抗原抗體反應(yīng)的原理PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1抗原抗體反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng)的原理第1頁(yè)/共50頁(yè) 第一節(jié)第一節(jié) 免疫學(xué)技術(shù)的范疇與應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)的范疇與應(yīng)用一、免疫學(xué)技術(shù)的范疇二、免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用特點(diǎn)第2頁(yè)/共50頁(yè)免疫學(xué)技術(shù)的范疇免疫學(xué)技術(shù)的范疇1、對(duì)具有免疫活性物質(zhì)的定性、 定量測(cè)定2、對(duì)免疫系統(tǒng)的組成成分的數(shù)量、 狀態(tài)的測(cè)定第3頁(yè)/共50頁(yè) 免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用特點(diǎn)免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用特點(diǎn)1、對(duì)象“包羅萬(wàn)象”2、方法“兼容并蓄”第4頁(yè)/共50頁(yè) 第二節(jié)第二節(jié) 有關(guān)免疫學(xué)基本概念有關(guān)免疫學(xué)基本概念一、抗原的概念與屬性二、免疫細(xì)胞的概念與分類(lèi)三、免疫應(yīng)答的概念與過(guò)程第5頁(yè)/共50頁(yè)免疫原性免疫原性可識(shí)別、可反應(yīng)性（誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答

2、的特性）免疫反應(yīng)性免疫反應(yīng)性 選擇結(jié)合性（和免疫應(yīng)答產(chǎn)物特異性結(jié)合的特性）抗原的概念與屬性抗原的概念與屬性第6頁(yè)/共50頁(yè)免疫細(xì)胞的概念與分類(lèi)免疫細(xì)胞的概念與分類(lèi)免疫細(xì)胞（免疫細(xì)胞（Immune cellsImmune cells） 泛指所有參與免疫應(yīng)答及與免疫應(yīng)答活動(dòng)相關(guān)的細(xì)胞。免疫活性細(xì)胞（免疫活性細(xì)胞（Immune competent cellImmune competent cell，ICCICC） 能夠接受抗原刺激、產(chǎn)生特異性的活化、增殖、分化并形成效應(yīng)產(chǎn)物的淋巴細(xì)胞。第7頁(yè)/共50頁(yè) 免疫細(xì)胞的類(lèi)型免疫細(xì)胞的類(lèi)型 紅細(xì)胞 血小板 肥大細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 樹(shù)突狀細(xì)胞 漿細(xì)胞

3、T細(xì)胞 NK細(xì)胞第8頁(yè)/共50頁(yè)免疫應(yīng)答的概念與過(guò)程免疫應(yīng)答的概念與過(guò)程免疫應(yīng)答（免疫應(yīng)答（immune response） 免疫系統(tǒng)接觸抗原后，免疫細(xì)胞對(duì)抗原進(jìn)行識(shí)別；并使特異性淋巴細(xì)胞活化、增殖；表現(xiàn)出免疫效應(yīng)的過(guò)程。免疫應(yīng)答的階段免疫應(yīng)答的階段1、抗原識(shí)別階段（antigen-recognizing phase）2、淋巴細(xì)胞活化階段（lymphocyte-activating phase） 3、抗原清除階段（antigen-eliminating phase）第9頁(yè)/共50頁(yè) 第三節(jié)第三節(jié) 抗原抗體反應(yīng)的基本原理抗原抗體反應(yīng)的基本原理一、抗原抗體反應(yīng)的原理二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)三、影響抗

4、原抗體反應(yīng)的因素第10頁(yè)/共50頁(yè)抗原抗體反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng)的原理1、抗原抗體結(jié)合的作用力2、抗原抗體結(jié)合物析出原因第11頁(yè)/共50頁(yè)引起抗原抗體結(jié)合的作用力引起抗原抗體結(jié)合的作用力1、電荷引力（庫(kù)侖引力）2、電子云引力（Van der Waals力）3、氫鍵結(jié)合力4、疏水作用力第12頁(yè)/共50頁(yè)抗原抗體結(jié)合物析出的原因抗原抗體結(jié)合物析出的原因析出+ + + + + + + + + + + + 電解質(zhì)+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 第13頁(yè)/共50頁(yè) 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反

5、應(yīng)的特點(diǎn)1、特異性2、可逆性3、適合比例性第14頁(yè)/共50頁(yè)特異特異性性抗原A抗原C抗原B特異性反應(yīng)交叉反應(yīng)無(wú)反應(yīng)第15頁(yè)/共50頁(yè)可逆可逆性性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAg Ab第16頁(yè)/共50頁(yè)適合比例性適合比例性抗體含量抗原含量前帶后帶等價(jià)帶第17頁(yè)/共50頁(yè)網(wǎng)格學(xué)說(shuō)網(wǎng)格學(xué)說(shuō)（lattice theory）抗體過(guò)剩抗原過(guò)?？贵w抗體比例合適第18頁(yè)/共50頁(yè) 抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)的影響因素1、電解質(zhì)2、酸堿度（pH值6-8）3、溫度（37-42。C）第19頁(yè)/共50頁(yè) 第四節(jié)第四節(jié) 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的評(píng)價(jià)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的評(píng)價(jià)一、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 二、特異性與敏感性的關(guān)系第20頁(yè)/共50

6、頁(yè)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Specificity（特異）Sensitivity（敏感）Simplicity（簡(jiǎn)便）Safety（安全）Saving（節(jié)約）第21頁(yè)/共50頁(yè)特異性與敏感性的關(guān)特異性與敏感性的關(guān)系系特異性高、敏感性低 敏感性高、特異性低第22頁(yè)/共50頁(yè)第23頁(yè)/共50頁(yè) 第一節(jié)第一節(jié) 抗原抗原/ /免疫原制備的基本概念免疫原制備的基本概念一、抗原制備的目的二、抗原的“純度”三、抗原制備的主要技術(shù)途徑第24頁(yè)/共50頁(yè)抗原制備的目的抗原制備的目的免疫原：激活T、B細(xì)胞半抗原：檢測(cè)相應(yīng)抗體第25頁(yè)/共50頁(yè)抗原的抗原的“純度純度”免疫原：保留足夠的可被T、B細(xì)胞 識(shí)別的抗原決定簇半抗原：盡

7、可能減少影響反應(yīng)特異 性的抗原決定簇第26頁(yè)/共50頁(yè)抗原制備的主要技術(shù)途徑抗原制備的主要技術(shù)途徑天然抗原分離、純化半抗原人工合成、載體聯(lián)接抗原肽 合成、基因工程制備第27頁(yè)/共50頁(yè) 第二節(jié)第二節(jié) 完全抗原完全抗原/ /免疫原的制備方法免疫原的制備方法一、顆粒性抗原的制備二、可溶性抗原的制備第28頁(yè)/共50頁(yè)顆粒性抗原的制備顆粒性抗原的制備1、采集、分離抗原2、無(wú)害化處理第29頁(yè)/共50頁(yè)可溶性抗原的制備與純化可溶性抗原的制備與純化1、處理與粉碎2、蛋白質(zhì)分離3、單一組分提取4、抗原純度鑒定 第30頁(yè)/共50頁(yè)處理與粉碎處理與粉碎組織粉碎：機(jī)械、生物 細(xì)胞破碎：物理、化學(xué)、生物 第31頁(yè)/共

8、50頁(yè)蛋白質(zhì)分離蛋白質(zhì)分離選擇性沉淀：鹽析 有機(jī)溶劑沉淀 水溶性非離子型聚合物沉淀 透析技術(shù)：超濾技術(shù)： 第32頁(yè)/共50頁(yè)單一組分提取單一組分提取層析技術(shù)：凝膠過(guò)濾 離子交換 親和層析 離心技術(shù)：差速離心 密度梯度離心電泳技術(shù)：電泳洗脫 等電聚焦第33頁(yè)/共50頁(yè)凝膠層析（分子篩）凝膠層析（分子篩）第34頁(yè)/共50頁(yè)離子交換層析離子交換層析+第35頁(yè)/共50頁(yè)親和層析親和層析第36頁(yè)/共50頁(yè)抗原純度鑒定抗原純度鑒定方法：層析性質(zhì)測(cè)定 電泳法 免疫法指標(biāo)：電泳純 免疫純第37頁(yè)/共50頁(yè) 第三節(jié)第三節(jié) 半抗原免疫原制備的方法半抗原免疫原制備的方法一、載體的選擇二、半抗原與載體的聯(lián)接第38頁(yè)/

9、共50頁(yè)載體的選擇載體的選擇蛋白質(zhì)載體：BSA、HAS、OVA、KLH聚合多肽載體：多聚賴氨酸高分子聚合物載體：PVP、羧甲基纖維素第39頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體的聯(lián)接半抗原與載體的聯(lián)接1、連接方式：物理法（吸附） 化學(xué)法2、化學(xué)連接方法： 直接聯(lián)接法： 間接聯(lián)接法：第40頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體直接聯(lián)接半抗原與載體直接聯(lián)接碳化二亞胺法碳化二亞胺法蛋白質(zhì)-COO + R-N+=CN-R H-N+-R蛋白質(zhì)-COO-C-NH-R + 半抗原-NH2 O蛋白質(zhì)-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R第41頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體直接聯(lián)接半抗原與載體直接聯(lián)接 戊二醛法戊二醛法蛋白質(zhì)- NH2

10、 + 半抗原-NH2 + COH-（CH2 ） 3 - COH蛋白質(zhì)-N=CH-（CH2 ） 3 CH=N-半抗原第42頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體直接聯(lián)接半抗原與載體直接聯(lián)接 氯甲酸異丁酯法氯甲酸異丁酯法半抗原-COOH + Cl-COO-CH2 CH（CH3）2 O O半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白質(zhì)- NH2 半抗原-CO- NH -蛋白質(zhì) + HO-CH2CH（CH3）2 第43頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體間接聯(lián)接半抗原與載體間接聯(lián)接琥珀酸酐法琥珀酸酐法 O O半抗原-CH2 OH + C-O-C CH3 CH3 O半抗原-CH2 O-C-(CH2 ) 2-COOH第

11、44頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體間接聯(lián)接半抗原與載體間接聯(lián)接O-（羥甲基）羥胺法（羥甲基）羥胺法半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH 半抗原-C=N-O- CH2 - COOH 第45頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體間接聯(lián)接半抗原與載體間接聯(lián)接一氯醋酸鈉法一氯醋酸鈉法半抗原- - OH + Cl- CH2 - COONa半抗原- - CH2 - COOH 第46頁(yè)/共50頁(yè)半抗原與載體間接聯(lián)接半抗原與載體間接聯(lián)接重氮化的對(duì)氨基苯甲酸法重氮化的對(duì)氨基苯甲酸法HOOC- -NH2 + NaNO2 HOOC- -N=N半抗原- - OH + HOOC- -N=N半抗原- -N=N- -COOH OH