食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)培訓(xùn)課件

1、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)培訓(xùn) 大腸菌群計(jì)數(shù) 衛(wèi)生學(xué)概念，包括埃希氏菌屬，克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬等的細(xì)菌檢驗(yàn)比較簡(jiǎn)單，所以被廣泛用做水源的衛(wèi)生指標(biāo)和食品加工衛(wèi)生狀況的通用指標(biāo)大腸菌群定義：一群在36條件下培養(yǎng)2448小時(shí)能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。第一法 MPN法第二法 平板計(jì)數(shù)法第三法 Petrifilm測(cè)試片法大腸菌群計(jì)數(shù)大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 與原4789.3的不同l 操作步驟不同原方法初發(fā)酵EMB分離培染色，復(fù)發(fā)酵報(bào) 告現(xiàn)方法LST初發(fā)酵BGLB驗(yàn)證報(bào) 告EMB分離培養(yǎng)大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 與原4789.3的不同l 初發(fā)酵培養(yǎng)基不同原方法

2、：乳糖膽鹽肉湯現(xiàn)方法：月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯LST肉湯 是國(guó)際上通用的培養(yǎng)基。與乳糖膽鹽肉湯的作用和意義相同，但具有更多的優(yōu)越性，LST中的選擇性抑菌劑是月桂基硫酸鹽，相對(duì)于膽鹽穩(wěn)定性更好些。 還有就是LST更容易觀察。大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 與原4789.3的不同l 結(jié)果報(bào)告單位不同原方法： MPN / 100g(mL)現(xiàn)方法： MPN / g(mL)大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 與原4789.3的不同l 給出的MPN表不同l 標(biāo)準(zhǔn)名稱不同 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 6 操作步驟6.1 樣品的稀釋6.1.1 固體和半固體食品：以

3、無(wú)菌操作取25g）樣品,放入裝有225 mL生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi),于8000 r/min均質(zhì)1min2min,制成1:10樣品勻液，或放入225 mL生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用均質(zhì)器拍打1min2min，制成1:10的樣品勻液。6.1.2 液體食品：以無(wú)菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無(wú)菌玻璃瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)中,以30cm幅度、于7s內(nèi)振搖25次(或以機(jī)械振蕩器振搖),制成1:10的樣品勻液。6.1.3 樣品勻液的pH值應(yīng)在6.57.5之間，必要時(shí)分別用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl予以調(diào)節(jié)。 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 6 操作步驟6.1 樣品的

4、稀釋6.1.4 用1mL無(wú)菌吸管或移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入裝有9mL生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管尖端不要觸及液面），振搖試管或換用1支1mL無(wú)菌吸管反復(fù)吹打35次，或采用振蕩器使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。 6.1.5 根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì),按上述操作，依次制成系列十倍系列樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無(wú)菌吸管。從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過(guò)程不得超過(guò)15min。 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 6 操作步驟6.2 初發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 對(duì)每個(gè)樣品，選擇適宜的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品勻液，液體樣品可以包括未經(jīng)稀釋的原液，每個(gè)稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LS

5、T）肉湯，每管接種1mL（如接種量需要超過(guò)1mL，則用雙料LST肉湯）。361培養(yǎng)24h2h，檢查倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生或輕搖試管時(shí)是否有密集連續(xù)的細(xì)小氣泡從管底逸出，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h2h。記錄在24h和48h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管數(shù)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性；對(duì)產(chǎn)氣者，則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。 用直徑為3mm的接種環(huán)從所有48h2h內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中，置361溫箱內(nèi)，培養(yǎng)48h2h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽(yáng)性管。 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 6 操作步驟6.3 復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 根據(jù)大腸菌

6、群陽(yáng)性管數(shù), 查MPN檢索表，報(bào)告每 g (mL)樣品中大腸菌群的MPN值 。 經(jīng)過(guò)和標(biāo)準(zhǔn)起草人溝通，此方法標(biāo)準(zhǔn)的單位可以乘以100，最終報(bào)出MPN/100g(100mL)。大腸菌群計(jì)數(shù)：第一法 6 操作步驟6.4 結(jié)果報(bào)告1g(mL)檢樣中最大可能數(shù)（MPN）表-4201100333948.7272124,1001801100233424.5201122,00090460133423.7150121,00042240033424.5202021,00090290323423.61410243040210223381.49.200242037150123424.5160314201893023

7、424.51512142040160313423.61102142037120213383.6111112001775113201.37.4011180943013383.6112011801764203181.37.21011108.738103180.173.6001944.623003383.69.4030948.736132181.26.2020948.729032181.26.1110948.735222110.153.0010948.7281229.60.153.0100424.5210229.5-3.0000高低0.0010.010.10高低0.0010.010.1095%置信區(qū)間MPN陽(yáng)性管數(shù)95%置信區(qū)間MPN陽(yáng)性管數(shù)現(xiàn)國(guó)標(biāo)的MPN表與原國(guó)標(biāo)的MPN表的不同點(diǎn)：1，現(xiàn)表里的數(shù)字是有小數(shù)點(diǎn)的，而原標(biāo)準(zhǔn)對(duì)小數(shù)點(diǎn)進(jìn)行了四舍五入的處理。2，現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的MPN表比原標(biāo)準(zhǔn)的MPN表要簡(jiǎn)化一些。原標(biāo)準(zhǔn)MPN表有64個(gè)組合，而現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)MPN表只有40個(gè)組合。3，報(bào)告單位不同?，F(xiàn)報(bào)告單位為MPN/g(mL) ，而原報(bào)告單位是MPN/100g(100mL)。第二法 平板計(jì)數(shù)法平板計(jì)數(shù)法以經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的試管百分比乘以計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g(mL)樣品中大腸菌群數(shù)。但由于相應(yīng)的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)單位現(xiàn)仍以MPN/1