培養(yǎng)基適用性驗證方案

1、培養(yǎng)基適用性驗證方案起草人:方案審核人:方案批準(zhǔn)人:日期：年月日日期：年月日日期：年月日1. 驗證目的 32. 參照標(biāo)準(zhǔn) 33. 驗證項目 34. 驗證小組人員及職責(zé) 3-45. 驗證可接受的標(biāo)準(zhǔn) 46. 驗證材料 4-57. 菌液制備 58. 適用性檢查 5-69. 控制菌檢查 71. 驗證目的：需氧菌、霉菌及酵母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基及控制菌培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。 本次驗證的目的是確認(rèn)胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng) 基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基適合需氧菌、霉菌及酵母菌、大腸埃希菌的測定和控制菌適用性檢 查。2. 參照標(biāo)準(zhǔn)：2015版中國藥典微生物限度檢查法。3. 驗

2、證項目：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基和麥康 凱瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查4. 驗證小組人員及職責(zé)：4.1驗證小組人員：小組人員職務(wù)姓名所在部門職務(wù)組長劉秀質(zhì)量管理部經(jīng)理組員郝枝桃質(zhì)量管理部QC主任組員王和霞質(zhì)量管理部檢驗員組員蘭丹質(zhì)量管理部檢驗員4.2驗證人員職責(zé)及要求按驗證方案及相關(guān)文件實施驗證。認(rèn)真觀察并做好驗證原始記錄。對實施驗證的結(jié)果負(fù)責(zé)。4.3驗證中各部門的職責(zé)驗證領(lǐng)導(dǎo)組職責(zé)431.1制訂驗證總計劃，負(fù)責(zé)全公司驗證工作的管理確定驗證項目及驗證項目負(fù)責(zé)人。負(fù)責(zé)驗證方案的批準(zhǔn)工作。負(fù)責(zé)驗證資料及結(jié)果的審核工作。負(fù)責(zé)驗證報告的批準(zhǔn)工作。驗證工作小組職責(zé)負(fù)責(zé)驗證方

3、案的起草工作。參與驗證方案的討論、確認(rèn)工作。4.323負(fù)責(zé)驗證方案的實施。4.324負(fù)責(zé)驗證結(jié)果的分析、統(tǒng)計、報告工作。4.325參與驗證結(jié)果的評價工作。質(zhì)量部職責(zé)負(fù)責(zé)驗證方案的審核工作。負(fù)責(zé)驗證過程中儀器、儀表、計量器具的校驗工作。負(fù)責(zé)驗證中各項檢測工作，提供驗證的檢驗記錄、檢驗報告，對驗證過程中的各項檢驗工作負(fù)責(zé)。負(fù)責(zé)驗證資料和報告的審核工作。負(fù)責(zé)驗證文件回收、歸檔管理工作。5. 合格標(biāo)準(zhǔn)：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。6. 試驗材料：6.1. 被驗證培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

4、、麥康凱液體培養(yǎng)基6.2. 儀器設(shè)備：6.2.1. YX280B手提式不銹鋼蒸鍋6.2.2. DH-360型電熱恒溫培養(yǎng)箱6.2.3. 250B生化培養(yǎng)箱6.2.4. 101 型電熱恒溫培養(yǎng)箱6.3.驗證用培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基麥康凱液體培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基麥康凱瓊脂對照培養(yǎng)基麥康凱液體對照培養(yǎng)基64驗證用菌株：（第 代）試驗菌株鋰傘甘 培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間（小時）白色念珠菌20-25 C24-48h黑曲霉沙氏匍萄糖瓊脂培養(yǎng)基5-7天金黃色葡萄球菌 大腸埃布困 銅綠假單胞菌胰酪大豆胨培養(yǎng)基30 35 C

5、18-24h7. 菌液制備7.1. 取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白色念球菌的新鮮培養(yǎng)物。72用0.9%的無菌氯化鈉溶液，制成適宜濃度的菌懸液。7.3.取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入 3-5ml濃度為0.9%的無菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。7.4 采用適宜的方法吸出抱子懸液至無菌試管中。7.5. 用0.9%的無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的抱子懸液。7.6. 注意事項：菌液制備后，如在室溫下放置，應(yīng)在2h內(nèi)使用；如保存在2-8 C,可在24h 內(nèi)使用，黑曲霉抱子懸液可保存在 2-8 C,在驗證過的儲存期內(nèi)使用。&培養(yǎng)基適用性檢查：8.1分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸

6、埃希菌、銅綠假單胞菌的菌液至胰酪大豆胨培養(yǎng)基。8.2每株試驗菌平行制備2個平板，混勻、凝固，置于30-35 C培養(yǎng)不超過3天計數(shù)。8.3分別接種不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。8.4每個試驗菌平行制備2個平板，混勻、凝固，置于20-25 C培養(yǎng)不超過5天計數(shù)。8.5用對應(yīng)的對照培養(yǎng)基代替被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗。8.6結(jié)果判定：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)對照培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)的70%且菌落形態(tài)大少與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，判定培養(yǎng)基的適用性試驗檢測符合規(guī)定。試驗時間年月日完成時間年月日驗證菌株平皿號供試品組cfu / ml對照培養(yǎng)基組cfu / ml回收率%應(yīng)7

7、0%銅綠假單胞菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值金黃色葡萄球菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值大腸埃布困（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值白色念珠菌（培養(yǎng)5天開始計數(shù)）1-2-平均值黑曲霉菌（培養(yǎng)5天開始計數(shù)）1-2-平均值結(jié)論試驗人 復(fù)核人9、控制菌檢查控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示特性的檢查。常 用培養(yǎng)基適用性檢測項目及所用菌株見下表。大腸埃布困麥康凱液體培養(yǎng)基促生長能力大腸埃布困抑制能力金黃色葡萄球菌麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示特性大腸埃布困9.1麥康凱液體培養(yǎng)基適用性檢查促生長能力檢查分別接種不大于100cfu的大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中。在35C條件下培養(yǎng)24h，與對照培養(yǎng)基管比較。檢查標(biāo)準(zhǔn)：被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。檢驗結(jié)果：抑制能力檢查9.121分別接種不少于100cfu的金黃色葡萄球菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中。在35C條件下培養(yǎng)24h,并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較。檢查標(biāo)準(zhǔn)：被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌均不得生長檢驗結(jié)果：9.2麥康凱瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查：促生長能力+指示特性的檢查9.2.1. 用涂布法分別接種不大于100cfu的大腸埃希菌