生物選修一植物組織培養(yǎng)花藥離體培養(yǎng)

1、課題1 菊花的組織培養(yǎng)一.基本概念 1.細(xì)胞分化：細(xì)胞在形態(tài),結(jié)構(gòu),功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程（基因選擇性表達(dá)的結(jié)果）. 2.細(xì)胞的全能性：已經(jīng)分化的細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整植株的潛能. 3.外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段. 4.脫分化：又叫去分化,由高度分化的組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程. 5.愈傷組織的細(xì)胞特點(diǎn)：細(xì)胞排列疏松無規(guī)則,是一種高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞. 6.再分化：愈傷組織重新分化成根或芽的過程.總結(jié)：植物組織培養(yǎng)過程： 脫分化 再分化外植體-愈傷組織-根.芽等-試管苗-移栽-完整的植物體二影響因素 1.植物材料的選擇：菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新

2、萌生的側(cè)枝. 2.培養(yǎng)基的選擇：MS培養(yǎng)基（含大量元素,微量元素,有機(jī)物和植物激素） 注：微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主,MS培養(yǎng)基則需要提供大量無機(jī)營養(yǎng). 3.植物激素的濃度,實(shí)用的先后順序,用量比例,都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果.使用的先后順序先使用生長素,后細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂但不分化先試用細(xì)胞分裂素,后使用生長素分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高用量比例生長素細(xì)胞分裂素有利于根的分化,抑制芽的形成生長素細(xì)胞分裂素有利于芽的分化,抑制根的形成生長素細(xì)胞分裂素促進(jìn)愈傷組織的形成 4.其他影響因素：pH,溫度和光照.3. 實(shí)驗(yàn)步驟（重點(diǎn)是無菌技術(shù)）（1）制備Ms固體培養(yǎng)基 （2）滅菌（將培養(yǎng)基與其它器械進(jìn)行高壓蒸

3、汽滅菌） （3） 外植體消毒（嫩枝流水沖洗無菌吸水紙吸干70%酒精中搖晃23次無菌 水沖洗無菌吸水紙吸干0.1%的氯化汞溶液12min無菌水洗 三次）（4）接種（a.70%的酒精擦工作臺(tái);b.操作在酒精燈附近進(jìn)行;c.火焰灼燒滅菌） （5） 培養(yǎng)（溫度：1822;pH：5.8左右;光照：每日用日光燈照射12h） （6） 移栽栽培 注：容易進(jìn)行無性繁殖的植物也容易進(jìn)行組織培養(yǎng).課題2 月季的花藥培養(yǎng)1. 花粉發(fā)育過程 減數(shù)分裂 有絲分裂花粉母細(xì)胞-四個(gè)小孢子-1個(gè)小孢子-1個(gè)小孢子-（小孢子母細(xì)胞） （小孢子四分體時(shí)期） （單核居中期） （單核靠邊期） 花粉管細(xì)胞核營養(yǎng)細(xì)胞一個(gè)小孢子（雙核期）

4、有絲分裂 生殖細(xì)胞核生殖細(xì)胞-兩個(gè)精子2. 影響因素 1.主要因素：材料的選擇和培養(yǎng)基的組成 2.其他因素：親本植株的生長條件,材料的低溫預(yù)處理,接種密度 3.材料的選擇：初花期完全未開花的花蕾（花期）;單核期（時(shí)期） 單核期以前質(zhì)地幼嫩極易破碎.單核期以后花瓣松動(dòng)不利于消毒.3 操作流程：材料的選?。ㄧR檢：醋酸洋紅法：將花粉細(xì)胞核染成紅色；焙花青-鉻釩法：適用 于不易染色的,染成藍(lán)黑色） 70%的酒精 無菌水 無菌吸水紙 0.1%的氯化汞溶液 無菌水材料的消毒（花蕾-取出-花蕾-花蕾-取出-完成） 接 種（除去萼片和花瓣；防止損傷花藥,否則會(huì)從受傷部位長出愈傷組織；除 去花絲,因?yàn)榕c花絲相連不利于愈傷組織或胚狀體的形成） 培 養(yǎng)（每瓶接種花藥710個(gè)，溫度25左右；剛開始不需要光照，幼小植株形 成才需要光照.） 花 藥 開 裂(2030天后；若長出愈傷組織應(yīng)該及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上；若釋放出胚狀體 應(yīng)該盡快將幼小植株分開分別移植到新的培養(yǎng)基)4 通過花粉培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（單倍體植株）的兩種途徑： 脫分化 分化1. 花藥中的