分析散點(diǎn)圖 急性期及恢復(fù)期 急性期兩參數(shù)間相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 15 清 表 表 血清 例數(shù) pg/ ） 相關(guān)系數(shù)（ r） P 32 31 30 果顯示： 急性期、亞急性期及恢復(fù)期 存在相關(guān)關(guān)系。 清 表 表 血清 例數(shù) ） ng/ 相關(guān)系數(shù)（ r） P 32 31 30 果顯示：急性期、亞急性期及恢復(fù)期 存在相關(guān)關(guān)系。蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 16 第三章 討論 一種相對(duì)常見(jiàn)且具有潛在生命威脅的小兒急性自限性全身血管炎性疾病，本研究中小于 5 歲患兒占 男女比為 ，與 兒發(fā)病高峰年齡及性別比相符合 13。通過(guò)測(cè)定接受 療的 32例 急性期及恢復(fù)期和對(duì)照 組患兒血清 清 ，結(jié)果提示：急性期 清 小板數(shù)量增多，活化明顯；亞急性期血清 清 小板數(shù)量增多最明顯，血小板活化程度降低； 患兒進(jìn)入恢復(fù)期 后 上述指標(biāo)明顯降低。血清 清 受到其它因素的調(diào)控，血清 血小板生成 的 抑制作用 不明確 。 急性時(shí)相反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)中 血清 度在 兒急性期明顯升高，隨著病情變化，血清 能是： 系統(tǒng)性炎癥發(fā)生過(guò)程中，免疫異常，導(dǎo)致凝血功能異常，血小板活化，在活化的過(guò)程中釋放部分內(nèi)容的 時(shí)，血小板的活化意味著血小板容易降解， 體減少，不能及時(shí)清除 循環(huán) 其濃度升高。炎癥反應(yīng)的過(guò)程中肝臟作為生物合成工廠，產(chǎn)生多種急性時(shí)相反應(yīng)物，如 維蛋白原等 ， 時(shí)相反應(yīng)物，由肝細(xì)胞合成并釋放進(jìn)入外 周血，加速 出現(xiàn) 14,15。原位免疫雜交顯示 要分布于肝細(xì)胞及腎臟近曲小管細(xì)胞中 16。伴有血小板減少的終末期肝病患者肝移植前 行肝移植后，血清 植第 5天達(dá)到高峰，高峰后 4示肝細(xì)胞是 功能會(huì)影響循環(huán) 17。在 環(huán) 血小板數(shù)量增多時(shí)，循環(huán) 驗(yàn)中， 似于 急性時(shí)相 反應(yīng)物，與炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度 有關(guān) 。并且，相關(guān)性分析提示 為這種現(xiàn)象是由 PO 介導(dǎo)的。 末端含有與 以上調(diào) 其表達(dá) 14。 報(bào)道 18： 在繼發(fā)狀態(tài)下 ， 峰時(shí)間與上述急性時(shí)相蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 17 反應(yīng)物一致。根據(jù)既往及本實(shí)驗(yàn)中的研究結(jié)果，認(rèn)為 兒病程中 能也是一種急性時(shí)相反應(yīng)物，反映炎癥的嚴(yán)重程度。 所有的血細(xì)胞起源于共同的造血干細(xì)胞，包括全能干細(xì)胞及其分化的骨髓系干細(xì)胞和淋巴系干細(xì)胞，具有高度自我更新能力和多向分化潛能，使得機(jī)體可以穩(wěn)定造血。干細(xì)胞的增殖和分化受到多種因素的調(diào)控，如：造血微環(huán)境、造血細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。在具有細(xì)胞系特異性的造血生長(zhǎng)因子的參與及調(diào)控下，誘導(dǎo)干細(xì)胞向各系組細(xì)胞分化。血小板的形成是一個(gè)復(fù)雜而多階段的過(guò)程，從多功能造血干細(xì)胞增殖，向骨髓系干細(xì)胞分化，在細(xì)胞因子的作用下形成巨核系祖細(xì)胞，然后分化成為原巨核細(xì)胞，經(jīng)過(guò)幼巨核細(xì)胞、顆粒型巨核細(xì)胞，再分化成成 熟巨核細(xì)胞并產(chǎn)生血小板，在巨核細(xì)胞成熟的最后階段，細(xì)胞停止增殖，經(jīng)過(guò)一系列的轉(zhuǎn)化表達(dá)出特異性的細(xì)胞表面抗原 時(shí)細(xì)胞產(chǎn)生多核 19。一個(gè)巨核細(xì)胞可產(chǎn)生 200原始巨核細(xì)胞到釋放血小板入血，需要 8小板進(jìn)入血液后，平均壽命為 7只在最初 2 天具有生理功能。 51 32P 標(biāo)記血小板觀察其破壞情況，血小板的破壞隨血小板 日齡增高而增多。衰老的血小板在脾臟、肝臟和肺組織中被吞噬細(xì)胞吞噬并破壞。此外，在生理性止血過(guò)程中，血小板聚集、活化，其本身降解并釋 放出全部活性物質(zhì)，表明血小板除衰老破壞之外，還可以在發(fā)揮其生理作用時(shí)被消耗 20。 血小板的生成受到多種因素的調(diào)控，有細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，有骨髓微環(huán)境影響，調(diào)控位點(diǎn)既可以發(fā)生在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)處，也發(fā)生于蛋白質(zhì)的修飾階段，導(dǎo)致血小板數(shù)量升高。 21,22； 作用位點(diǎn)較高，促進(jìn)祖細(xì)胞到不成熟巨核細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化， 要促進(jìn)不成熟巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成熟巨核細(xì)胞；而 、 則抑制血小板生成 21,23血小板生成過(guò)程中有正向作用因素的參與，也有負(fù)向作用因素的調(diào)控，最終數(shù)量取決于兩種作用的效果。 血小板動(dòng)態(tài)變化是 兒病情變化評(píng)估的一個(gè)重要的實(shí)驗(yàn)室檢查參考指標(biāo)，也作為長(zhǎng)期隨訪并指導(dǎo)抗凝藥物使用的主要依據(jù)之一，但具體機(jī)制目前尚不明確 25。外周血血小板增多根據(jù)原因不同可以分為：原發(fā)性血小板增多癥，繼發(fā)性血小板增多癥。前者包括：家族性血小板增多癥及特發(fā)性血小板增多癥，而兒童多見(jiàn)繼發(fā)性血小板增多癥，原因包括：感染、缺鐵性貧血、自身免疫性疾病、缺氧、外傷、腫瘤 、手術(shù)、 功能性脾切除、 藥物等 26。有研究認(rèn)為：循環(huán) 外周血濃度升高，導(dǎo)致血小板繼發(fā)性升高 27。 州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 18 或 ，其基因位于 3單拷貝基因，長(zhǎng)約 6編碼區(qū)含有6個(gè)外顯子和 5個(gè)內(nèi)含子，人 32個(gè)氨基酸構(gòu)成 28。 有 2個(gè)結(jié)構(gòu)域組成，含 153個(gè)氨基酸，與 有效刺激血小板生成。由 7、 29、 85和 151位半胱氨酸所形成的兩對(duì)二硫鍵為其生物活性必需的部分，含 2 個(gè)與受體 個(gè)位點(diǎn)同時(shí)作用于兩個(gè)受體 受體形成二聚體，從而激活一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 79個(gè)氨基酸，有 6個(gè) 8個(gè) 要功能是穩(wěn)定 控 進(jìn) 9。 楊光等將 因轉(zhuǎn)入基質(zhì)細(xì)胞后，觀 察其在臍血造血干細(xì)胞 /祖細(xì)胞體外擴(kuò)增中的作用，發(fā)現(xiàn) 以誘導(dǎo)臍血造血干細(xì)胞 /祖細(xì)胞向巨核細(xì)胞系定向增殖和分化 30。 過(guò)作用于造血干細(xì)胞，促進(jìn)造血祖細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化，增大其體積，促進(jìn)其增殖和成熟，增加外周血血小板數(shù)量。同時(shí)，增加巨核細(xì)胞及血小板表面特異性膜糖蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)血小板功能 31,32。大量實(shí)驗(yàn)表明， 過(guò)與 互作用，刺激造血干細(xì)胞向巨核細(xì)胞系分化，并特異性促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖、分化，以及巨核細(xì)胞的成熟與血小板的釋放。 20世紀(jì) 90年代人們?cè)谘芯啃∈笏栊园籽〔《景┗?隆了它的同源物 因位于 1長(zhǎng) 17 12 個(gè)外顯子和 11 個(gè)內(nèi)含子組成。 抑 胞的 因表達(dá)可以使巨核細(xì)胞集落生成率明顯減少，但粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及紅細(xì)胞則不受影響，認(rèn)為 33。 子量為 85于受體超家族成員，是 I 型跨膜蛋白，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)組成，分別含有 466、 22、 122 個(gè)氨基酸，含有 4 個(gè)糖基化位點(diǎn)。胞外區(qū)具有 2個(gè)免疫球蛋白樣 結(jié)構(gòu)域，跨膜區(qū)無(wú)典型的蛋白酶結(jié)構(gòu)，胞內(nèi)區(qū)近膜處有 信號(hào)傳導(dǎo)中非常重要，受體與配體結(jié)合后 于 游，結(jié)構(gòu)疏松，含 30 個(gè)氨基酸殘基以及 34。 胞、巨核細(xì)胞及血小板，每一個(gè)血小板表面有 30配體刺激下，通過(guò) 導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，包括 號(hào)傳導(dǎo)途徑發(fā)揮生物學(xué)功能，從而促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖、分化以及血小板形成 35。其次， 解 子，以維持機(jī)體造血平衡，防止血小板急劇變化引起的造血系統(tǒng)紊亂。本實(shí)驗(yàn)中 因可能為采集的標(biāo)本蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 19 為血清，血液自然凝固過(guò)程中，血小板活化并釋放部分 獻(xiàn)顯示 0%左右，但二者具有很好的相關(guān)性 36。人類 自肝臟基因庫(kù)，半衰期長(zhǎng)達(dá) 40h，使用后 5d 內(nèi)血小板增加不明顯，其峰值在使用后 107，與 亞急性期血小板數(shù)量達(dá)到高峰相對(duì)應(yīng)，證實(shí) 異常免疫因子作用下血小板活化，釋放其內(nèi)容物，血小板降解，導(dǎo)致外周血血小板數(shù)量急劇減少，對(duì)血清 降解能力減弱， 著血液循環(huán)進(jìn)入骨髓，促進(jìn)成熟血小板釋放進(jìn)入外周血，外周血血小板數(shù)量急劇上升，表現(xiàn)為 兒急性期血小板數(shù)量增加。本實(shí)驗(yàn)中急性期血小板數(shù)量較對(duì)照組患兒升高另一原因?yàn)椋簩?shí)驗(yàn)中 本采集時(shí)間多位于急性期末。在促進(jìn)血小板釋放的同時(shí) ， 生血小板，經(jīng)過(guò) 8成熟后釋放進(jìn)入外周血，導(dǎo)致亞急性期血小板數(shù)量明顯增加。鑒于 兒血小板數(shù)量于亞急性期達(dá)到高峰，滯后于血清 峰出現(xiàn)時(shí)間， 解主要依賴于巨噬細(xì)胞及血小板表面受體，推斷 兒血小板在病程中的動(dòng)態(tài)變化系異常免疫所致的繼發(fā)性血小板增多癥 37， 善全身血管炎癥狀，急性期后僅給予低劑量阿司匹林或雙嘧達(dá)莫等抗血小板聚集藥物即可有效預(yù)防血栓形成等病理情況，也符合 繼發(fā)性血小板增多癥的特點(diǎn) 38。史宏等通過(guò)研究發(fā)現(xiàn) 兒急性期出現(xiàn) 高，隨著病情變化，其濃度于血小板達(dá)到高峰時(shí)下降，這進(jìn)一步證實(shí)了 兒病程中 一種急性時(shí)相反應(yīng)物，血小板生成增多屬于繼發(fā)性反應(yīng)，與 促進(jìn)血小板生成的因素有關(guān) 39。值得注意的是：實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)血清 度與 程中無(wú)相關(guān)關(guān)系。原因可能為：調(diào)控血小板產(chǎn)生的因素眾多， 向作用因子的參與也會(huì)影響其線性相關(guān)關(guān)系；而 1）細(xì)胞 因子生成過(guò)程中的調(diào)節(jié)，生成量的多少與基因調(diào)控有關(guān)，血小板活化過(guò)程中分泌的 因子通過(guò)影響基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯等過(guò)程參與 另外， 升高 40。（ 2） 過(guò)與相應(yīng)受體結(jié)合、降解，調(diào)節(jié)其在循環(huán)中含量，這一過(guò)程主要與血小板和巨核細(xì)胞表面的受體數(shù)量有關(guān)，通過(guò)形成受體 3）血漿中半分子 調(diào)節(jié)。目前發(fā)現(xiàn)凝血酶在 半分子的存在強(qiáng)化了 再者， 程長(zhǎng)短不一，納入標(biāo)本少， 來(lái)源局限， 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)造成影響。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 20 在生理狀態(tài)下，血小板依層流作用沿著毛細(xì)血管內(nèi)壁排列，維持血管內(nèi)壁完整性。 兒異常免疫發(fā)生過(guò)程中，抗原抗體特異性結(jié)合，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)和特殊基因表達(dá)，啟動(dòng)細(xì)胞因子的瀑布效應(yīng)，造成血管內(nèi)皮及其它組織、細(xì)胞損傷。內(nèi)皮損傷、膠原暴露，血小板膜糖蛋白經(jīng)過(guò) 后血小板聚集、活化，釋放 5物質(zhì)， 加速血小板聚集，血小板活化程度進(jìn)一步增高，功能亢進(jìn)，被大量消耗，從而刺激骨髓產(chǎn)生和釋放更大體積的血小板 8。 表血小板的平均容積，主要反映骨髓中巨核細(xì)胞的增生 、代謝和血小板新生情況，另一方面也顯示循環(huán)中血小板的年齡，新生血小板 體積大，衰老的體積小，同時(shí)在一定程度上也與血小板的超微結(jié)構(gòu)、酶活性及功能狀態(tài)有密切關(guān)系。 集力、粘附能力增強(qiáng)，血小板的破壞也增加 43。 兒急性期血小板活化因子激活并生成增多，巨核細(xì)胞受到刺激后增生，產(chǎn)生體積較大的血小板，而體積較大的血小 板活性強(qiáng)，隨著血小板的衰老， 老血小板所占的比例升高 44。 實(shí)驗(yàn)中 兒急性期出現(xiàn)血小板壓積升高，體積變大，分布寬度增大，大血小板比率升高表現(xiàn)，預(yù)示著血小板的活化。隨著免疫功能的恢復(fù)，炎癥消退，新生血小板減少，衰老血小板降解，血小板大小逐漸均一化， 低， 小， 低， 在病情緩解的過(guò)程中，血小板活化程度逐漸降低，與相關(guān)研究一致 45，他們通過(guò)檢測(cè)血小板表面活化標(biāo)志物，如 ，發(fā)現(xiàn) 這些血小板活化指標(biāo)于急性期升高，在病情的變化過(guò)程中逐漸減少。血小板活化程度變化與 兒病程中炎癥反應(yīng)的發(fā)展變化及臨床表現(xiàn)的動(dòng)態(tài)變化一致，可以指導(dǎo)臨床評(píng)估炎癥的程度，指導(dǎo)治療， 其檢測(cè)方便、經(jīng)濟(jì)、 快捷，便于廣泛采用 ，具有臨床應(yīng)用價(jià)值 。 首次從凝血酶刺激后的血小板細(xì)胞膜中分離，分子量為 4508，由 3條相同肽鏈通過(guò)二硫鍵組成同源三聚體，分布于血小板顆粒及多種組織的細(xì)胞外基質(zhì)中，通過(guò)與受體結(jié)合，橋接細(xì)胞與生長(zhǎng)因子，細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與胞外基質(zhì)從而發(fā)揮作用。急性期 兒炎 癥反應(yīng)明顯，血小板活化程度最高，釋放其內(nèi)容物明顯增多， 為血小板顆粒內(nèi)容物隨之增多，其血清濃度明顯升高。 療后，異常炎癥反應(yīng)改善，血小板總體活化程度較急性期降低但仍高，釋放 入恢復(fù)期，繼發(fā)性增多的血小板衰老，活性降低，并被降解，釋放 一步減少，直到恢復(fù)正常， 兒病程中血清 以作為評(píng)估血小板活化程度的一個(gè)指標(biāo)，但有待與經(jīng)典血小板活化指標(biāo)，如 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 川崎病患兒血清 態(tài)變化的研究及意義 21 有 7 個(gè)結(jié)構(gòu)域， 膠原同源區(qū)、 序列、 49。 7,8。 括兩個(gè)方面：一是通過(guò)它在巨核細(xì)胞表達(dá)的受體起直接抑制作用；二是通過(guò)調(diào)節(jié)巨核祖細(xì)胞結(jié)合，發(fā)揮間接抑制作用 11。 兒由于血小板大量破壞，內(nèi)容物釋放增多，循環(huán) 性增強(qiáng) 及 急性期 表明 兒類似的血小板內(nèi)容物釋放增多表現(xiàn)。 研究發(fā)現(xiàn) 以以劑量依賴性的方式在體外抑制鼠和人巨核細(xì)胞集落形成單位，拮抗 疫組化證實(shí)這種作用與 關(guān) 8。 初叫做糖蛋白 子量為 88一種完整的血漿膜蛋白，分布廣泛，在紅系及粒系分化過(guò)程中表達(dá)減少，但在巨核細(xì)胞分化成熟的過(guò)程中出現(xiàn)高表達(dá)，表明 造血細(xì)胞分化的過(guò)程中發(fā)揮不同的作用， 結(jié)合對(duì)巨核細(xì)胞性白血病具有治療作用 50 ，對(duì)巨 核細(xì)胞及血小板的生產(chǎn)具有抑制作用。本實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析顯示血清能原因包括 ：外周血血小板數(shù)量受到正向及負(fù)向調(diào)控因子的雙重調(diào)控， 小板活化過(guò)程中釋放的其他物質(zhì)，如 核細(xì)胞生成抑制作用強(qiáng)度如何，本研究尚不能判斷，有待與 程中血小板新生及活化降解過(guò)程均明顯，在數(shù)量出現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程中，血小板功能也呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，釋放的內(nèi)容物具有多 種生物學(xué)功能，使得血小板數(shù)量變化更加復(fù)雜，不能用單一原因解釋；血清 血小板活化程度有關(guān)，血小板活化