HCV藥物研發(fā)進展綜述丙型肝炎與抗丙肝藥物

1、HCV藥物研發(fā)進展綜述丙型肝炎與抗丙肝藥物HCV藥物研發(fā)進展綜述（一）:丙型肝炎與抗丙肝藥物藥渡經緯2016-01-28導讀：丙 肝病毒感染全球流行，是肝硬化和肝癌的主要原因。然而過去人 類并沒有特異的丙肝治療藥物，自2011年FDA批準2個NS3/4A抑制劑上市后， 在2013和2014年全球爆發(fā)式的批準上市了療效驚人的抗丙肝藥物和抗丙肝藥 物組合。2013年和2014年，全球包括5個單藥、3個復方藥在內共批準上 市8 個新分子實體用于治療丙肝。其中包括了療效驚人并在市場銷售上的表現堪稱史 詩級的新藥索非布韋（Sofosbuvir）。文內所涉藥物統計自藥渡網，截止時間2015 年12月31日

2、。同時還本文將分6期向大家介紹一下丙肝和抗丙肝藥物的現狀與研發(fā)進展，對比解析了一下國際上現行的主要抗丙肝治療組合， 最后和大家聊聊中國丙肝的 現狀和治療選擇。第一期：丙型肝炎與抗丙肝藥物第二期：NS3/4A蛋白酶抑制劑研究進展第三期：NS5A抑制劑研究進展第四期：NS5B抑制劑研究進展第五期：國際上主要抗丙肝治療組合解析第六期：中國丙肝現狀和抗病治療選擇1.病毒性肝炎肝炎是我們日常生活中經常聽到的名稱和疾病，而平時咱們所說的肝炎一般都是 病毒性肝炎。病毒性肝炎是病毒感染引起的，肝細胞損傷及之后免疫系統對肝細 胞進行攻擊導致的急慢性肝炎（圖1）。研究表明，病毒性肝炎對肝的損害主要 源自與免疫系統

3、對機體的攻擊。Liver f Y.橫；iHepatitis Virus 穴二二圖1病毒性肝炎是病毒感染引起的病毒性肝炎主要分甲到戊5種肝炎,他們的特點如表1。表1 5種病毒性肝炎總覽SS 自 R*甲 STHAVSiffHBV丙肝HW.T8THDV戊肝HEVORNAWORAffiSfiNAORNA糞便血液/體液1W幟血液/體液糞運毎口血液刪俸血籾母襲/親 瞇觸熱口是S否是否5S1A JA*5否疫苗免痕疫苗免疫行為控制SS行為控制*:自限性疾病：疾病可以自行痊愈.僅需對癥治療即可.2.丙型肝炎保證坎水安登丙型肝炎是由丙肝病毒感染引起的。而丙肝病毒感染流呈全球流行狀態(tài)，是導致 肝硬化和肝癌的最主要病

4、因（圖 2）。75-85%20-30%Chronic HepatitisHCV Infection2-7% peyear圖2丙肝病毒感染進展3）。世界衛(wèi)生組織（WHO）最近數據顯示，丙肝病毒全球流行率約為 3%,感染人數 近2億，其流行率在不同的國家和地區(qū)表現出很大的不同（圖Prvlence bow 1 5% 15% Htam 3 5%/VA圖3 HCV疫情分布（數據來自）據衛(wèi)計委公布的數據顯示，最近10年來我國丙肝病毒感染報告病例數呈逐年上 升趨勢，從2006年的70681例，急速增長到2012年的201622例，雖在之后稍 微穩(wěn)定在20萬出頭，但總趨勢仍不樂觀（圖4）。2500002000

5、0015000010000050000|圖4中國丙肝感染情況 （數據來自衛(wèi)生部官網）血液和體液傳播是HCV感染的主要途徑，靜脈吸毒與性傳播是感染 HCV的高 危行為。同時約有10%-30%的感染由于不明原因（圖5）。石 MLiri iiiirVlftH1*丙肝病毒結構示意圖有不同的基因型和亞型，目前全球鑒定出6種基因HCV與其他RNA病毒一樣，型和50多種亞型，每種基因型核酸序列差 30%以上，亞型間差約15%（圖7）。gGe口 3 GrH47p4 Genotype 6 UtaH blJirttwviAtnu tiH Am OrWBJ LtftnAfneflCB central EnpeHW

6、Em卻 utwlAaU口 SoKiAn hk UUa圖7 HCV基因型分布 （數據來自）4. 丙肝病毒基因組HCV是正鏈RNA病毒，基因組由約9600個核苷酸組成，包括一個兩端非編碼 區(qū)即核糖體進入序列（IRES）、一個閱讀框（ORF）。HCV基因組含10個基 因，表達產生10個結構（核心蛋白、包膜蛋白E1和E2、離子通道蛋白P7）和 非結構蛋白（NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A 和 NS5B）。見圖 功能見表2。&各蛋白I lepQtitis C virus RNA9600 ntbEftsVGene encoding precursor polyp ratein亍 ntrn3 W

7、TRMvuctUraN protei ns z/non-stnctural p rotei nsJ.pTO pfl p27p&A4-Envelopeglycop roZnsI WSt I I II N53 IN&W I Nsaa I機S5U |Iproteasesi*CD-他 ctorsnucleocapsid RNA hfdicivsetramrm rrihrnnproteinVRNA polymerase interiemn resisting;pmtein圖8丙肝基因組結構（數據來自 wili pedia）表2丙肝病毒蛋白功能HCVgB主要功能核心蛋白（core ）病毒核衣殼包膜蛋白：E

8、l和E2病S包膜成分,介導病毒識別和侵入P7離子通il蛋B ,促進病竜販粒釋NS2/31白酶裂解HW多聚蛋白休NS3/4A 蛋白 HWHICV多聚蛋白休NS4B可能促HCVg制g臺體形成NS5A具體未明ssra期所必須，可能與病S逃逸或 HCVg制S合體形成有關NS5B介導HQZ RMA合成（RNA依賴KJRM聚合酶）5. 丙肝病毒生活史1.2.3.包膜蛋白識別肝細胞表面受體介導病毒攝入細胞，釋放正鏈RNA ；進入的病毒RNA還在NS5B的介導下進行復制；進入細胞和復制后的病毒 RNA通過IRES介導翻譯合成多聚蛋白，在經 過NS3/4A蛋白酶水解成病毒蛋白；4.新合成的病毒RNA與病毒蛋白裝

9、配和成熟釋放。具體請見圖9。/rCriHHEr-a圖9丙肝病毒生活史（數據來自）6. 抗丙肝藥物及其靶點a (PEG-IFNa與廣譜抗病毒過去丙肝治療的標準方法是聚乙二醇化的干擾素藥利巴韋林（RBV）聯用。這方法雖然毒性大周期長，但是還是能取得不錯的治 療效果的，HCV-1a型丙肝持續(xù)病毒應答率（SVR）大于70%。目前在我國等很 多亞洲國家該療法能然是主要的治療手段。近年來默沙東、艾伯維、吉利德和 BMS等公司相續(xù)開發(fā)出抗丙肝新藥和新的治 療組合，取得了驚人的療效，使得丙型肝炎這一疾病測定被人類攻克。隨著HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑、NS5A抑制劑和NS5B聚合酶抑制劑的開發(fā), 不但丙肝

10、治愈成為可能，而且排除干擾素和利巴韋林的治療方案減少了對諸多禁 忌癥。ONS5B RNA聚合酶抑制劑 Sofosbuvir ( Gilead ) Dasdbuvir Abbvie)NS3/4A抑制劑Boceprevir ( MSD Telaprevir (Vertex)Simeprevir JNJ JAsunaprevir ( SMS )Vaniprevk MSO )NS5A抑制劑Dadatdsvir ( &M5 )Ombitisvk (Abb 屁) 弭ir ( Giled )Pa ritepr電w f Abbvie )圖10已上市抗丙肝藥物及其靶點NS3/4A是HCV病毒的蛋白水解酶。HCV

11、基因組可翻譯成一條含10個基 因產物的多聚肽鏈，需要NS3/4A水解成病毒蛋白單體，從而組裝成病毒顆粒完 成病毒生活周期。NS3/4A蛋白酶抑制劑是最早開發(fā)并有藥物上市的 HCV特異 的抗病毒藥物。NS5A是HCV病毒非結構蛋白，其功能并沒有明確，已知其是病毒生活周 期所必需，病毒復制對其抑制高度敏感（體外抗病毒活性超強），被認為和病毒 復制復合物形成和病毒與宿主互作有關。NS5B是病毒RAN聚合酶，抑制NS5B直接抑制病毒RNA合成。第一個批準上市的NS5B抑制劑索非布韋（Sofosbuvir）,對多個基因型HCV感染療效驚人，上市后創(chuàng)下了一個又一個記錄，成為至今為止唯個上市首年全球銷售突破

12、100億美元的藥物。從抗病毒策略來看，病毒對宿主的識別、侵入、病毒復制和成熟釋放，以及宿主對病毒的免疫反應等過程都可以作為抗病毒的靶點。事實上也是，病毒識別、宿主反應的Cyclophilin抑制劑都曾被研究過，特別是Cyclophilin抑制劑目 前有藥物Alisporivir甚至進入III期臨床試驗。Cyclophilin抑制劑是宿主靶向的 抗病毒結合蛋白，可以增強干擾素和利巴韋林聯合療法的抗病毒活性。但隨著 NS3/4A、NS5A和NS5B抑制 劑的成功與陸續(xù)推出，其他靶點的藥物研究前景 堪憂。HCV藥物研發(fā)進展綜述（二）NS3/4A蛋白酶抑制劑競品分2016-02-04Liver,*He

13、patfti* Virus 內容概要NS3/4A蛋白的結構與功能NS3/4A抑制策略與抑制劑的開發(fā)1.NS3/4A抑制策略2.第一代NS3/4A抑制劑的開發(fā)3.第二代NS3/4A抑制劑的開發(fā)NS3/4A抑制劑開發(fā)現狀與分析1.國際在研NS3/4A抑制劑2.國內在研NS3/4A抑制劑NS3/4A在HCV治療中的地位與未來研發(fā)和市場預期導讀:1.上期我們簡單介紹了丙肝、丙肝病毒與抗丙肝治療和藥物。我們知道在過 去丙肝的治療一直是以廣譜抗病毒藥物利巴韋林與干擾素聯用為主， 早期市場上 并無丙肝特異靶點的直接抗病毒（DAAs）藥物。2.NS3/4A蛋白酶抑制劑是最早上市的丙肝特異的直接抗病毒藥物， 自

14、2011 年FDA批準第一個NS3/4A蛋白酶抑制劑之后，蛋白酶抑制劑與干擾素/利巴韋 林三聯療法被廣泛應用。3.在2014年歐洲肝臟研究協會（EASL）推出的HCV臨床實踐指南中，該 三聯療法被建議成為HCV基因型1型患者干擾素/利巴韋林治療未完全根除后的 推薦療法。4.本期我們詳細的了解NS3/4A蛋白酶與NS3/4A抑制劑的研發(fā)與進展。1. NS3/4A蛋白酶結構與功能丙肝病毒基因組含10個基因，編碼膜蛋白E1與E2,核心蛋白、p7與非結構蛋 白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B （圖1）。丙肝病毒基因組翻譯成 一個多聚蛋白前體，需要蛋白酶水解成熟成為單體蛋白。stm

15、rturatnon-structuralNS2coreE2N55BNS5AD20102coreD1NS4AND3LCSlLCS2LO locahsatjortcoreInteractioi圖1丙肝病毒基因組基因構成NS3/4A復合物具有絲氨酸蛋白酶活性的 HCV非結構蛋白，催化丙肝病毒非結 構蛋白水解成熟，是丙肝病毒生活周期所必須的。NS3是HCV非結構蛋白，含631氨基酸殘基，具有蛋白酶和 RNA解旋酶雙重 活性。X晶體衍射發(fā)現呈胰蛋白酶樣折疊，形成兩個P片層和催化三聯體含酶底 物特異結合的位點，相比于其他絲氨酸蛋白酶，溝槽較淺。 C端是一個Zn2+結2）。I TI二冋 m汁 I皿日叼F 召

16、J1 M皿 J En n EG - ri h ri 111Br 5合區(qū)，Zn2+離子的結合起到了穩(wěn)定NS3/4A蛋白酶空間結構和正確折疊。N端約 28-30個氨基酸殘基與NS4A中段的疏水氨基酸殘基的相互作用（圖圖2 NS3蛋白B是無NS4A情況下的NS3C:有NS4A類似肽情況下A: NS3全長，其中虛線框內是NS3蛋白酶結構域; 蛋白酶結構域，深色棍棒是催化位點的氨基酸殘基； 的NS3蛋白酶結構域，深色棍棒是 NS4A模擬肽。NS4A作為輔助因子，其N端20個疏水氨基酸殘基與NS3絲氨酸蛋白酶N端結 合形成非共價二聚體，共同執(zhí)行丙肝病毒非結構蛋白的水解和成熟。NS4A是小分子蛋白，含54個

17、氨基酸殘基，中間氨基酸殘基親水參與 NS3/4A蛋白酶活性 中心形成；C端20個氨基酸功能尚不明確（圖 3）。NS4A能夠活化NS3蛋白 酶活性。NS4A的輔助作用相當保守，為藥物設計提供可能。HCV Protease and Co-Factor NS4A4Ke，, Zn finger圖 3 HCV NS4AI_ NS4ANS3/4A蛋白酶水解HCV多聚蛋白前體中非結構蛋白，抑制其蛋白酶活性可以 阻斷HCV復制、翻譯和翻譯后多聚蛋白的加工成熟（圖 4）。NS3/4A蛋白酶 抑制劑是第一個成功上市的抗 HCV直接抗病毒藥物（DAAs ）。入胸HCVNS3-4 ANS5B 復制NS5AIIIP7N

18、S3/4A (form ) -抑制策略圖4 HCV蛋白酶及輔助因子2. NS3/4A蛋白酶抑制策略與抑制劑開發(fā)1.2.3.NS3zfnc finger domainNS4A cofactorCatalytic triad His 57 Asp 87 Ser 139根據NS3/4A蛋白酶結構與功能分析，開發(fā)NS3/4A蛋白酶抑制有以下三條策略: 結合抑制NS3/4A蛋白酶活性位點（圖5）;阻斷NS3蛋白酶與NS4A結合；干擾Zn2+結構域的形成；圖5 NS3/4A蛋白酶結構示意圖以上三條策略的NS3/4A蛋白酶抑制劑均有開發(fā)并曾進入臨床，但是至今為止已 上市的NS3/4A蛋白酶抑制劑均基于結合并

19、抑制NS3/4A蛋白酶活性位點，是不被分解的底物類似物（擬肽類物質）。根據其結合絲氨酸蛋白酶活性位點的方式 _大致可以分為兩類。1. 一類是可逆的共價結合抑制劑，包括 2011年最早上市的Boceprevir與 Tela previr。2. 另一類是非共價結合抑制劑，包括 2013年以及之后上市的Simeprevir、 Asunap revir、Vanip revir 和 Graz op revir。批準類別抑制類別堵構特點表1已上市的NS3/4A蛋白酶抑制劑Boce previr 韋默沙東2011US/EU單藥批準Tela prEvir 特粒匹書Vertex2011US/EU/J P單藥批準

20、Sime prEviif暢森（強 生）2013US/EU/JP單藥批準非斯涔合Asuna previr百時美施貴 寶2014JP單藥批準非共價結合Vaniprevir2014JP單藥批準Grazoprcvir默沙東2016USS方組分非共價結合可逆共價結合NS3/4A抑制劑大環(huán)類非類fS生物大環(huán)類非線14非共 價類淞物大環(huán)類非開發(fā)商上it時間 上市國寂現在開發(fā)的可逆共價結合NS3/4A抑制劑都是線性a酮酰胺類衍生物，與丙肝 NS3/4A蛋白酶催化三聯體中活性位點的絲氨酸共價結合，可逆的抑制NS3/4A蛋白酶?？赡婀矁r結合 NS3/4A抑制劑對NS3/4A的抑制HCV基因型1型選擇 性的，對其他

21、基因型HCV作用不明顯。該類藥物有Telaprevir與Boceprevir已上市（表2）,結構與相關的特征見表 1。NS3/4A蛋白酶抑制劑與干擾素/利巴韋林的三聯療法聯用，總體治療周期是2852周與2448周。線性a酮酰胺類NS3/4A抑制劑極大的提高了持續(xù)病毒響 應時間（SVR），約2564%（原單純干擾素/利巴韋林治療方案SVR小于40%）。線性a酮酰胺類NS3/4A抑制劑口服生物利用度差，毒性大；但是其最大的問題 卻是低耐藥屏障（對耐藥性產生的抵抗）與高交叉耐藥性的問題。單藥應用2周以上，患者快速出現耐藥突變，并對耐藥突變敏感性下降明顯。 最常見的耐藥 突變是R155和A156。低耐

22、藥性屏障嚴重限制了可逆共價結合NS3/4A抑制劑的使用，隨著2013年新一代NS3/4A抑制劑Simeprevir與史詩級”新藥NS5B抑制劑索非布韋（Sofosbuvir）的上市，Telaprevir 與 Boceprevir 逐漸淡出市場。表2可逆共價結合NS3/4A抑制劑藥物廠商Boce pr亡 vi 薩默沙東.叫 1O r O6 0 i-_X-Tel 日 P revirVertexNJ J0類別N5#4A抑制活性抗病毒(ECso, niM )臨床治療方案臨床治療活性特點a酮酰胺可逆共價抑制捌HCV-114 nM400T1D*干擾素刪巴韋林 68%患者下降1個log 低耐藥卿卸突變耐藥。

23、酮酰胺可逆掏介抑制劑HCV-11C5O=1O nlM354 (lb), 280 (la) B1D+干擾素/利巴韋林 SVR12-66% 低耐藥屏障/突變耐藥非共價結合NS3/4A抑制劑6）。非共價結合NS3/4A抑制劑，是線性或大環(huán)類羧肽類化合物，與HCV NS3/4A蛋 白酶催化位點氨基酸殘基產生靜電相互作用結合，即非共價結合(圖 作為非共價結合NS3/4A抑制劑，勃林格殷格翰開發(fā)的 BILN2061是第一個進入 臨床的NS3/4A抑制劑，因為在動物體內提現心臟毒性而中止開發(fā)。之后開發(fā)的 非共價結合NS3/4A抑制劑，在可逆共價NS3/4A抑制劑的基礎上，改善了藥代 動力學特性(提高口服生物

24、利用度)，通過使化合物與活性位點更緊密的結合， 提高藥物的活性。新開發(fā)的非共價結合NS3/4A抑制劑對基因型1型以外的HCV 有明顯的抑制。新開發(fā)的非共價結合NS3/4A抑制劑雖然能夠抑制可逆共價結合 NS3/4A抑制劑 產生耐藥突變的HCV，但是耐藥屏障效果能然很低，并且與可逆共價結合 NS3/4A抑制劑一樣存在交叉耐藥。圖6非共價結合NS3/4A抑制劑作用示意圖（例：semprevir）楊森公司（強生子公司）開發(fā)的 Sime previr是第一個上市的非共價結合 NS3/4A 抑制劑，于2013年被FDA批準上市。Simeprevir出現可以說對NS3/4A抑制劑 的開發(fā)是革命性的。其不僅

25、表現了對NS3/4蛋白酶極高的抑制活性，而且臨床上 與干擾素/利巴韋林合用的三聯療法表現了極高的治愈率，12周持續(xù)病毒響應時間（SVR12）高達88.6%，相對之前的療法有了極大的提高，同時治療周期也 縮短到12周（不足原來的1/4-1/2）。Simeprevir不但對可逆共價結合 NS3/4A 抑制劑產生的耐藥突變 R155/A156 HCV同樣有著抑制效果，而且對其他基因型 HCV同樣有抑制效果（雖然FDA批準的治療范圍目前僅有基因型1型HCV ）。Simeprevir以其良好的治療效果，于上市第二年（2014年）創(chuàng)下了年銷售額23 億美元的佳績。然而既生瑜何生亮，同年上市的吉利德史詩級”

26、新藥NS5B抑制劑索非布韋（Sofosbuvir），以更好的治療效果（SVR12），更廣譜的抗病毒活 性（FDA批準治療基因型1-4型HCV感染），更好的耐藥屏障作用，極低的交 叉耐藥可能性（NS3/4A抑制劑均有交叉耐藥的風險）迅速占領市場，創(chuàng)造了銷 售奇跡。在Sofosbuvir的陰影之下，強生公司推出了 Simeprevir與Sofosbuvir聯 用的治療組合，以期在Sofosbuvir及其復方藥物統治的抗丙肝市場上分一杯羹。2014年后百時美施貴寶和默沙東相續(xù)推出了自己的新一代 NS3/4A蛋白酶抑制 劑及其治療組合，表現了極佳的治療效果。關于各大巨頭推出的治療組合的對比 與分析，咱

27、們將在本HCV藥物研發(fā)進展與分析的第五期中詳細介紹。衾3非共價結合NS3/4A抑制荊SimepreviirAsunaprevirVianiprevirRaritaprevirGraxoprevir廠瞞百時貴寶獣沙東艾伯堆獣沙東蜚別厶4，丄 .1 r批準類別單藥單藥/方坦分單藥awta 分5tfi 分卜忙V-111CV-1HCV-1HCV-1/4HCV-1NS 3/4A 抑 制話性(ICbO )la: 2.3 nMlb； 5.2 nM13:0 7-1.0 nMlb； 0.3 nM0.03 nMHCVY：D IG nM杭病番 ( ES nM )1/2/3：0.10-14,5畔0.1 nM (4)0

28、.21-19 nM (V33/3a)未知臨床治療方秦QD +干擾;泰# 利e韋林BID+Dncifltai virNSSAffl制 刑)lechnivie Viekira Pakor與NSSA抑制劑 etbdwirSX治療周期2412 a 24 JSg12或2坤（31臨床治療1S13：SVR12： 88,6%SVR24; 90%SVR24： 84,5%SVR12： 95%SVR12： 90%耳E尹彳介結令科S M /4 A抑I審!J卉吐言溝式Vanipreviro,SlmeprevirO /Paritaprevir圖7五種非共價結合NS3/4A抑制劑結構式其他NS3/4A抑制劑基于另兩條抑制策

29、略的NS3/4A抑制劑也有研究，并有多個藥物曾經進入臨床， 但因為毒性等的各方面原因未能推向市場。鑒于近年來大量療效驚人的抗HCV藥物與治療組合的問世，未知方式的抗 HCV藥物研究就目前來看從風險與收益 的角度沒有太多的研究價值。3. NS3/4A抑制劑研究現狀與分析NS3/4A抑制劑有如下:國際上對于NS3/4抑制劑的研究如火如荼，目前已經有6個藥物或單藥或以復方 組分的方式先后推向市場。目前國際上還在進行臨床的表4國際臨床在研的NS3/4A抑制劑研發(fā)代名稱ns類別臨床狀態(tài)GS-9S57吉利德未知n期Vedropreviir吉利循非共價結合線14擬肽n期如下Sova p 迨 virAchil

30、iion非共價結合線1糊肽n期如下Ciluprevir勃林格殷格翰非共價結合大環(huán)竣肽n期如下Narlapreviir默沙東非共價結合線性JIMn期如下Dano pr eviir羅氏非共價結合大環(huán)刪；n期如下Fura previrTaiGen非共價結合大環(huán)按肽n期如下MK2748非共價結合大環(huán)細I期如下國際臨床在研的NIS3/4A抑制劑結構式Vedro przirNoN-NFura peviDanoprevir圖8國際臨床在研NS3/4A抑制劑結構式 國內NS3/4A蛋白酶抑制劑研究進展蘇州銀杏樹藥業(yè)開發(fā)的 月啟動臨床I期試驗。杭州歌禮從羅氏引進的 月獲CFDA臨床批件。 II期臨床試驗。1.1

31、類新藥抗HCV NS3/4A抑制劑賽拉瑞韋于2015年5HCV NS3/4A 抑制劑 ASC08（ danoprevir）于 2015 年 8該藥此前在中國大陸以外國家和地區(qū)進行了34個I期和國內正大天晴2013年以3000萬美元購買了 BioLineRx公司的HCV NS3/4A抑制 劑BL-8030在中國大陸和香港的開發(fā)與市場權益。目前未見其申請臨床。BL-8030 在體外對基因型1a/1b/2a的HCV病毒有很強的抑制活性，同時對其他NS3/4A抑制劑耐藥突變高度敏感。表現不錯的體內PK效果，不錯的口服生物利用度（100 mg達33.7%大大高于早期的可逆共價結合抑制劑），很長的藥物肝臟

32、滯留時間 等。研發(fā)廠家來源 弒悲 &注表5國內在研NS3/4A蛋白酶抑制劑S拉瑞韋揃順醐藥業(yè)自研臨床1期ASC08 (danoprevir)羅氏臨床n期BL-S030正大天晴BioLinRx臨床前第二合抑制刪臺灣地區(qū)：SYR垃達94%4. 展望耐藥屏障反面均不如人意并且只第一代共價結合的NS3/4A抑制劑療效、藥動、能作用基因型1型，不過新一代非共價結合NS3/4A抑制劑在療效、口服生物利 用度以及抗病毒譜方面都得到了極大的改善。 關于耐藥屏障與交叉耐藥方面雖有 所提高，但是仍難克服。相對于NS5B抑制劑表現出來的藥效與抗耐藥性，NS3/4A 抑制劑單藥或與干擾素/利巴韋林三聯療法都難有優(yōu)勢。

33、未來的NS3/4A抑制劑應用將主要作為抗丙肝治療組合的組分。而且不同的抗HCV抑制劑聯用可以使新的療法擺脫干擾素和利巴韋林的使用，既降低了毒性 又縮短了治療周期?，F在上市的NS3/4A抑制劑參與的抗HCV治療組合有三種:1.2.3.與NS5B抑制劑聯用（強生：Simeprevi葉Sofosbuvir方案）， 與NS5B抑制劑和NS5A抑制劑組成三聯療法（艾伯維 Viekira Pak）,與NS5A聯用（百時美施貴寶、艾伯維以及 2016年默沙東新推出的治療 組合）。對于未來的NS3/4A抑制劑開發(fā)本人表示不太樂觀，鑒于自 2013年不斷推 出的抗HCV治療組合均有著驚人的療效，除非在這些產品未

34、進入的市場（如中 國等）能快速推出療效相當的新藥，否則難以在諸多強勁競爭對手的手下搶得市 場。從技術上來說，對于催化位點為作用位點的抑制劑開發(fā)，現在上市的藥物 已經表現足夠好，但是因為作用位點的原因，耐藥屏障與交叉耐藥的問題仍然難 已解決。如果不在這兩方面有所突破，新 NS3/4A抑制劑很難比現有藥物表現更 出色。如果要想在治療效果和耐藥等方面有所突破，新的NS3/4A抑制劑必須的（刪除）依賴新的作用機制，如阻斷 NS3與NS4A結合等。新作用方式藥物的 開發(fā)，風險未可知；相對于現行的藥物極佳的治療效果， 新機制藥物的開發(fā)風險 收益比極低。從市場與經濟的角度來看，自2013年以后，吉利德、艾伯

35、維、百時美施貴 寶、楊森和默沙東都先后推出了自己的療效極佳的抗丙肝藥物與組合（ SVR12 都達到90-100%）。鑒于這些藥物與治療組合已經逐漸統治市場，NS3/4A抑制劑的開發(fā)將受到嚴重阻礙。極低的風險收益比使得新的 NS3/4A抑制劑研發(fā)難以 受到資本的青睞。除非在抗丙肝藥領域有一定的技術積累，且有足夠的市場營銷 能力，否則新藥物即便成功上市也難以在市場立足。HCV藥物研發(fā)進展綜述（三）:NS5A抑制劑競品分析藥渡經緯2016-02-15V_本期內容概要：廠NS5A蛋白的結構與功能2. NS5A抑制劑研究策略3. NS5A抑制劑上市藥物介紹4. NS5A抑制劑國內研發(fā)情況5. NS5A抑

36、制劑研究現狀與分析 導讀：上一期我們詳細的介紹了 NS3/4A蛋白酶與NS3/4A蛋白酶抑制劑，了解到 NS3/4A蛋白酶抑制劑是最早上市的丙肝特異的直接抗病毒藥物（DAAs） 。 DAA主要包括NS3/4A蛋白酶抑制劑、NS5A抑制劑及NS5B聚合酶抑制劑。2011年批準上市的NS3/4A蛋白酶抑制劑與 SOC聯用后，成為HCV基因型1 型患者干擾素/利巴韋林治療未完全根除后的推薦療法。而2014年批準上市的NS5A抑制劑，聯合利巴韋林等治療方案對基因 1-4型HCV感染者有顯著治療 效果。本期我們將詳細探討非結構蛋白 NS5A及其抑制劑的研發(fā)與現狀。NS5A蛋白酶結構與功能HCV基因組中非

37、結構基因編碼 HCV NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B 等非結構蛋白。HCV特異的直接抗病毒藥物DAAs主要包括NS3/4A蛋白酶抑 制劑、NS5A抑制劑及NS5B聚合酶抑制劑。（圖1）3*NTRNonstructurall proteinsj 5 NTR J Structural pcoteirts 干* Envelope/ Mstalloprotease,* Glycoproteins/ Sedne proteaseEp 客 id IIftMAhelieasc口除佃陣t IIjRMA f PolymeraseFA屈II料聲A吊I一k4c I ElI E皇II HS11

38、nsz NS5AInhibitors!NS5BPolymorasoHnhibitomN53F4A Protease Inhibitors圖1 HCV病毒基因組構成（Asselah，2011）NS5A是一種高度磷酸化的非結構蛋白，不具備酶催化活性，其磷酸化水平在 HCV基因組的復制和翻譯過程中也起著調節(jié)的作用。NS5A構成NS5A非結構蛋白含有447個氨基酸，分子量為58 kDa,有3個不同的結構域。 結構域1（氨基酸序列：1-213）由一個高度保守的兩性 a螺旋和一個疏水的側鏈及 帶電的側鏈組成，是NS5A與RNA結合的重要區(qū)域。其晶體結構（圖2）顯示它 是一個二聚體，有一個包含四個半胱氨酸殘

39、基 （Cys39 Cys57、Cys59、Cys80） 的鋅結合區(qū)域，此區(qū)域對蛋白的穩(wěn)定性起著重要作用。參與HCV復制，主要由其結構域I和結構域II （氨基酸序列：250-342）負責；參與HCV顆粒的裝配， 主要由結構域III （氨基酸序列：356-447）負責。NbAmino acid lOO詳aoC戸 RCyc 1 42圖 2 NS5A 結構域示意圖(Timothy L et al., 2005)2NS5A蛋白功能NS5A上絲氨酸殘基產生兩種磷酸化程度不同的蛋白， 即基礎磷酸化p56和高度 磷酸化P58,均在HCV的生命周期中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現， NS5A可與HCV RNA、NS5B

40、等組成復制復合體，完成 HCV復制；NS5A亦可通過與NS5B作用刺激NS5B合成負鏈 RNA。此外，NS5A可通過其上的IFN敏感 決定區(qū)與IFN刺激產生RNA依賴型蛋白激酶結合，通過抑制其活性來調節(jié)對 IFN a應答。NS5A還可通過與磷脂酰肌醇 4-激酶m a （PI4KIH a作用刺激其產生 HCV 復制所必需的磷脂酰肌醇 4-磷酸（PI4P）。（圖3）ini用Bon吵區(qū)/晝仝占抽召占占&占心占占占占占占占d占召占占3lacttuariion申Id oomoasJbors?TTTTTfZr TTHHCV 館 pfcdtiM txxMpIvK圖3 NS5A蛋白作用示意圖即使NS5A無已知

41、的酶活性，它與膜網結構相互作用對病毒復制，和修飾 /缺失 膜-結合AH結構域的特異性殘基損害ER定位和RNA復制兩方面是至關重要的。（圖4）CoreNSA N52. N呂3LDHepikcatton complexSynlhestzed HCV R NACyto(lurnnaidAjmEHCVcc圖4 HCV病毒顆粒組裝示意圖（Suzuki，2012）NS5A抑制劑研究策略NS5A功能的重要性和多樣性使它成為抗 HCV的重要靶點，NS5A抑制劑的作 用機制不局限于一種，可能是多種機制的綜合。(圖5)1.2.3.4.5.NS5A抑制劑作用機制的研究可簡要分為：抑制NS5A高度磷酸化；抑制NS5A

42、兩性a螺旋；抑制NS5A結構域I、II、III ;干擾NS5A從內質網向脂滴轉移，導致NS5A不能裝配到復制復合體中, 從而抑制具有完整功能的復制復合體形成和HCV復制；與NS5A形成的功能復合物結合，在改變 NS5A構象的基礎上通過協同 變構作用使整個功能復合物失效，從而抑制HCV。C*IinhibitorRNA? = WetnUrare - MeisrarH圖 5 NS5A 抑制作用(Ascher, D. B., 2014)NS5A抑制劑上市藥物介紹與NS3/4A和NS5B不同，NS5A不具有酶活性，因此無法在酶學水平上篩選 NS5A抑制劑，而只能在細胞水平上進行。F表為已上市的NS5A蛋

43、白酶抑制劑列表:表1已上市NS5A抑制劑抗丙肝藥物藥物Daclatasvir Dihydrochloride 達卡他韋Ledipasvir/Sofosbuvir 雷迪帕葦/索菲布韋Elbasvir/G razop revi r開發(fā)商百時美-施貴寶吉利德默沙東商品名DaklinzaHarvoniiZep atieir*上市時間201420142016上市國家日本/歐盟美國做盟/日本美國批準類別單藥批準S方批準s方批準NS5A 抑制劑-DaclatasvirDaclatasvir是第一代HCV復制復合物的NS5A抑制劑，通過修飾高通量篩選獲 得的活性化合物，為一日1次口服用藥，且口服生物利用度高。作用機制見圖 6Daclatasvir聯合SOC的治療方案主要針對基因1-4型HCV感染，與傳統的 SOC相比，該方案可提高患者的持續(xù)病毒響應時間(SVR)獲得率且縮短治療周 期。初次接受治療的基因1、2、3和4型HCV，感染患者接收該方案治療 后，SVR12 獲得率分別為 83%，83% -88%，69% -78% 和 100%。Daclatasvir聯合Asunaprevir和SOC方案主要針對基因 1和4型HCV 感染, 臨床上該方案的治療效果優(yōu)于特拉匹韋(或波普瑞韋)聯合SOC。Cy