western轉(zhuǎn)膜條件

1、western 轉(zhuǎn)膜條件蛋白來(lái)源： 總蛋白 蛋白名稱（可保密）：一些轉(zhuǎn)錄因子 蛋白分子量： 4070 KDWB 用膜類型、孔徑： NC 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒流 400 mA 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 6090 minPS其實(shí)吧，以我的經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，除非目的蛋白特別小，或者特別大，不然轉(zhuǎn)膜時(shí)間真的不是那么重要， 曾經(jīng)因?yàn)槭д`，轉(zhuǎn)了 15 min 就拆下來(lái)了，但從麗春紅染色來(lái)看，跟平常實(shí)驗(yàn)也 沒(méi)有太大的區(qū)別。蛋白來(lái)源：內(nèi)皮細(xì)胞 總蛋白 蛋白名稱（可保密）： occludin & AKT 蛋白分子量： 65 KD & 56 KDWB 用膜類型、孔徑： PVDF 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)

2、 恒壓 100 V 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 6070 min 設(shè)備名字是 “Bio-Rad mini ”。蛋白來(lái)源：乳鼠心肌細(xì)胞和成年鼠心肌組織 總蛋白和核蛋白 蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量： 65 KD & 55 KDWB用膜類型、孔徑：PVDF（預(yù)先用甲醇處理） 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn) 恒壓 12 V 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 30-40 min 設(shè)備： “ Bi-oRad mini ” 建議：最開始做過(guò)濕轉(zhuǎn)（過(guò)夜的那種），太費(fèi)事費(fèi)時(shí)，效果也不如半干轉(zhuǎn)。蛋白來(lái)源： 293T 細(xì)胞蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 95 KD & 35 KDWB 用膜類型、孔徑： PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓

3、、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒壓90 V-110 V,控制電流不要超過(guò) 300 mA。 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 70 min蛋白來(lái)源：腫瘤手術(shù)標(biāo)本 蛋白名稱（可保密）：轉(zhuǎn)錄因子 蛋白分子量： 33 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 350 mA 恒流 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 150 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad說(shuō)明：相同條件曾用于數(shù)個(gè) 30-70 KDa 的蛋白,都能成功轉(zhuǎn)上,不過(guò)沒(méi)有試縮短時(shí)間效果如 何； 實(shí)驗(yàn)時(shí)沒(méi)為轉(zhuǎn)膜條件苦惱,倒是電泳時(shí)膠的濃度及時(shí)間根據(jù)不同分子量而有區(qū)別。蛋白來(lái)源：成纖維細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： smad3 蛋白分子量： 54 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜

4、 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 350 mA 恒流 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 150 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad蛋白來(lái)源：胰腺癌細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 16 KDa and 42 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 120 V 恒壓 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 90 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-RadA，兩張膜Ao蛋白來(lái)源：大鼠血管平滑肌細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量： 72 KD, 42 KD 和 22 KD WB用膜類型、孔徑：一般的 PVDF膜 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn),恒流一張膜 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 90 min設(shè)備：“ BiORad mini”3次

5、，最好現(xiàn)用現(xiàn)配，我們用的沒(méi)有加SDS轉(zhuǎn)的時(shí)候最好能用冰這樣轉(zhuǎn)的效果要好一些， 轉(zhuǎn)的時(shí)候一定要把三明治每層之間的氣泡 膜大于膠，以免燒壞電極。建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液最多用 塊一類的東西降一下溫， 除去，同時(shí)使濾紙大于膜，蛋白來(lái)源：大鼠 PBMC 蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：55 KDWB用膜類型、孔徑：的 PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒流）：濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60-90 min設(shè)備：“ BiORad mini”建議：轉(zhuǎn)膜液用過(guò)兩三次之后轉(zhuǎn)膜效果就很差了其它按照常規(guī)就好了 其實(shí)的膜一般不怕轉(zhuǎn)過(guò)頭 以我們的經(jīng)驗(yàn)，轉(zhuǎn)膜時(shí)間、電壓其實(shí)也有很大范圍的調(diào)整，并不是非要固定于哪一個(gè)最合適，曾經(jīng)做過(guò) 一張膜轉(zhuǎn)，17 KD

6、的和170 KD的，按照170 KD的條件，17 KD的轉(zhuǎn)膜 也很好的。蛋白來(lái)源：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：大于 250 kDWB用膜類型、孔徑： millipore PVDF膜 um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)，恒流。70 V以上，保持低溫，如果電壓低過(guò)70就需要換緩沖液了。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：180mi n設(shè)備：“ BiORad ”建議：電轉(zhuǎn)保持電壓在蛋白來(lái)源：白血病細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：28 KDWB用膜類型、孔徑：的 NC膜轉(zhuǎn)膜方式（恒流）：濕轉(zhuǎn)， 90 min， A設(shè)備：“ BiORad ”建議：海綿厚度要合適，一次轉(zhuǎn)磨用的海綿太薄，導(dǎo)致三明治沒(méi)

7、夾緊，轉(zhuǎn)膜后拿出來(lái)一看， marker 都變得七扭八歪。但是有前輩說(shuō)墊的海綿太厚可能將膠壓斷，沒(méi)經(jīng)歷過(guò)，不知道是 不是會(huì)有這種情況。蛋白來(lái)源：腫瘤細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白 蛋白分子量： 10-200 KDaWB 用膜類型、孔徑： millipore PVDF 膜 um 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 120 v 恒壓 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 120 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液只用 2次，基本都轉(zhuǎn)上，5%BSA封閉，減少背景。 蛋白來(lái)源：胰腺 B細(xì)胞蛋白名稱（可保密）： * 蛋白分子量： 90-130 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 250 m

8、A 恒流 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 150 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)蛋白來(lái)源：原核表達(dá) 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量： 38 KD WB 用膜類型、孔徑： NC 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒壓： 100 V 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 120 min蛋白來(lái)源：心臟 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 220 kDa， 130 kDa， 70 kDa， 41kDaWB 用膜類型、孔徑： PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 70 v120 min， 180 min， 5-6 h 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂(lè)濕轉(zhuǎn)建議改進(jìn)方向（可選）：40 kDa 下，70 v , 60-90 min 足夠，40-70 kDa 90-12

9、0 min 即可。70-120 kDa , 70 v, 120-180 min 足夠，120-180 kDa , 180-240 min , 180 kDa 以上建議 6 h。蛋白來(lái)源：卵巢癌細(xì)胞膜蛋白蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：53 KDWB用膜類型、孔徑：PVDF膜 um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：80 V 100 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad蛋白來(lái)源：人宮頸癌 HELA細(xì)胞總蛋白蛋白名稱（可保密）：3-acti n蛋白分子量：42WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：50 4 h轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad蛋白來(lái)源：腦組織蛋白名

10、稱（可保密）：蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KDWB用膜類型、孔徑：PVDF um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn) 恒流1 mA/cm 2或2 mA/cm 2轉(zhuǎn)膜時(shí)間：不定轉(zhuǎn)膜設(shè)備：北京六一儀器建議：我共做了六個(gè)蛋白，所以總在想節(jié)約時(shí)間的方式。在 預(yù)試時(shí)我會(huì)觀察電壓數(shù)與轉(zhuǎn)膜效率的關(guān)系，所以我不會(huì)按時(shí)間來(lái)定何時(shí)轉(zhuǎn)完，而是按電壓來(lái)定。通過(guò)染膠來(lái)確定電壓數(shù)與轉(zhuǎn)移蛋白分子量上限的關(guān)系。這樣有的5分 鐘就轉(zhuǎn)完了,不用多浪費(fèi)時(shí)間。并且六一的半干轉(zhuǎn)膜儀隨著使用次數(shù)的增多，效率也會(huì)下降，所以時(shí)間和轉(zhuǎn)膜效率（尤其是使用后期）的關(guān)系并不穩(wěn)定，單純依靠時(shí)間有時(shí)會(huì)有問(wèn)題。蛋白來(lái)源：CHO cel

11、l蛋白名稱（可保密）：酶原蛋白分子量：40 KDWB用膜類型、孔徑：的 PVDF膜（Biorad）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓）：100 V,濕轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60 min。設(shè)備：Tanon （上海天能）建議：1. 轉(zhuǎn)膜液現(xiàn)用現(xiàn)配，用完倒掉。2. 轉(zhuǎn)膜時(shí)間，電壓可以適當(dāng)調(diào)整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此條件一樣轉(zhuǎn)膜效率 很高。蛋白來(lái)源：Hepg2蛋白名稱（可保密）：EGFR蛋白分子量：170kdWB用膜類型、孔徑：pvdf轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：24V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：2個(gè)半小時(shí)轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂(lè)半干轉(zhuǎn)蛋白來(lái)源：肝癌細(xì)胞蛋白名稱：HIF-1a蛋白分子量：120 kDWB用膜類型、孔徑：NC膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓）：80伏，

12、濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150分鐘設(shè)備：“ BiORad mini”建 議：濕轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)膜液特別重要，否則會(huì)導(dǎo)致電壓或者電流不穩(wěn)影響轉(zhuǎn)膜條帶。轉(zhuǎn)膜均現(xiàn)配先用，不重復(fù)利用。轉(zhuǎn)膜時(shí)間一般是150分鐘，80伏恒壓。經(jīng)李春紅染色，靠近蛋白膠的 一側(cè)膜上蛋白染色深， 膜另外一面染色淺， 說(shuō)明蛋白未轉(zhuǎn)過(guò)。 該濕轉(zhuǎn)條件自己做過(guò)的蛋白分 子量范圍： 170-36 kD 。蛋白來(lái)源：心肌細(xì)胞總和膜 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 128 KD，100，60，55，43 KDWB用膜類型、孔徑：NC膜 um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 70 V 200 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad 建 議：轉(zhuǎn)膜液最好

13、現(xiàn)配現(xiàn)現(xiàn)用， 或配成母液， 最好不重復(fù)使用， 70 V 電壓下，電流約 154 mA。 甲醇可以加到 150 ml 。對(duì)大分子量如 200 KD 轉(zhuǎn)膜時(shí)間延長(zhǎng) 6-8 h。蛋白來(lái)源：肺臟蛋白名稱（可保密）： ICAM-1蛋白分子量： 85110 KDWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒流 300 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 120 min設(shè)備名字 Bio-Rad mini一抗用的santa cruz 1 mL包裝的。 比例調(diào)整到1: 800做出很好的條帶。效價(jià)會(huì)一直降低的。去年做的這個(gè)指標(biāo)，今年夏天做就不行了。蛋白來(lái)源：成纖維細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 16 KDaWB用膜

14、類型、孔徑：um PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： A 恒流 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 65 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad蛋白來(lái)源：成纖維細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 28 KDaWB 用膜類型、孔徑： umPVDF 膜 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： A 恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad蛋白來(lái)源：人腫瘤細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量： 80 KDWB 用膜類型、孔徑： um PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)移系統(tǒng)恒流，勿超過(guò)mA/cm 2，同時(shí)轉(zhuǎn)多張膜電流需累加（串聯(lián)）轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60-90 min設(shè)備： Bio-Rad 其實(shí)有些東西并不

15、是非常嚴(yán)格的，要轉(zhuǎn)移的目的蛋白分子量小，那么轉(zhuǎn)移的時(shí)間就短一些， 反之，則長(zhǎng)一點(diǎn)；蛋白量充足，可以多轉(zhuǎn)一會(huì)，蛋白量較少，則要少轉(zhuǎn)一下，免得蛋白穿膜 而過(guò)到了濾紙上而前功盡棄。蛋白來(lái)源：人和鼠肝癌細(xì)胞總蛋白、胞漿、胞核蛋白 蛋白名稱（可保密）： *蛋白分子量： 17-116 kdWB用膜類型、孔徑：PVDF膜 um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流 200 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 3 h轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) 北京六一 24D mini蛋白來(lái)源： CO COS7 293T 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量： 80 72 56 52 48 25 18KDWB用膜類型、孔徑： um PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：

16、濕轉(zhuǎn) 90 V 電流約為 230-280 mA 之間。兩張膜串聯(lián)疊加。 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 40 min設(shè)備： Bio-Rad 法碼西亞 蛋白來(lái)源：人腫瘤細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白 蛋白分子量： 30-60 KDaWB 用膜類型、孔徑： pall NC 膜 um 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流 mA/ 平方厘米膜 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60-90 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備 : 北京六一 半干轉(zhuǎn) 建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成 2 倍的母液，轉(zhuǎn)膜液的多少會(huì)影響電轉(zhuǎn)的效率， 一般將吸水紙潤(rùn)濕即可，不要和膜一起浸泡，這樣效果很好。蛋白來(lái)源：人肝癌腫瘤細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： notch 蛋白分子量： 60-1

17、20 KDaWB 用膜類型、孔徑： pall NC 膜 um 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流 A 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： -20 度冰柜 120 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備 : 濕轉(zhuǎn) Bio-Rad 建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成 10 倍或 5 倍的母液，保持低溫是轉(zhuǎn)膜效果的一 個(gè)保證，這樣效果很好。蛋白來(lái)源：膠質(zhì)瘤細(xì)胞總蛋白和核蛋白 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 18 KDa 、36 KDa、 55 KDa、98 KDaWB用膜類型、孔徑：NC膜PALL 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 恒流 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad mini 轉(zhuǎn)緩液的配制有點(diǎn)講究。如果蛋白大于一百多，一般

18、加入SDS時(shí)間延長(zhǎng)結(jié)果會(huì)更好些。由于，目前試驗(yàn)的蛋白就都不大，所以，我們都采用不加 SDS的轉(zhuǎn)緩液，跑出來(lái)的條帶也很整齊、干凈。蛋白來(lái)源大腸癌 205 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量： 92 kd ， 43 kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 90 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)，天能。蛋白來(lái)源：大鼠腦組織蛋白名稱（可保密）：BDNF （ 28 KDa）、Bactin （42 KDa）、LaminB （72 KDa），以及磷酸化蛋白（保密 43 KDa）WB用膜類型、孔徑：PVDF（）膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：300 mA恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bi

19、o-Rad Mini轉(zhuǎn)膜緩沖液：25%甲醛 覺(jué)得這個(gè)濃度的甲醛可以有效降低電轉(zhuǎn)的熱量，而且使膜對(duì)蛋白的 吸附效果較好，Marker轉(zhuǎn)到膜上很鮮艷。用立春紅染色效果也很好。蛋白來(lái)源：表達(dá)產(chǎn)物蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：29 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：A恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：80 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來(lái)源： cell lysate, culture medium蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：15-50 kDsemi-dryWB用膜類型、孔徑：NC, PVDF,um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓， 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： about 2h is ok if the

20、protein is small and the voltage can keep 100 V ， if not increase to 3-4 h 。轉(zhuǎn)膜設(shè)備： Bio-Rad蛋白來(lái)源：肺臟、肝臟等。蛋白名稱（可保密）： actin蛋白分子量： 43 kDWB 用膜類型、孔徑： NC 膜 PALL um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒流 200 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 4560 min設(shè)備名字 Bio-Rad mini用的 santa cruz 分裝和整裝的都可以。效價(jià)一般 1：1000-1 ：3000 左右，可穩(wěn)定較長(zhǎng)一段時(shí) 間。蛋白來(lái)源肺臟蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量： 19 kd,35

21、kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流 250轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 150 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad mini蛋白來(lái)源：大鼠血管蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量： 140 kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流， 200 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 210 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備 :濕轉(zhuǎn) ,北京六一蛋白來(lái)源：心肌蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量： 90 kDa， 70 kDa, kDaWB 用膜類型、孔徑： NC轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 70 v 240 min ，120 min ， 60 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂(lè)濕轉(zhuǎn) 蛋白來(lái)源：腦 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子

22、量： 16 KD 60 KDWB 用膜類型、孔徑： 16 的用的 PVDF，60 的用的 NC 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 20 V 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 16 的 30 min，60 的 90 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備： Bio-Rad 半干蛋白來(lái)源：子宮內(nèi)膜癌組織 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量：WB用膜類型、孔徑：NC膜 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流 400mA 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 90 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad蛋白來(lái)源：真核表達(dá) 蛋白名稱（可保密）：（多種， 30 個(gè)以上） 蛋白分子量： 40-200 kD100 V （電流在 280 mA至350 mA之間）WB 用膜類型、孔徑： PVDF轉(zhuǎn)膜方

23、式（恒壓、恒流）：恒壓 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60 min（M<100kD）,60-100min （100kD<M<200kD）轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) 蛋白來(lái)源：大鼠腎臟 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量： 130 kDWB 用膜類型、孔徑：膜 PALL 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒流 350 mA 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 120min設(shè)備名字 Bio-Rad mini一抗用的 sigma 羊抗大鼠， mL 包裝的，打折后價(jià)格 3000 多，有些貴哦。比例調(diào)整到1 : 1500左右條帶可，用 BSA封閉。但是背景稍高。蛋白來(lái)源：腦組織蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：38 KDaWB用膜類型、孔徑：

24、PVDF膜，轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：80 v恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：180 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad mini蛋白來(lái)源：真核表達(dá)蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：約 35 kD （雙亞基）WB用膜類型、孔徑： um PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流 200 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-rad,天能，六一有些轉(zhuǎn)膜時(shí)間其實(shí)不需要那么長(zhǎng)的，轉(zhuǎn)膜沒(méi)轉(zhuǎn)上一般原因不在這里，可能是轉(zhuǎn)膜液的原因：蛋白SDS可能影響其與膜的結(jié)合，還原型電泳因巰基乙醇的原因也可能導(dǎo)致后面的抗體不結(jié) 合（這是我最近的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)），還有一抗的選擇很重要，一定要選識(shí)別線性表位的抗體，才 能用于做WB。蛋白來(lái)源：細(xì)

25、菌蛋白蛋白名稱（可保密）：全部的可溶性蛋白蛋白分子量：11-170 KDWB用膜類型、孔徑： NC轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒流300 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：80 min蛋白來(lái)源：骨肉瘤細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：72 kDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜um）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)恒流200 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：20-30 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：Bio-Rad型號(hào)忘了，就是有 4個(gè)插孔的電泳儀。建議改進(jìn)方向：低溫很重要，新鮮的電轉(zhuǎn)液也很重要。蛋白來(lái)源：骨肉瘤 CELL LINE蛋白名稱（可保密）：Beta acti n蛋白分子量：42 kDaWB 用膜類型、孔徑： Nitrocellulos

26、e Membraneum Pore Size （Invitrogen）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)，恒壓 22 v轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：X-cell Sure Lock Min i-cell （I nvitroge n）建議改進(jìn)方向：轉(zhuǎn)膜過(guò)程冰水浴，保持低溫，Transfer Buffer重復(fù)使用。蛋白來(lái)源：腎瘤細(xì)胞蛋白分子量：39 kDaWB 用膜類型、孔徑： Nitrocellulose Membrane um Pore Size （Invitrogen）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒壓100 v轉(zhuǎn)膜時(shí)間：50 min蛋白來(lái)源：MCF7蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：70 kD

27、aWB用膜類型、孔徑：PVDF膜（GE）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 100伏轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂(lè)小轉(zhuǎn)膜儀蛋白來(lái)源：pichia分泌表達(dá)蛋白名稱（可保密）：細(xì)胞因子等蛋白分子量：17到30 kDaWB 用膜類型、孔徑： millipore PVDF um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn) 恒壓： 100 V轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60 min這個(gè)條件除了 100 KDa 的預(yù)染 maker 轉(zhuǎn)的不好，剩下的條帶都非常清晰。正向前面 ycwzq 說(shuō)的， 感覺(jué)時(shí)間不是很重要， 只要蛋白別太小或太大， 在一個(gè)比較寬的時(shí)間和電壓范圍都能 轉(zhuǎn)上。當(dāng)然這些還有一個(gè)重要的影響因素就是所用的蛋白轉(zhuǎn)印緩沖液。所以

28、建議把自己用的轉(zhuǎn)印緩沖液的配方也貼上，便于分析交流。我先說(shuō)我的吧，是大師兄師姐的配方，我用了感覺(jué)還不錯(cuò)，但是100 KDa以上的轉(zhuǎn)的不好。蛋白轉(zhuǎn)印緩沖液：Tris堿g，甘氨酸9 g,甲醇200 ml，加水定容至1000 ml。蛋白來(lái)源： 大鼠坐骨神經(jīng)蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量： 30 kDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜um）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 濕轉(zhuǎn) 恒流 300 mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 45 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備 ： Bio-Rad蛋白來(lái)源：小鼠胚胎成纖維蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量： 36 KDa、 55 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： A 恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60

29、 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備 ： 濕轉(zhuǎn) Bio-Rad mini墊子變薄時(shí),可用三層纖維墊,也沒(méi)問(wèn)題。蛋白來(lái)源：小鼠前列腺癌細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： P53 P21 RAD51 GAPDH蛋白分子量：53 KDa、 21 KDa、 37 KDa、 36 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 110 v轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備 ： 濕轉(zhuǎn) Bio-Rad mini蛋白來(lái)源： HEK293 總蛋白 蛋白名稱（可保密）： *蛋白分子量： 200KDWB用膜類型、孔徑：PVDF膜 um （用甲醇預(yù)先處理）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 25 V 轉(zhuǎn)膜時(shí)間：過(guò)夜 （16-20 ho

30、urs） 轉(zhuǎn)膜設(shè)備 :biorad mini蛋白來(lái)源：人前列腺癌細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： * 蛋白分子量： 40 KDWB用膜類型、孔徑：PVDF膜 um （用甲醇預(yù)先處理） 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓20 V， 限制最高電流 A。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：過(guò)夜 （16-20hours） 轉(zhuǎn)膜設(shè)備： biorad semi-dry蛋白來(lái)源：組織 蛋白名稱（可保密） 蛋白分子量： 42 KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜（）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）： 350 mA 恒流 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 60-90 min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn) Bio-Rad蛋白來(lái)源： BL21 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 4 kdWB 用膜類

31、型、孔徑： PVDF umg Trizma-base。轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 15 v 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： O/N 轉(zhuǎn)膜設(shè)備 : Bio-Rad Mini 濕轉(zhuǎn) 轉(zhuǎn)膜液的配制： for 1 L transfer buffer ， 200 ml Methanol ， g Glycine， 用了 Trcine-gel SDS Page 效果不錯(cuò) 蛋白來(lái)源：腎臟 蛋白名稱（可保密） 蛋白分子量： 23 kdWB 用膜類型、孔徑： PVDF um 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 20 v 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 35 mins 轉(zhuǎn)膜設(shè)備 : Bio-Rad 半干蛋白來(lái)源： 來(lái)自 MDCK 增殖的流感病毒裂解物 蛋白名

32、稱（可保密）： PB1蛋白分子量： 96 kd （注意，10% SDS-PAGE冰上電泳。用預(yù)染 marker觀察100kd的條帶跑到膠的正中間位置時(shí)，才開始轉(zhuǎn)膜，否則轉(zhuǎn)膜效率降低）WB用膜類型、孔徑：NC膜，轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓， 100V 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 2 hours轉(zhuǎn)膜設(shè)備 : BIO-rad 轉(zhuǎn)膜設(shè)備。其間，準(zhǔn)備一個(gè)冰盒，將電泳槽半埋到冰里。轉(zhuǎn)膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加 SDS以及多大質(zhì)量濃度等）：g甘氨酸，g tris，g SDS， 200 ml 甲醇。蛋白來(lái)源：腎臟 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量： 9 kdWB 用膜類型、孔徑： PVDF um 轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 20 v 轉(zhuǎn)膜時(shí)間： 30 min 轉(zhuǎn)膜設(shè)備 : Bio-Rad 半干蛋白來(lái)源： 軟骨細(xì)胞 蛋白名稱（可保密）： b-actin 蛋白分子量： 43 kdWB用膜類型、孔徑：PVDF膜，轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)