第三節(jié)食品中農(nóng)藥殘留及其檢測

1、第三節(jié)食品中農(nóng)藥殘留及其檢測農(nóng)藥是指用于預(yù)防、消滅或者控制危害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草及其他有害生物，以及有目的地調(diào)節(jié)植物、昆蟲生長的藥物的通稱。目前，全世界實際生產(chǎn)和使用的農(nóng)藥品種有上千種，其中絕大部分為化學(xué)合成農(nóng)藥。農(nóng)藥按用途可分為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺瞞劑、植物生長調(diào)節(jié)劑和殺鼠藥等;按化學(xué)成分可分為有機磷類、氨基甲酸醋類、有機氯類、擬除蟲菊醋類、苯氧乙酸類、有機錫類等;按藥劑的作用方式，可分為觸殺劑、胃毒劑、熏蒸劑、內(nèi)吸劑、引誘劑、驅(qū)避劑、拒食劑、不育劑等。按其毒性可分為高毒、中毒、低毒三類;按殺蟲效率可分為高效、中效、低效三類;按農(nóng)藥在植物體內(nèi)殘留時間的長短可分為高殘留、中殘留和低殘

2、留三類。農(nóng)藥殘留是指由于噴施農(nóng)藥后存留在環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品、食品、飼料、藥材中的農(nóng)藥及其降解代謝產(chǎn)物，還包括環(huán)境背景中存有的污染物或持久性農(nóng)藥的殘留物再次在商品中形成的殘留。一般來說，農(nóng)藥殘留量是指農(nóng)藥本體物及其代謝物的殘留量的總和，表示單位為mglkg。當(dāng)農(nóng)藥過量或長期施用，導(dǎo)致食物中農(nóng)藥殘存數(shù)量超過最大殘留限量(MRL)時，將對人和動物產(chǎn)生不良影響，或通過食物鏈對生態(tài)系統(tǒng)中其他生物造成毒害。本節(jié)主要介紹目前市面上使用比較普遍的幾類農(nóng)藥的殘留分析，包括:有機氯類農(nóng)藥、有機磷類農(nóng)藥、氨基年言，類農(nóng)藥、擬除蟲菊醋類農(nóng)藥等的殘留分析。一、有機氯農(nóng)藥殘留及其檢測(一)有機氯農(nóng)藥的性質(zhì)及常見品種有機氯農(nóng)藥(

3、Organochlorine pesticides， OCPs)是具有殺蟲活性的氯代煌的總稱。逞ZOCPs分為三種主要的類型，即DDT及其類似物，六六六(也稱BHC，工業(yè)品是多種異虧 的混合物，其中，生物活性組分-BHC僅占15左右，其余均為無效組分)和環(huán)戊二位生物。這三類不同的氯代短均為神經(jīng)毒'性物質(zhì)，脂溶性很強，不溶或微溶于水，在生物z一的蓄積具有高度選擇性，多貯存于機體脂肪組織或脂肪多的部位，在堿性環(huán)境中易?失效。常見的有機氯農(nóng)藥有DDT、六六六、林丹(lindane， 99 y - BHC)，氯丹( 

4、;chlonk:.:硫丹( endosulfan)、毒殺芬(cru:叩hechlor)、七氯( heptachlor)、艾氏劑( aldrin)、狄氏劑drin)、異狄氏劑(en世in)等。 由于這類農(nóng)藥具有較高的殺蟲活性，殺蟲譜廣，對溫血動物的毒性較低，持續(xù)性較一加之生產(chǎn)方法簡單、價格低廉，因此，這類殺蟲劑在世界上相繼技人大規(guī)模的生產(chǎn)和仨言其中，六六六、DDT等曾經(jīng)成為紅極一時的殺蟲劑品種。但從20世紀(jì)70年代開始，許多二業(yè)化國家相繼限用或禁用某些OCPs，其中主要是DDT、六六六及狄氏劑。我國早已停止三工和使用有機氯農(nóng)藥。但由于其性質(zhì)穩(wěn)定，在自然界不

5、易分解，屬高殘留品種，因此在世乒-多地方的空氣、水域和土壤中仍能夠檢測出微量OCPs的存在，并會在相當(dāng)長時間內(nèi)繼主-響食品的安全性，危害人類健康。(二) GC-E法測定有機氯農(nóng)藥殘留在有機氯農(nóng)藥分析領(lǐng)域，最為廣泛使用的檢測技術(shù)是氣相色譜-電子捕獲檢測器(GC-ECD)，它具有靈敏度高、分離效果好、定量準(zhǔn)確等特點。此處介紹的方法節(jié)錄自G 17332一1998，主要適用于糧食、蔬菜等作物中有機氯農(nóng)藥殘留的檢測。 1.原理樣品中的有機氯農(nóng)藥經(jīng)石油酷提取、硅藻土柱層析凈化后，采用氣相色譜-電子捕在L測器檢測，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。2.樣品提取 糧

6、食:稱取109糧食試樣于三角瓶中，加人20mL石油酶，振蕩30 min。蔬菜:稱取20 g樣品于三角瓶中，加入30mL丙酣和30mL石油酶，搗碎、提取二rrnn，過濾，向濾液中加入1mL2硫酸鈾溶液，搖勻，靜置分層，下層溶液用20mL x二 石油酷萃取，合并三次石油酷萃取液，過元水硫酸鈾層，濃縮至IOmL。3.凈化與濃縮 在玻璃層析柱中自下而上依次加人1 cm高元水硫酸鍋、5g5滅活弗羅里硅土(層析三三弗羅里硅土于620"C灼燒4h后備用，用前140"C烘2 h，趁熱加5水滅活)、1 cm高無水

7、=酸鈾，輕輕敲實，先用20mL石油酷淋洗柱，棄去淋洗液，柱面要留有少量石油酷液，準(zhǔn)號是7取2mL提取濃縮液上柱，用1mL石油醒一乙酸乙醋(95 :5)洗脫，洗脫液濃縮至小量用少量石油酷定容至1mL，供GC分析。4.、測定條件 色譜柱:石英毛細(xì)管柱， 0.25 mm x 15 m，內(nèi)涂OV -101固定液;溫度: 180"C以5"C/min升至230"C保持30 min，進樣口及檢測器溫度為250"C;載氣流速:氮氣40mmm;進樣量: 1

8、1;L。5.含量計算 、略。(三)薄層色譜法測定有機氯農(nóng)藥殘留1.原理食品樣品中的有機氯農(nóng)藥(如六六六及DDT類)經(jīng)提取、凈化、濃縮、點樣后，在氧化鋁薄層上被分離，用硝酸銀顯色，經(jīng)紫外線照射可生成黑色斑，與標(biāo)準(zhǔn)品比較可進行定性和半定量。2.樣品處理 提取、凈化及濃縮均同氣相色譜法。3.測定 薄層板的制備:稱取氧化鋁G餌，加1mL 1硝酸銀溶液及13mL水于研缽中研磨成糊狀，立即涂布在3塊10 em x 20 em玻璃板上，薄層厚度0.25 mm，于1烘0.5 h，置干燥器中避光保存。點樣:在同一

9、薄層板的底端2 em處，用微量注射器或經(jīng)標(biāo)定的自制點樣微管點3 -10µL的測定液和標(biāo)準(zhǔn)品液。保證至少有4個標(biāo)準(zhǔn)品點，標(biāo)準(zhǔn)品的點樣量為0.02月、0.04煒、 0.08陀、0.1用，各點相距0.5-1.0 em。 展開劑:丙酣:石油酷= 1 :99，體積比。顯色:將展開、晾干的薄層板于通風(fēng)櫥中噴以lOmLl硝酸銀顯色劑，吹干后距紫外燈8 em處照射10 - 20 min，則六六六、DDT各異構(gòu)體呈現(xiàn)棕黑色斑點。分別測量六六六、DDT各異構(gòu)體斑點的Rf值。 定性定量分

10、析:對照比較樣液斑點與標(biāo)準(zhǔn)斑點的Rf值即可對六六六、DDT等各個異-構(gòu)體進行定性分析。采用目測比較法進行半定量，即目測樣品斑點的大小、顏色深淺，與一系列相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥異構(gòu)體斑點相比較，進而近似地估測原樣品中的含量。二、有機磷農(nóng)藥殘留及其檢測(一)有機磷農(nóng)藥的特性及種類有機磷農(nóng)藥(OPPs)是含有C-P鍵或C-P， C-S-P， C-N-P鍵的有機化合物。在農(nóng)藥方面，它不但可以作為殺蟲劑、殺菌劑，而且也可以作為除草劑和植物生長調(diào)節(jié)劑。大部分有機磷農(nóng)藥不溶于水，而溶于有機溶劑，在中性和酸性條件下穩(wěn)定，不易水解，在堿性條件下易水解而失效。目前正式商品化的有機磷農(nóng)藥有上百種。常見的

11、有代表性的或影響較大的有機磷農(nóng)藥有敵敵畏( Diehlorvos)、二澳磷(Naled)、久效磷( Monocrotophos)、磷膠( Phosphoamidon)、對硫磷(Para出ion)、甲基對硫磷( Parathion - methyl)、殺螺硫磷( Fenitrothion)、倍硫磷(Fen由1-on)、內(nèi)吸磷( 1059， Demeton)、雙硫磷(Temephos)、毒死蟬(創(chuàng)orp州os)、二嗦農(nóng)( Diazi- nm)、辛硫磷(Phoxim)、氧樂果(Orne出o圳

12、、丙澳磷( Profenofos)、甲拌磷(3911， Phor- 指)、馬拉硫磷(Mala由ion)、樂果(Dime也oate)、甲膠磷( Methamidophos)、乙酷甲膠磷(Acephate)、敵百蟲( Trichlorfon)、殺蟲畏( Tetrachlorvinphos)、殺螺威(GC3583)、殺螺臘 ( Cyanoph)、異丙膠磷( Isofenphos)等。 有機磷殺蟲劑由于藥效高，易于被水、酶及微生物所降解，很少殘留毒性等，因而從20世紀(jì)40年代到70年代得到飛速發(fā)展，在世

13、界各地被廣泛應(yīng)用，有140多種化合物正在或曾被用作農(nóng)藥。但是，有機磷殺蟲劑存在抗性問題，某些品種存在急性毒性過高和遲發(fā)性神經(jīng)毒性問題。從20世紀(jì)70年代以后，有機磷殺蟲劑的研究和開發(fā)速度大大放慢了，但在殺蟲劑領(lǐng)域，目前它仍被廣泛使用。過量或施用時期不當(dāng)是造成有機磷農(nóng)藥污染食品的主要原因。有機磷農(nóng)藥主要是抑制生物體內(nèi)的膽堿醋酶的活性，導(dǎo)致乙酷膽堿這種傳導(dǎo)介質(zhì)代謝紊亂，產(chǎn)生遲發(fā)性神經(jīng)毒性，引起運動失調(diào)、昏迷、呼吸中樞麻痹甚至死亡。(二)有機磷農(nóng)藥的檢測文獻中報道的有機磷農(nóng)殘分析方法包括色譜法、波譜法和酶抑制法三大類，而以色譜法中的GC及HPLC法應(yīng)用的最多。AOAC在卻世紀(jì)80年代就對大部分有機磷

14、農(nóng)藥建立了氣相色譜分析方法。近年來， AOAC又對近半數(shù)的有機磷農(nóng)藥建立了HPLC檢測法。我國食品衛(wèi)生國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17331一1998采用的是氣相色譜法檢測有機磷農(nóng)殘。該法的適用范圍是糧食、蔬菜中有機磷和氨基甲酸醋類農(nóng)藥殘留(見后文)的檢測，此處將蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的檢測方法的主要內(nèi)容節(jié)錄如下。1.原理樣品中殘留的有機磷和氨基甲酸醋類農(nóng)藥經(jīng)有機溶劑提取，并經(jīng)液液分配、微型柱凈化等步驟除去干擾物質(zhì)，采用氣相色譜-氮磷檢測器(GC-盯D)法檢測，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。2.樣品提取 稱109蔬菜試樣于三角瓶中，加人與樣品含水量之和約為109的水和

15、20mL丙酣，振蕩提取30 min后，過濾，取20mL濾液于分液漏斗中。3.凈化與濃縮 向分液漏斗中加入40mL凝結(jié)液(5 g氯化鍍+ 10mL磷酸+1mL水，用前稀釋5倍)和1 g助濾劑celite 545，輕搖后放置5 min，過濾，濾液加人3 g NaCl，用約50、50、30mL二氯甲:皖萃取三次，合并二氯甲:皖萃取液，經(jīng)無水硫酸鈾漏斗過濾，濾液在35't水浴上濃縮至少量，用氮氣吹干。殘渣用少量正己燒溶解，然后上微型硅膠層析柱(1g硅膠，正己燒濕法裝柱)，依次用4mL正己燒-丙酣(7:3)

16、、4mL乙酸乙醋、8mL丙酣-乙酸乙醋(1: 1)、4mL丙嗣-甲醇(1:1)洗脫，合并洗脫液，45't下濃縮近干，用丙酣定容至1mL，供GC分析。4.測定-色譜條件 色譜柱:石英毛細(xì)管柱， 0.32mm x 25m，內(nèi)涂OV -101或BPS固定液;檢測器:氮磷檢測器;溫度: 14O't以5't/min升至185't保持2 min，再以2't/min升至195't繼而以lO't/min升至235't保持1 min，進樣口溫度為240'

17、;t;氣體流速:氮氣50mUmin，氫氣0.5kg/cm2，空氣0.3kg/cm2 進樣量: 1µLo5.含量計算 略。三、氨基甲酸醋類農(nóng)藥殘留及其檢測(一)氨基甲酸醋類農(nóng)藥的性質(zhì)及常用晶種氨基甲酸醋類農(nóng)藥可視為氨基甲酸的衍生物，氨基甲酸是極不穩(wěn)定的，會自動分解為CO2和民0，但氨基甲酸的鹽和醋均相當(dāng)穩(wěn)定，該類農(nóng)藥通常具有以下通式: R2 RtOOC-N( CH3 其中， RJ幾乎都是苯環(huán)、稠環(huán)、雜環(huán)等基團，其起基化合物R10H往往呈弱酸性;凡是氫或者是一個易于被化學(xué)或生物方法斷裂的基團。大多數(shù)氨基甲酸醋

18、類的純品為元色和白色晶狀固體，易溶于多種有機溶劑中，但在水中溶解度較小，只有少數(shù)如涕滅威、滅多蟲等例外。氨基甲酸醋一般沒有腐蝕性，其貯存穩(wěn)定性很好，只是在水中能緩慢分解，提高溫度和堿性時分解加快。常見的氨基甲酸醋農(nóng)藥有甲荼威(C的町1)、戊氧威(Nitrilaearh)、映喃丹(C缸bofuran)、仲丁威( F enohuearh)、異丙威(Isoproe缸b)、速滅威( Metolearh)、殘殺威(Propoxur)、涕滅威(Aldiearh)、抗蜘威( Pirimiearh)、滅蟲威(Methioe町b)、滅多威(Me出omyl)、惡蟲威(Ben

19、dio-earh)、硫雙滅多威(Thiodiearh)、雙甲瞇(Amitraz)等。 這些氨基甲酸醋農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)與日常生活中，主要用作殺蟲劑、殺蠟劑、除草劑、殺軟體動物劑和殺線蟲劑等。20世紀(jì)70年代以來，由于有機氯農(nóng)藥受到禁用或限用，且抗有機磷農(nóng)藥的昆蟲品種日益增多，因而氨基甲酸醋的用量逐年增加，這就使得氨基甲酸醋的殘留情況備受關(guān)注O(二)氨基甲酸醋類農(nóng)藥殘留的測定GC一ECD法測定氨基甲酸醋類農(nóng)藥殘留與本節(jié)有機磷農(nóng)殘的氣相色譜測定方法相同， 詳見CB/T 17331-1998。四、擬除蟲菊醋類農(nóng)藥殘留及其檢測(一)擬除蟲菊醋的特性及常用品種擬除蟲菊醋(島re

20、throi也)是近年來發(fā)展較快的一類重要的合成殺蟲劑。擬除蟲菊醋分子較大，親脂性強，可榕于多種有機溶劑，在水中的溶解度小，在酸性條件下穩(wěn)定，在堿性條件下易分解。擬除蟲菊醋具有高效、廣譜、低毒和生物降解等特性，擬除蟲菊醋和除蟲菊醋殺蟲劑在光和土壤微生物的作用下易轉(zhuǎn)變成極性化合物，不易造成污染。擬除蟲菊醋在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有的共同特點之一是分子結(jié)構(gòu)中含有數(shù)個不對稱碳原子，因而包含多個光學(xué)和立體異構(gòu)體。這些異構(gòu)體又具有不同的生物活性，即使同一種擬除蟲菊醋，總醋含量相同，若包含的異構(gòu)體的比例不同，殺蟲效果也大不相同。常見的擬除蟲菊醋有烯丙菊醋(Allethrin)、膠菊酣( Tetramethr

21、in)、酷菊醋(E也of en-prox)、苯酷菊醋( Phenothrin)、甲酷菊醋(M蜘e拙由脅othri趾M芷盯mn豆III川)氯菊醋(陽Pennethrin血m削n川1)、氯氨菊醋 (Cype嚴(yán)ennet削h趾M恤E由mn豆III)、澳氧菊醋(Delt蛐劇et削h趾hri回mn臼n)、氧菊醋(何Fe呻n叩pro呻p皿削a撾甜削t怡e)、'殺螺菊醋(恤P凹Phen臼n町1 戊菊醋(何Fen盯V叫alerat愴e)、氟氧菊醋(何Flue州白n)、氟膠氧菊醋( Fluvalinate)、氟氧戊菊醋(Flueyth-m州、澳氟菊醋(&

22、#160;Brothrinate)等。 1973年第一個對光穩(wěn)定的擬除蟲菊醋苯一一釀菊醋開發(fā)成功之后，澳氨菊醋、氯氨菊醋 等優(yōu)良品種相繼問世。目前，己合成的菊醋數(shù)以萬計，迄今已商品化的擬除蟲菊醋有近40個品種，在全世界的殺蟲劑銷售額中占20左右。擬除蟲菊醋主要應(yīng)用在農(nóng)業(yè)上，如防治棉花、蔬菜和果樹的食葉和食果害蟲，特別是在有機磷、氨基甲酸醋出現(xiàn)抗藥性的情況下，其優(yōu)點更為明顯。除此之外，擬除蟲菊醋還作為家庭用殺蟲劑被廣泛應(yīng)用，它可防治蚊蠅、蟬嘟及牲畜寄生蟲等。(二)擬除蟲菊醋殘留的檢測參考本節(jié)中有機氯農(nóng)藥殘留的檢測，詳見GB/T 17332-1998。第四節(jié)食品中獸藥

23、殘留及其檢測吁一、獸藥殘留的種類與危害典型的獸藥是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。但是，隨著集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)的開展，一些化學(xué)的、生物的藥用成分被開發(fā)成具有某些功效的動物保健品或飼料添加劑，也屬于獸藥的范疇。獸藥的主要用途有防病治病、促進生長、提高生產(chǎn)性能、改善動物性食品的品質(zhì)等。獸藥殘留是指動物性產(chǎn)品的任何可食部分含有獸藥母化合物或其代謝物。獸藥最高殘留限量(MRLVD)是指某種獸藥在食物中或食物表面產(chǎn)生的最高允許獸藥殘留量(單位闖/峙，以鮮重計)。獸藥殘留主要是由于各種正常用藥和藥物濫用造成的。另外，休藥期(是指自停止給藥到動物獲準(zhǔn)屠宰或其動物性產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市的間隔時間)過短，是造成動物性食品獸

24、藥殘留過量的另一個重要原因。常見獸藥殘留的種類如下。1.抗生素類藥物這類藥物多為天然發(fā)酵產(chǎn)物，是臨床應(yīng)用最多的一類抗菌藥物，如青霉素類、氨基糖昔類、大環(huán)內(nèi)醋類、四環(huán)素類、螺旋霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等。青霉素類最容易引發(fā)超敏反應(yīng)，四環(huán)素類、鏈霉素有時也能引起超敏反應(yīng)。輕至中度的超敏反應(yīng)一般表現(xiàn)為短時間內(nèi)出現(xiàn)血壓下降、皮彥、身體發(fā)熱、血管神經(jīng)性水腫、血清病樣反應(yīng)等，極度超敏反應(yīng)可能導(dǎo)致過敏性休克甚至死亡。長期攝入含氨基糖昔類殘留超標(biāo)的動物性食品，可損害聽力及腎臟功能。2.磺膠類藥物 主要用于抗菌消炎，如磺膠暗臟、磺膠二甲暗臟、磺膠瞇、菌得清、新諾明等。近年來，磺膠類藥物在動物性食品

25、中的殘留超標(biāo)現(xiàn)象，在所有獸藥當(dāng)中是最嚴(yán)重的。長期攝人含磺膠類藥物殘留的動物性食品后，藥物可不斷在體內(nèi)蓄積?；悄z類藥主要以原形及乙酸磺膠的形式經(jīng)腎臟排出，在尿中濃度較高，其溶解度又較低，尤其當(dāng)尿液偏酸性時，可在腎孟、輸尿管或膀脫內(nèi)析出結(jié)晶，產(chǎn)生剌激和阻塞，造成泌尿系統(tǒng)損傷，引起結(jié)晶尿、血尿、管型尿、尿痛、尿少甚至尿閉。3.硝基吱喃類藥物 主要用于抗菌消炎，如映喃瞠酣、映喃西林、吱喃妥因等。通過食品攝人超量硝基映喃類殘留后，對人體造成的危害主要是胃腸反應(yīng)和超敏反應(yīng)。劑量過大或腎功能不全者，可引起嚴(yán)重毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為周圍神經(jīng)炎、嗜酸性白細(xì)胞增多、溶血性貧血等。長期攝人可引起不可逆性末端

26、神經(jīng)損害，如感覺異常、疼痛及肌肉萎縮等，我國尚未制定硝基映喃類藥物殘留檢測國家標(biāo)準(zhǔn)。4.抗寄生蟲類藥物 這類藥物主要用于驅(qū)蟲或殺蟲，如苯并瞇瞠、左旋瞇瞠、克球酣、日比喳酣等。而常用的苯并瞇嗤類抗寄生蟲藥物有丙硫苯咪瞠、丙氧瞇瞠、唾苯咪略、甲苯咪哇、丁苯咪嗖等。食用殘留有苯并咪嗖類藥物的動物性食品，對人主要的潛在危害是致畸作用和致突變作用。對于娃振期的孕婦有可能發(fā)生胎兒畸形，如短肢、兔唇等;對所有消費者來說，可能由于其致突變作用使消費者發(fā)生癌變和性染色體畸變，從而其后代有發(fā)生畸形的危險。5.激素類藥物 這類藥物主要用于提高動物的繁殖和加快生長發(fā)育速度，使用于動物的激素有性激素

27、和皮質(zhì)激素，而以性激素(包括多種內(nèi)源性性激素、人工合成的類似性激素的類固醇化合物、人工合成的具有性激素某些特性的非類固醇化合物)最常用，如孕酣、辜酣、雌二醇、甲基辜嗣、丙酸辜酣、苯甲酸雌二醇、己烯孕酣等。正常情況下，動物性食品中天然存在的性激素含量是很低的，因而不會干擾消費者的激素代謝和生理機能。但攝入性激素殘留超標(biāo)的動物性食品，可能會影響消費者的正常生理機能，并具有一定的致癌性，可能導(dǎo)致兒童早熟、兒童發(fā)育異常、兒童異性趨向等。二、獸藥殘留檢測舉例(一) HPLC法測定肉中四環(huán)素類藥物殘留1.原理樣品經(jīng)提取，微孔濾膜過濾后直接進樣，用反相色譜分離，紫外檢測器檢測，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。2.

28、混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別吸取1.0 mg/mL土霉素、四環(huán)素的稀鹽酸溶液各1mL， 1.0 mglmL金霉素水溶液2mL，置lOmL容量瓶中，加蒸館水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環(huán)素各0.1噸，金霉素0.2mg，臨用現(xiàn)配。3.樣品處理 稱取5 g切碎的肉樣« 5 mm)，置于50mL三角燒瓶中，加入5高氯酸25mL，振蕩提取10 min， 2棚內(nèi)m離心3 min，上清液經(jīng)0.45陽濾膜過濾，取10µm濾液注人回'LC。4.HPLC條件 檢測器:紫外檢

29、測器，波長為355nm;色譜柱:0DS C18， 5µII盹I流動相:乙臘:0.01 moVIL磷酸二氫鈾溶液(用3細(xì)0硝酸調(diào)P盧H 2.5引) = 3貨5:6臼5(體積比); 流速:1.0mLImin;柱溫:室溫。(二) GC-E法測定食品中硝基映喃瞠酣殘留1.原理將樣品用乙酸乙醋抽提、濃縮后，溶于異丙醇，加人稀鹽酸，加熱分解，所得的5-硝基吱喃醒用弗羅里硅柱精制后，用GC測定。2.標(biāo)準(zhǔn)溶液及處理 取純5-硝基映喃醒用含內(nèi)標(biāo)物七氯( Heptachlorodicyclopentadi

30、ene)的苯榕液(約10鳴/mL)配成10 - 1000 flglmL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.樣品處理 稱取10.0 g切碎均勻的樣品，加入8.0 g氯化鈾、15mL 2偏磷酸溶液，均質(zhì)。裝人50mL離心管，加人lOmL正己燒，振蕩2 min后， 3000r/min離心5 min，棄去上層己燒。下層加入10mLx 3乙酸乙醋，振搖，離心，合并乙酸乙醋層，濃縮近干，用lOmL異丙醇溶解殘渣，加入20此， 1 moVL鹽酸，70't水浴中反應(yīng)25 min，立即

31、冷卻，移入分液漏斗中，用15mLx3苯振蕩抽提，濃縮抽提液至約2mL，上弗羅里硅土層析柱，用30mL乙酸乙醋-苯(5:95) 混合液洗脫。洗脫液濃縮至干，殘渣用內(nèi)標(biāo)物七氯的苯溶液(約10 ng/mL)溶解，定容至1. mL，供氣相色譜分析。4.CC條件 檢測器:Ni電子捕獲檢測器;色譜柱:玻璃柱15 m x 3 mm，內(nèi)填充EGSS - X Chromosorb W;溫度:柱溫190't，進樣口溫度190't，檢測器為220"C。第五節(jié)食品中霉菌毒素及其檢測一

32、、霉菌毒素的種類霉菌是一些絲狀真菌的通稱，在自然界分布很廣，幾乎無處不有，主要生長在不通風(fēng)、陰暗、潮濕和溫度較高的環(huán)境中。霉菌可非常容易地生長在各種食品上并產(chǎn)生危害性很強的霉菌毒素。目前已知的霉菌毒素約有2余種，與食品關(guān)系較為密切的有黃曲霉毒素、插曲霉毒素、雜色曲霉素、島青霉素、黃天精、桔青霉素、展青霉素、單端于包霉素類、玉米赤霉烯酣、丁烯酸內(nèi)醋等。己知有5種毒素可引起動物致癌，它們是黃曲霉毒素(磯、G1、M1)、黃天精、環(huán)氯素、雜色曲霉素和展青霉素。霉菌污染食品可使食品的食用價值降低，甚至使之完全不能食用，造成巨大的經(jīng)濟損失。據(jù)統(tǒng)計全世界每年平均有2的谷物由于霉變不能食用。霉菌毒素引起的中毒

33、大多通過被霉菌污染的糧食、油料作物以及發(fā)酵食品等引起。霉菌毒素多數(shù)有較強的耐熱性，一般的烹調(diào)加熱方法不能使其破壞。當(dāng)人體攝人的霉菌毒素量達到一定程度后，可引起中毒。霉菌中毒往往表現(xiàn)為明顯的地方性和季節(jié)性，臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，有急性中毒、慢性中毒以及致癌、致畸和致突變等。食品中常見的幾類霉菌毒素如下。1.黃曲霉毒素黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡寫為AFf)是黃曲霉菌和寄生曲霉菌的代謝產(chǎn)物。目前已發(fā)現(xiàn)的卻多種A町均為二映喃香豆素的衍生物。根據(jù)其在波長365nm紫外光下呈現(xiàn)不同顏色的熒光，可分成B(藍紫色熒光)和G(黃綠色熒光)兩大組;又根據(jù)其Rf值不同，分為Bl、民、G1、G2、Ml、Mz等。人

34、及動物攝入黃曲霉毒素Bl和民后，在乳汁和尿中可檢出其代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素Ml和Mz。黃曲霉毒素在水中的榕解度很低，易溶解在油和一些有機溶劑中，如氯仿、甲醇、乙醇等，但不溶于乙醋、石油醋、己燒。黃曲霉毒素耐熱， 1't， 20 h也不能將其全部破壞，在普通烹調(diào)加工的溫度下破壞很少，在280't時發(fā)生裂解。其結(jié)構(gòu)式都有一內(nèi)醋環(huán)，內(nèi)醋環(huán)被打開則熒光消失，毒性消除。在水溶液中，毒素的內(nèi)醋環(huán)很容易與氧化劑起反應(yīng)，特別是與堿性試劑反應(yīng)，可部分水解為酣式化合物。在各種黃曲霉毒素中以黃曲霉毒素Bj的毒'性最強，污染最廣泛。黃曲霉毒素Bj可誘發(fā)人類肝癌，對肝癌

35、高發(fā)區(qū)人們的膳食進行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，膳食中黃曲霉毒素的污染水平與人類原發(fā)性肝癌的發(fā)病率呈很強的正相關(guān)。因此，在食品衛(wèi)生監(jiān)測中，主要以黃曲霉毒素Bj為污染指標(biāo)。世界各國的農(nóng)產(chǎn)品普遍遭受過黃曲霉毒素的污染，黃曲霉毒素在食品中的污染大大地超過其他幾種霉菌毒素的總和。主要污染的品種是糧油及其制品，如花生、花生油、玉米、大米及棉籽等。2.插曲霉毒素 插曲霉毒素是分子結(jié)構(gòu)類似的一組化合物，包括插曲霉毒素A， B， C， D和，是曲霉屬和青霉屬的某些菌種的次生代謝產(chǎn)物，是谷物、大豆、咖啡豆和可可豆的常見污染物，其中插曲霉毒素A是該類毒素的代表化合物。插曲霉毒素A微溶于水，易

36、擂于極性溶劑和稀的碳酸氫納水榕液，耐熱，穩(wěn)定性強，在紫外光下呈綠色熒光。插曲霉毒素A的毒性較強，接近黃曲霉毒素Bj，主要損傷腎臟。在巴爾干地方性腎病流行地區(qū)， 6 - 189毛人群的血液中能檢出插曲霉毒素Ao 1993年國家癌癥研究機構(gòu)認(rèn)為插曲霉毒素A同時也是一種具有免疫抑制功能、神經(jīng)毒'性以及致癌、致畸形的物質(zhì)。3.展青霉毒素 展青霉毒素是多種真菌的有毒代謝產(chǎn)物，其分子式為CgHS03，該物質(zhì)一方面是一種廣譜的抗生素，另一方面對小鼠、兔子等試驗動物具有較強的毒性。其污染食品和飼料后產(chǎn)生的毒性遠(yuǎn)大于其抗菌作用。容易污染食品和飼料并產(chǎn)生展

37、青霉素的真菌主要有棉麻青霉、擴展青霉、棒曲霉、巨大曲霉、雪白絲衣霉等。展青霉素還能夠?qū)μO果及其制品造成嚴(yán)重污染， 1989 - 1990年，中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院等單位對我國水果制品展青霉素的污染情況進行調(diào)查的結(jié)果顯示:水果制品的原汁、原醬等半成品展青霉素的檢出率達76.9，含量為18 - 953µgI嶼，水果制品的成品展青霉素的檢出率達19.6，含量為4- 262µglkg。高劑量的展青霉素對大鼠的腎及胃腸系統(tǒng)有毒性作用，也有致癌、致畸形的作用。目前，已有十幾個國家制定了水果及其制品中展青霉素的限量標(biāo)準(zhǔn)。我國GB&#

38、160;14974-1994中規(guī)定，蘋果和山植半成品中展青霉素的最高限量標(biāo)準(zhǔn)為1µglkg，果汁、果醬、果脯、果酒和糖果類中展青霉素的最高限量標(biāo)準(zhǔn)為50周Ikg，尚未制定國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。4.單端抱霉烯族化合物 單端抱霉烯族化合物是一組由鐮刀菌的某些菌種(主要有三線鐮刀菌、擬校子包鐮刀菌、梨抱鐮刀菌、木賊鐮刀菌、禾谷鐮刀菌、黃色鐮刀菌)產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物。鐮刀菌屬的菌種廣泛分布于自然界，主要侵害的谷物有玉米、小麥、大米、燕麥、大麥等。到目前為止，已分離鑒定出148種單端抱霉烯族化合物，其中污染谷物和飼料的主要有脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、雪腐鐮刀菌烯醇、二乙酸熏草鐮刀菌烯

39、醇、T-2毒素等。該類化合物為元色結(jié)晶，難溶于水，溶于有機溶劑，非常穩(wěn)定，在烹飪加工過程中很少被破壞，紫外光下元熒光。該組化合物的主要毒性表現(xiàn)在細(xì)胞毒性、免疫抑制和致畸、致癌作用。關(guān)于單端抱霉烯族化合物造成的食物中毒在國內(nèi)外已有多起報道，主要癥狀是惡心、嘔吐、頭痛、腹痛、腹瀉等。5.玉米赤霉烯酣 玉米赤霉烯酬也稱F-2毒素。鐮刀菌屬的多個菌種如禾谷鐮刀菌、三線鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、半裸鐮刀菌、木賊鐮刀菌、黃色鐮刀菌、茄病鐮刀菌、串珠鐮刀菌等都可以產(chǎn)生該毒素。這些菌廣泛存在于土壤、空氣及污染的谷物中，主要污染玉米，也污染大麥、小麥、燕麥等。玉米的陽性檢出率可達45，最高含毒量可達2歸9&

40、#160;mgl嶼，小麥的陽性檢出率可達20，含毒量為0.36 - 11.05 mglkg。 玉米赤霉烯酣對動物的急'性毒'性很小。該化合物具有雌激素樣的作用，主要作用于生殖系統(tǒng)，可引起陰道和乳腺腫脹、流產(chǎn)、畸胎、死胎等。對玉米赤霉烯酣的最高限量很多國家已制定了標(biāo)準(zhǔn)，如巴西規(guī)定玉米中不超過2µglkg，羅馬尼亞規(guī)定所有食品中不超過30問Ikg，我國尚未制定限量。 6.雜色曲霉素 雜色曲霉素主要是由雜色曲霉、構(gòu)巢曲霉、皺裙曲霉、黃褐曲霉、四脊曲霉等產(chǎn)生，主要污染玉米、花生、大米、小麥等。雜色曲霉素與黃曲霉素Bj

41、相似，也具有二映喃雜氧惠酣結(jié)構(gòu)，研究證實雜色曲霉素可以轉(zhuǎn)換為黃曲霉素Bj。雜色曲霉素的分子式為Cj8H1206，淡黃色結(jié)晶，熔點246'C，不溶于水、氫氧化鈾或碳酸納水溶液，易溶于氯仿、乙氧、苯等有機溶劑。紫外燈下有暗磚紅色熒光。雜色曲霉素是一種毒性很強的肝及腎臟毒素。肝癌高發(fā)區(qū)居民所食用的食物中雜色曲霉素的污染也較為嚴(yán)重。食品中雜色曲霉素的測定參見GB/T 5.25一1996，該標(biāo)準(zhǔn)采用的是薄層色譜法，噴三氯化鋁顯色，加熱后，紫外光下觀察。7.棒曲霉素 棒曲霉素主要是由棒曲霉、土曲霉、擴展青霉和草麻曲霉等產(chǎn)生的內(nèi)醋代謝物，可污染谷物、豆類及水果等，是食品和飼料的有

42、毒污染物。對許多生物系統(tǒng)都有毒害作用，小白鼠口服山到為0.7 mgl嶼，也有致畸、致癌作用。我國尚未制定限量或國家級標(biāo)準(zhǔn)測定方法。8.島青霉毒素 島青霉毒素是由島青霉產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，島青霉為青霉屬。島青霉類毒素包括黃天精、環(huán)氯素、島青霉毒素、紅天精等，并己證實黃天精和環(huán)氯素有致癌作用。國外報道的"黃變米"主要含有青霉屬，最常分離的霉菌有黃綠青霉、島青霉和情青霉等。"黃變米"是由于稻谷收割后，貯存中含水分過高，被霉菌污染后發(fā)生霉變所致，因為霉變呈黃色，故稱"黃變米"。9.其他霉菌毒素 串珠鐮刀菌毒素、伏馬菌素(主要是FBj)這兩種毒素都可由串珠鐮刀菌產(chǎn)生，兩者皆為水溶'性化合物，都有強烈的毒性。前者主要危害心肌，后者對不同試驗動物表現(xiàn)不同的毒性作用，對馬表現(xiàn)為神經(jīng)毒性，對羊表現(xiàn)為肝腎病變，對豬表現(xiàn)為肺水腫癥候等。3-硝基丙酸是霉變甘震中節(jié)菱抱霉產(chǎn)生的主要毒性物質(zhì)，是儲運過程中甘煎霉變中毒 的優(yōu)勢毒素。變質(zhì)甘震中毒在我國北方地區(qū)常有發(fā)生，癥狀為嘔吐、眼球偏側(cè)凝視、陣發(fā)性抽擂，