【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）兩個水稻粒重基因的遺傳分析及定位生物化學(xué)與分子生物學(xué)碩士論文

密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 兩個水稻粒重基因的遺傳分析及定位 I 摘 要 利用一份優(yōu)異的水稻大粒品種寶大粒（谷粒較大且重，遺傳穩(wěn)定）與中花 11雜交，構(gòu)建了寶大粒 /中花 11 的遺傳定位群體，由于粒重是一個復(fù)雜的數(shù)量性狀，在 群體中采用了極端取樣的方法進行基因的初步定位分析，經(jīng)初步定位，在水稻第 3 和 6 染色體上定位到 2 個粒重基因，分別將其命名為 于染色體區(qū)域與已有的關(guān)于粒重精細定位和克隆的報道結(jié)果一致 ， 所以我們的研究重點是 在初步定位的基礎(chǔ)上，進一步構(gòu)建精細定位群體，包括 體及 近等基因系群體 ， 體主要用于驗證谷粒長圓性與兩個粒重基因的相關(guān)性，同時對 行進一步的精細定位， 近等基因系的構(gòu)建主要是利用中花 11 作為輪回親本，采用回交和分子標記輔助選擇的方法來構(gòu)建。同時選取了另一份水稻大粒品種服務(wù)浙江 1 號，通過田間雜交和后代群體的連鎖驗證來進行等位性檢測，獲得的主要結(jié)果 如下： 1. 粒表型正常，沒有出現(xiàn)大粒性狀，表明控制粒重的基因是隱性的， 離群體中性狀出現(xiàn)連續(xù)變異現(xiàn)象，表現(xiàn)出數(shù)量性狀的特點。 2. 在 群體中利用極端取樣的方法對粒重基因進行初步定位， 通過實驗發(fā)現(xiàn)在兩個位點處分別出現(xiàn)連鎖現(xiàn)象，一個位于第三染色體的 記 間，兩標記相距 7.3 一個位于第六染色體的 記 間，兩標記相距 別命名為 3. 利用 體對 長圓 性 與兩個粒重基因（ 相關(guān)性進行驗證，主要是利用 與 兩 個 基 因 分 別 連 鎖 的 分 子 標 記 （ 第 三 染 色 體 的 記 第六染色體的 記 進行連鎖分析 ，分析結(jié)果表明水稻第三染色體的粒重基因 制長粒 （粒長） 性狀，第六染色體上的粒重基因 制圓粒 （粒寬） 性狀。 4. 利用 體對 行進一步的定位，將 定在分子標記 間的 4.7 范圍內(nèi)。 5. 為了進一步精細定位 建了 近等 基因系，目前構(gòu)建到 。 6. 利用服務(wù)浙江 1 號進行等位性檢測，與寶大粒的雜交 時利用已經(jīng)定位的連鎖分子標記對服務(wù)浙江 1 號與中花 11 的 體進行檢測，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些分子標記在此群體中也表現(xiàn)出連鎖，進一步證明了服務(wù)浙江 1 號具有和寶大粒等位的粒重基因。 關(guān)鍵詞 ： 水稻 ， 粒重 ， 基因定位 ， 分子標記輔助選擇（ n in it is a 8.8 g/1 to 2 3 We we of we we 2、 F3 In to or or s 3 by of In to of to of 55 669 F3 of by At to 1 is by in 2 it is by 2 to gw at a 7.5 cM SR s 55.8 63.3 on , on a 28.8 cM SR 54.1 82.9 on . to or 669 F3 of of at a 4.7 cM re 73.2 on . to 2 is as So we 1, 2 2 d w 錄 英文縮略表 . 1 第一章 文獻綜述 . 2 言 . 2 稻大粒種質(zhì)資源及其遺傳與分子生物學(xué)研究進展 . 2 粒種質(zhì)資 源 . 2 重的經(jīng)典遺傳學(xué)分析 . 3 定位的粒重的 精細定位的粒重基因及相關(guān)基因 . 5 重基因的分子育種 . 11 稻基因的圖位克隆 . 12 位克隆的技術(shù)環(huán)節(jié) . 13 位克隆技術(shù)在水稻中 的應(yīng)用 . 15 量性狀的圖位克隆 . 15 研究的意義和基礎(chǔ) . 16 第二章 水稻粒重突變體的鑒定，遺傳分析及基因 的精細定位 . 18 驗材料和方法 . 18 物材料 . 18 間雜交及群體的構(gòu)建 . 18 用分子生物學(xué)試劑 . 18 驗方法 . 19 果與分析 . 23 稻粒重突變體的遺傳分析 . 23 因的初步定位 . 24 因的精細定位 . 26 份突變體的等位性檢測 . 27 第三章 全文結(jié)論與討論 . 28 論 . 28 重基因的定位 . 28 粒長圓性與兩個粒重基因的關(guān)系 . 28 位性檢測 . 28 論 . 29 位克隆策略的應(yīng)用 . 29 因定位干擾因素的排除 . 29 已定位的其它粒重基因或 比較 . 30 位性檢測 . 31 望 . 31 V 參考文獻 . 34 致 謝 . 39 作者簡歷 . 40 - 1 - 英文縮略表 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 量性狀位點 倍單倍體 組自交系 等基因系 增片段長度多態(tài)性 制性片段長度多態(tài)性 機擴增多態(tài)性 單序列重復(fù)標記 列標簽位點 切擴增序列多態(tài)性 達序列標簽 菌人工染色體 母人工 染色體 1質(zhì)粒人工染色體 合酶鏈式反應(yīng) 子標記輔助選擇 bp 基對 摩 溴化十六烷三甲基銨 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 - 2 - 第一章 文獻綜述 言 谷粒重量是產(chǎn)量構(gòu)成三要素之一，一般以千粒 重表示。在育種利用時，由于粒重與粒長、寬與厚之間呈正相關(guān)，粒重性狀有時以粒長、寬與厚的綜合指標衡量。同時，粒重或谷粒大小也是一個極為重要的品質(zhì)性狀，一般細長的秈米受多數(shù)人喜歡。此外，粒重在禾谷類作物進化上也具有重要的意義，由于小粒種子生活力較低、機械收獲難度大，人們在水稻馴化過程中趨向于選擇大粒的品種進行栽培，逐步形成了籽粒偏大的栽培種。而粒重和粒長都是高度遺傳的，有利于遺傳分析（ 998）。所以，理解粒重遺傳和分子基礎(chǔ)有利于水稻育種改良。 目前水稻基因定位的方法有很多，其中圖位克隆策略 最為 常見 ，利用圖位克隆策略已經(jīng)定位并克隆到了許多水稻基因，如 。除了這些質(zhì)量性狀基因，數(shù)量性狀基因的圖位克隆也取得了一定的進展 ，如 。 本章將對水稻大粒種質(zhì)資源及其遺傳與分子生物學(xué)研究進展，水稻基因的圖位克隆和數(shù)量性狀基因的圖位克隆幾個方面分別進行闡述。 稻大粒種質(zhì)資源及其遺傳與分子生物學(xué)研究進展 粒種質(zhì)資源 大粒資源在世界各國分布廣泛，國際水稻所遺傳資源中千粒重高的資源主要集中在 48 個國家和地區(qū)，以老撾、菲律賓、泰國、印尼和印度為主， 在 905 份大粒材料中，秈型 396 份，占 粳稻 82 份，占 爪哇型 387 份，占 雜交后代 40 份，占 秈型和爪哇型主要來自亞洲國家。粳型以巴西、意大利居多。千粒重超過 45 克的僅 18 個品種，老撾 8 個，印度 5 個，泰國 5 個。超過 40 克 的材料，泰國和老撾最多， 雜交后代的大粒資源也主要集中在老撾和泰國， 53 份大粒雜交后代中，老撾的就有 37 份，這些大粒資源均可供育種學(xué)家 利 用。我國也具有非常豐富的水稻種質(zhì)資源，在七五工作的基礎(chǔ)上篩選出的 2000 多份優(yōu)異種質(zhì)中，千粒重 20 克以上的大粒種質(zhì)有 108 份。八五在杭州進一步進行篩選并評價，評出綜合性狀較優(yōu)的大粒種質(zhì) 7 份，可為育種和生產(chǎn)利用（ 郭龍彪等， 1995） 。 按千粒重分類，在 108 份中，在 30的品種有 66 份， 35的 33 份，40 克以上的 9 份。千粒重從大到小排在前八為的有日本的 浙江的寶大粒（ 湖北的特大粘（ 日本的 湖北的二粒寸（ 浙江的三粒寸（ 江蘇的 90浙江的竹云糯（ 湖北的特大粒（ 按品種類型分，其中陸稻 12 份，占 秈稻 24 份，粳稻 84 份。若按丁穎的系統(tǒng)分類法，大粒種質(zhì)可分 16 個類型。按性狀分類，其中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 - 3 - 中矮稈 38 份，大穗 42 份，抗病蟲害 8 份，抗逆性 20 份，優(yōu)質(zhì) 1 份，香米 4 份，紫米 1 份，綜合性狀優(yōu)良的 7 份（表 這些豐富的大粒遺傳資源為作物育種和遺傳研究提供廣闊的遺傳基礎(chǔ)。從豐富的水稻資源中 ,篩選出更多的特異水稻種質(zhì)仍是今后水稻種質(zhì)研究的重要內(nèi)容。隨著粳稻基因測序工作的完成 ,發(fā)掘和分析基因的結(jié)構(gòu)和功能的能力日益強大 ,對水稻種質(zhì) 進行分子遺傳研究 ,克隆、分離水稻重要基因 ,將使水稻育種進入一個更新領(lǐng)域。 表 粒 重排 名 前九 位的 水 稻 品種 9 w g 品 種 名 稱 產(chǎn)地 千 粒 重 （ g） 日本 大 粒 浙江 大 粘 湖北 日本 粒 寸 湖北 粒 寸 浙江 0蘇 云 糯 浙江 大 粒 湖北 合 性狀 較 優(yōu)的 大粒 種 質(zhì) 資源 Ex m of e 品 種 名 稱 統(tǒng) 一 編 號 來源 主 要 性 狀 特 點 北路 129 本 中 粳 、 大 粒 白 腰 線 04西 早 秈 、 早 熟 903蘇 中 粳 、 抗 倒 老 酒 稻 24西 粳 中 水 糯 、大 穗 、高 產(chǎn) 老 芒 稻 陜西 大穗 硬 水 稻 24 陜西 粳 中 水 糯 九 月 黃 24西 粳 中 水 糯 、 高 產(chǎn) 注： 統(tǒng)一編號為國家統(tǒng)一編號。 重的經(jīng)典遺傳學(xué)分析 有關(guān)粒重的經(jīng)典遺傳學(xué)分析起步較早，相關(guān)研究較多，研究的也較為深入。1 粒重為多基因控制的數(shù)量性狀 粒重是與作物產(chǎn)量有關(guān)的重要性狀。大多數(shù)的研究結(jié)果表明與產(chǎn)量有關(guān)的大部分性狀均 為數(shù)量 性狀。熊振民 等 1972年開始在育種 工作的 同時觀察廣陸 矮 4中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 - 4 - 號、青馬早、原豐早等 14個親本、 18個組合后代粒重的遺傳動態(tài)。實驗結(jié)果和前人研究相似。證明粒重是一個多基因控制的數(shù)量性狀，在雜交第二代里出現(xiàn)了連續(xù)性的變異。 1964）的研究結(jié)果表明大約有 10對基因控制粒重性 狀。 祁祖白等 （ 1983） ,芮重慶等 （ 1983） , 1983） ,1989） ,石春海等 (1995)的研究結(jié)果也均表明粒重是受多基因控制的數(shù)量性狀， 而劉曉輝（ 1989） 用 4個千粒重的 4個親本，配成 4 4全互交組合，認為千粒重是較復(fù)雜的數(shù)量性狀，并且在親本中控制該性狀的等位基因分布是不均衡的，千粒重是由主效基因和一些分布不均衡的微效多基因同作用。 2 粒重的遺傳力高 熊振民等（ 1976）對 9個秈稻組合的進行研究，根據(jù)雜種第二代的表現(xiàn)，對控制水稻各經(jīng)濟性狀進行了廣義遺傳力分析，研究結(jié)果 表明，各經(jīng)濟性狀的遺傳力，生育期 粒重 株高 穗長 粒數(shù)。粒重的平均遺傳力可達 各組合間也較一致。在此之前沈錦驊 （ 1963） 估算的廣義遺傳率為 不同外觀品質(zhì)性狀的遺傳力差異較大，其次序為千粒重 長寬比 粒長 粒寬 堊白率 堊白面積。 粒重也具有較高的狹義遺傳率。熊振民等 19731中同一單株的后代 分別選取大粒和小粒，而后連續(xù)觀察到 果在兩個組合的 28對單株的比較中，證明粒重這個性狀，遺傳力是很強的，選擇效果亦顯著，在 3間的相關(guān)系數(shù)可達 +，極顯著相關(guān) 。芮重慶等 （ 1983） 估算的狹義遺傳率也高達 符 福 鴻 等 （ 1994） 的 研 究 結(jié) 果 認 為 遺 傳 力 可 達 李仕貴等（ 1995）的研究結(jié)果認為千粒重的狹義遺傳力為 據(jù)莊巧生等（ 1962）研究，遺傳力高而遺傳變異又大的性狀在一定選擇率下遺傳進度較大，早期世代選擇也有效。因此對粒重早代選擇效果較好 。 3 粒重的加性顯性效應(yīng) 在 遺 傳 環(huán) 境 中 , 一 般 認 為 粒 重 是 受 多 基 因 的 加 性 效 應(yīng) 所 控 制 。 但 . 1986） 則認為以顯性效應(yīng)為主 ;而 1983） 等認為加性和顯性 均很重要。周清元等 （ 2000） 的研究結(jié)果表明粒重除受制于基因的加性效應(yīng)外 ,更多受制于非加性效應(yīng) 1995） ,芮重慶 （ 1983） ,符福鴻 （ 1994） 的研究結(jié)果有一定差異 ,但石春海 （ 1995） 研究結(jié)果中可以看到 ,在不同的雜交組合后代中 ,不同組合受制于加性和非加性效應(yīng)不同 ,所以可以認為差異主要是由組合不同所引起的 顯性效應(yīng)值為負值，在顯性度上為超顯性 ,粒重的加性效應(yīng)在遺傳效應(yīng)中占的比重不如顯性效應(yīng)大 。 4 粒重的超親遺傳 1974） ,熊振民 （ 1976） 認為無論“大粒大?！?、“大粒小粒”或“小粒小?！?,都可能獲得大粒型品種 ,特別是不同類型之間雜交后代 ,很容易出現(xiàn)超親遺傳 ,但周傲南等 （ 1964） 的研究結(jié)果卻未發(fā)生超親現(xiàn)象。桂樹勛等 （ 1984）的研究結(jié)果亦證實粒重超親是存在的。符福鴻等 （ 1994） 利用 30 個雜交組合對粒長 、 寬 、 長 /寬 和千粒重進行研究，結(jié)果除在粒寬性狀上沒有一個組合表現(xiàn)出顯著的超親優(yōu)勢效應(yīng)外，在其他 3 個性狀上均有超親優(yōu)勢效應(yīng)的組合出現(xiàn)，其中千中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 - 5 - 粒重表現(xiàn)為超親優(yōu)勢的組合最多，有 11 個。石春海等 （ 1995） 利用 3 個雜交組合研究粒型的遺傳時發(fā) 現(xiàn)各組合 出現(xiàn)超親現(xiàn)象，約超過高親值的 李仕貴等 （ 1995） 利用 6 個不育系和恢復(fù)系按不完全雙列雜交組配的材料，通過研究發(fā)現(xiàn)千粒重的 高親為負值，超中親和低親均為正值，表明他們的 優(yōu)勢居于雙親之間而偏向高值親本。在超高產(chǎn)組合中，桂樹勛等 （ 1983） 認為千粒重超親原因之一是谷粒長、寬、厚性狀的基因累加的結(jié)果。 5 粒重的母性遺傳 水稻谷粒重是對屬于母體組織的穎殼進行度量，其遺傳表達完全取決于母體植株的基因型， 有的研究認為粒重性狀上存在著母本影響或一 定程度的非等位基因的相互作用。 從遺傳學(xué)上講，生長在母體植株上的水稻籽粒是由雌雄配子受精發(fā)育而來的新世代個體，母體植株對籽粒不僅貢獻了部分遺傳物質(zhì)，還提供了大部或全部營養(yǎng)物質(zhì)。由于籽粒的營養(yǎng)物質(zhì)由母株所提供，有些籽粒性狀的表現(xiàn)可能會同時受到籽粒核基因和母株核基因兩套遺傳系統(tǒng)的控制。另外細胞質(zhì)基因也可能通過控制葉綠體 （ 或線粒體 ） 的合成而影響植株的光合 （ 呼吸 ） 作用，從而間接控制籽粒性狀的表現(xiàn)。正是由于這一原因使得籽粒這一復(fù)合體的遺傳顯得較為復(fù)雜。多數(shù)研究者認為水稻籽粒性狀主要受母株基因型控制 ；而 符福鴻等 （ 1994）研究粒重 性 狀同時受父母本的影響，而且其影響均達顯著水平。 6 粒重與谷粒形態(tài)特征的關(guān)系 在粒形性狀的相互關(guān)系上， 1979）證明 粒重與粒長粒寬間關(guān)系密切；石春海等 （ 1995）證明 粒長與粒重間呈顯著或極顯著正相關(guān)， 1983）進行雙列雜交分析后發(fā)現(xiàn)粒長與粒重為正相關(guān) ,粒厚與粒重表現(xiàn)為正相關(guān)。芮重慶（ 1983） 等認為粒長、粒寬和粒厚 3 個粒形性狀對粒重的總影響力占 粒長對粒重的影響大于粒寬和粒厚 ， 粒厚與粒重的相關(guān)最為密切。而符福鴻等 （ 1994）認為粒寬與千粒重成極顯著正相關(guān)，千粒 重與長 /寬之間均成極顯著負相關(guān)；但王余龍等 （ 1995） 則認為粒重與谷粒厚度關(guān)系密切，與谷粒的長度、寬度關(guān)系不密切。李仕貴等 （ 1995） 的相關(guān)分析表明，長寬比與粒長和千粒重，粒長與千粒重均呈極顯著正相關(guān)。 定位的粒重的 精細定位的粒重基因及相關(guān)基因 1 已定位的粒重基因 隨著分子標記技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，粒重的 位已有許多相關(guān)報道。 至少有 12 個水稻的遺傳群體用于 位和定位的粒重 89 個，分布于水稻的所有 12 條染色體上。徐建龍等 （ 2002） 應(yīng)用 292 個 青的重組自 交系（ 檢測到影響千粒重的 11 個 別位于第 1、 2、 3、 4、 5、 10 和 12染色體上，聯(lián)合貢獻率為 林荔輝和吳為人 （ 2003） 利用以兩個秈稻品種 親本雜交建立的重組自交系群體檢測到 16 個與粒重有關(guān)的中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 - 6 - 解釋 表型變異，分布在 8 條不同的染色體上，其中有 5 個分布在第 3 染色體上。另外有許多研究利用不同的群體在第 3 染色體上檢測到粒重 : 9024/22 群體 （ et 1995， 1996）； 7/ 3 群體 （ Yu et 1997； et 2001, 2002； et 2005）； /7 群體（ Lu et 1996）； 體 （ Li et Xu et 2002） ；體 （ et 1998） ; 體 （ a 998） ； 體 （ 001）； O. 體 （ et 2001） ; 群體 （ et 2002） ; . 體 （ et 2003）； et ， 2003）； 體 （ 004） 等。其中美國康乃爾大學(xué)選用熱帶粳稻 品種為輪回親本，與普通野生稻材料配制組合，構(gòu)建了 353 個株系組成的 2 群體，在千粒重性狀上檢測到 8 個 中位于水稻第 3染色體的近中心粒區(qū)間的 現(xiàn)最穩(wěn)定，貢獻率也較高，再此基礎(chǔ)上 選用該區(qū)間開展了千粒重 精細定位研究，利用表型極端法和多代回交構(gòu)建的近等基因系，最終將 位于 區(qū)間。 et 1996）、 Li et 1997）、郭龍彪等（ 2003， 2005）和 2003）等利用不同的遺傳群體也將一個粒重 位在第 6 染色體上。 本課題組利用一優(yōu)異的大粒種質(zhì)寶大粒（子粒較大且重，遺傳穩(wěn)定）與中花11 雜交，構(gòu)建了寶大粒 /中花 11 的遺傳群體，根據(jù)已公布的水稻 記利用 行了連鎖分析，并初步定位到 2 個粒重基因，分別位于第 6 染色體的 記 間和 3 染色體 記 間（ 由于 染色體區(qū)域與前面報道的結(jié)果一致；所以，我們的研究重點是 通過大粒和該區(qū)域的分子標記選擇建立 了 傳群體。表 出了部分與粒重相關(guān)的 表 粒重 相關(guān) of g w 定 位 群 體 檢 測 到 的 粒 重目 染 色 體 參 考 文 獻 o f 3 8 1（ 2）， 3， 5（ 2），6， 7， 9 et ， 2005 DH o f 2 1， 4 et 1995 F 1 o f (9024/22) F 7 / /9024 5 3， 4， 5， 7， 8 et 1995 F 8 o f 3 3， 4， 5 et 1996 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 - 7 - 9024/22 F 2 o f ， 4， 5 et 1996 ， 10 et 1996 F 2 ： 4 o f g 9 1， 2（ 2）， 3（ 3），5， 6， 10 Li et 1997 DH o f g 8 /7 a*b *c*1， 2， 5， 6， 8 1， 2， 3， 6 1， 2， 8 Lu et 1997 F 13 o f g 11 1， 2， 3， 4， 5， 10， 12 Xu et ， 2002 o f 6 1， 3（ 5）， 4,5 7(2),8(2),9,10(3) et ， 2003 IL 1 1 （ 2 ）， 3 （ 3 ）， 5（ 2 ）， 6 ， 7 ， 9 ，11 et ， 2003 注： * 該 群 體 各 株 系 同 時 種 植 于 三 個 環(huán) 境 ,以 、 、 代 表 。 2 精細定位的粒重基因及粒重相關(guān)基因 1） 精細定位的粒重基因 國康乃爾大學(xué)選用熱帶粳稻品種 輪回親本 ,與普通野生稻材料組合 ,構(gòu)建了有 353 個株系組成的 2 群體 ,采用多點實驗鑒定稻谷產(chǎn)量、產(chǎn)量構(gòu)成因子、生育期和一系列形態(tài)性狀 ,應(yīng)用一個有 153 個 記組成的連鎖圖檢測控制這些性狀的 千粒重性狀上檢測到 8 個中位于水稻第三號染色體的近中心粒區(qū)間的 現(xiàn)最穩(wěn)定，貢獻率也較高。而且，在其他一系列的水稻亞中內(nèi)、亞種間和種間組合中， 屬區(qū)間都表現(xiàn)出對粒重或粒長遺傳控制的重要性。 Li et 2004）選用該區(qū)間開展千粒重 精細定位研究。首先 ,從 到一個株系，該株系的粒重顯著低于其他株系，在 間攜帶一個長度為 生稻片段，而遺傳背景趨于栽培稻親本 用該株系與 別 回 交 一 和 兩 次 ,進 一 步 剔 除 非 目 標 區(qū) 間 的 野 生 稻 背 景 ， 構(gòu) 建 了 體，再從中選出一個 兩個 系 ,經(jīng)自交和回交后建立 體。在 群體中利用兩個互補的策略鑒定可以提供信息的重組體，利用正向遺傳學(xué)方法，表型分布的極限值被基因定位在目標區(qū)域的標記位點。同時比較 兩組的單模標本來鑒定可以提供信息的重組斷裂位點。表型極端值的利用可以避免在早代分析時環(huán)境變異和遺傳背景的影中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 - 8 - 響。通過反向遺傳學(xué)的方法，利用在目標區(qū)域的標記來定位群體，把群體分為 3個基因型組，然后在 等基因系的 比較這些基因型組的表型平均值來決定典型的重組斷裂位點。從 1920 個 株中選出 173 個重組型號個體，測定千粒重，所檢測到的千粒重 高 與原群體定位結(jié)果一致，但 從原來的 至 獻率由 至 進一步應(yīng)用衍 生的 532 個 株測定千粒重和粒長 ,所檢測到的千粒重 粒長高 處與位置一致，但對群體千粒重表型變異的貢獻率升到 為 ，對粒長表型變異的貢獻率高達 為 。進一步選用具有極端表型的樣本分組 ,結(jié)合交叉重組染色體片段分析法，并增加目標區(qū)間的標記，最終將 位于 區(qū)間中。具體的技術(shù)路線如圖 引自 2004） 圖 展 和 精 細定位 的 的