(臨床醫(yī)學(xué))尿液微量蛋白檢測的臨床意義課件

1、尿液微量蛋白檢測和臨床意義蔡曉平艾 迪 康 醫(yī) 學(xué) 檢 驗 中 心第1頁，共48頁。 第2頁，共48頁。“五項”還是“六項” 過敏原4 項目清楚：“定性”還是“定量”最好能寫出單個項目名稱！第3頁，共48頁。 HPV檢測 ： HPV6-11、HPV16-18需要取2管分泌物標(biāo)本C肽/胰島素釋放試驗 ： 需要抽5管血5標(biāo)本少送：第4頁，共48頁。主要內(nèi)容尿微量白蛋白尿IgG尿2微球蛋白尿轉(zhuǎn)鐵蛋白尿1微球蛋白尿視黃醇結(jié)合蛋白第5頁，共48頁。分子量：69000分子直徑：3.6nmPI:4.9腎小球濾過膜：不濾過腎小管重吸收：少量 一、尿微量白蛋白 理化性質(zhì)：第6頁，共48頁。分子量：77000分子

2、直徑：3.8nmPI:5.2腎小球濾過膜：不濾過腎小管重吸收：少量 二、尿轉(zhuǎn)鐵蛋白 理化性質(zhì)：第7頁，共48頁。分子量：150000分子直徑：10-50nmPI:5.8-7.2腎小球濾過膜：不濾過腎小管重吸收：少量 三、尿免疫球蛋白IgG 理化性質(zhì)：第8頁，共48頁。分子量：11800分子直徑：3.4-3.8nmPI:4.9腎小球濾過膜：自由濾過腎小管重吸收：幾乎全部 四、尿2微球蛋白 理化性質(zhì)：第9頁，共48頁。分子量：26000-33000分子直徑：3.6nmPI:3.6-4.4腎小球濾過膜：自由濾過腎小管重吸收：99.9 五、尿1微球蛋白 理化性質(zhì)：第10頁，共48頁。分子量：21000

3、分子直徑：3.8nmPI:4.4-4.8腎小球濾過膜：自由濾過腎小管重吸收：95-99 六、尿視黃醇結(jié)合蛋白 理化性質(zhì)：第11頁，共48頁。 尿微量蛋白的檢測方法傳統(tǒng)測定微量蛋白的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)等,其檢測精度較差,操作繁雜。免疫散射比濁法操作簡便,測量精度較高,結(jié)果更準(zhǔn)確,但是必須使用特定蛋白分析儀,儀器和試劑昂貴，給使用帶來一定的影響，而透射比濁法則可用于各種自動化分析儀，具有速度快、省試劑、適于批量檢測的優(yōu)點為臨床上高血壓和糖尿病腎損害的早期診斷提供了一個更為快速、簡便的方法。第12頁，共48頁。 免疫透射比濁法原理： 利用抗原（白蛋白）和特

4、異性抗體（羊抗人白蛋白抗血清）相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液產(chǎn)生混濁，其濁度高低即透光度減少、吸光度增加反映血清樣本中白蛋白的濃度，可由校準(zhǔn)品所作的濃度吸光度相應(yīng)曲線算出。第13頁，共48頁。 免疫透射比濁法影響免疫比濁測定的主要因素抗原、抗體比例與濁度關(guān)系：抗原過量，出現(xiàn)“帶現(xiàn)象”，IC分子小，且可發(fā)生再解離，濁度下降，光散射減少?？贵w過量，IC形成隨抗原量增加到抗原抗體最適比例時達(dá)高峰?？贵w須過量但又必須適量，抗體濃度是測定關(guān)鍵。 第14頁，共48頁。 免疫透射比濁法影響免疫比濁測定的主要因素 抗體質(zhì)量：特異性、效價、親和力、R型抗體 高親和性抗體的抗原結(jié)合點與抗原表位的空間構(gòu)型上

5、非常適合，兩者結(jié)合牢固，不容易解離。反之，低親和性抗體與抗原形成的復(fù)合物較易解離。 第15頁，共48頁。 免疫透射比濁法影響免疫比濁測定的主要因素 R型抗體以家兔免疫血清為代表，具有較寬的抗原抗體合適比例范圍，只在抗原過量時，才易出現(xiàn)溶性免疫復(fù)合物，大多數(shù)動物的免疫血均屬此型。 H型抗體以馬免疫血清為代表，其抗原與抗體的合適比例范圍較窄，抗原或抗體過量，均可形成可溶性免疫復(fù)合物。人和許多大動物的抗血清皆屬H。 第16頁，共48頁。 免疫透射比濁法影響免疫比濁測定的主要因素反應(yīng)溶液：pH6.58.5，適當(dāng)濃度電解質(zhì)（中和抗原抗體復(fù)合物表面電荷，促進(jìn)凝聚）、離子強(qiáng)度（大，IC形成快）；一般常用磷酸

6、鹽緩沖液。 第17頁，共48頁。 免疫透射比濁法影響免疫比濁測定的主要因素增濁劑：非離子型親水劑如聚乙二醇（PEG）、吐溫-20等，以PEG6000最好，濃度一般為3%4%。濃度過高可致非特異沉淀。 第18頁，共48頁。 免疫透射比濁法免疫比濁法測定的注意事項： 1.標(biāo)本 3.定標(biāo) 2.試劑 4.線性 第19頁，共48頁。免疫透射比濁法 尿微量白蛋白檢測方法 檢測方法：原理：利用抗原（白蛋白）和特異性抗體（羊抗人白蛋白抗血清）相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液產(chǎn)生混濁，其濁度高低即透光度減少、吸光度增加反映血清樣本中白蛋白的濃度，可由校準(zhǔn)品所作的劑量相應(yīng)曲線算出。第20頁，共48頁。 微量

7、蛋白檢測臨床意義 正常腎小球基底膜具有34nm的微孔,并帶有一層負(fù)電荷,即具有孔徑屏障和電荷屏障,使血漿中帶負(fù)電荷的中等分子及大分子蛋白質(zhì)不易通過。在正常情況下,腎小球濾液中的小分子蛋白質(zhì)95%99%可通過腎小管重吸收,因而尿液中蛋白質(zhì)含量很少。正常生理情況下,尿中這些蛋白質(zhì)含量僅為微克或毫微克水平,在各種致病因子作用下,腎小球濾過膜和腎小管發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能損傷,使尿液中蛋白質(zhì)過高,超過了腎小管的重吸收功能而出現(xiàn)蛋白尿。第21頁，共48頁。（1）標(biāo)本由臨床運(yùn)送至實驗室要盡可能 快，必須分離出血清（漿）后運(yùn)送；（2）標(biāo)本運(yùn)送要注意防止標(biāo)本外溢、蒸發(fā)和污染（標(biāo)本管要蓋蓋子）； （3）足量。四、標(biāo)本保

8、存與運(yùn)送： 每一個標(biāo)本都是唯一的，不可替代的！ 每一個標(biāo)本都是危險的，具有潛在傳染性！ 第22頁，共48頁。 腎小球濾過膜示意圖 第23頁，共48頁。 第24頁，共48頁。 微量白蛋白檢測臨床意義 微量清蛋白尿?qū)υ缙谀I損害診斷具有重要意義。實踐證明,單一指標(biāo)有其局限性。因為早期腎損害不僅是腎小球損害,有的可以是腎小管功能的受損,也可以是兩者同時受損。正常尿中蛋白質(zhì)以白蛋白為主，而分子量低于50 000的蛋白質(zhì)大部分被腎小管重吸收，而尿中含量極微。健康人尿中mAlb95%可信限95%可信限，即為早期腎小球損傷。這類患者處于疾病早期，及時檢出進(jìn)行治療，可阻斷病情向不可逆蛋白階段發(fā)展，對提高病人今后

9、的生存質(zhì)量和減輕社會醫(yī)療經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)具有重大意義。第25頁，共48頁。 微量白蛋白檢測臨床意義 進(jìn)十年來，mAlb檢測方法經(jīng)過放射免疫法，酶免疫法和免疫濁度法3個階段，已逐漸成熟起來。目前，免疫濁度測定技術(shù)已得到推廣。速率散射濁度法靈敏度，準(zhǔn)確度，精密度均較好，但需用高質(zhì)量的特種蛋白分析儀。而透射比濁法則可用于各種自動化分析儀，具有速度快、省試劑、適于批量檢測的優(yōu)點。第26頁，共48頁。 轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測臨床意義 轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白一樣均屬小分子帶負(fù)電荷蛋白。前者分子量為77000，直徑為3.8nm，后者為66000，分子直徑為3.6nm。雖然轉(zhuǎn)鐵蛋白分子量略大于白蛋白，但所帶的負(fù)電荷明顯小于白蛋白。由

10、于漏出腎小球基底膜的蛋白質(zhì)除了要受基底膜網(wǎng)孔大小屏障的影響外，還要受到電荷屏障的影響。腎小球基底膜上存在大量帶負(fù)電荷的蛋白，如硫酸肝素糖蛋白、唾液酸等，可阻止帶負(fù)電荷的循環(huán)蛋白從腎小球中濾過。糖尿病腎病早期、腎小球基底膜電荷屏障功能減退早于裂孔大小屏障，故帶負(fù)電荷少的TF比白蛋白更容易被腎小球濾過。因此對糖尿病早期腎病的預(yù)測，尿TF比微量白蛋白更敏感。在高血壓腎病時，尿TF也可顯著增高。第27頁，共48頁。 轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測臨床意義 TRF為中分子蛋白，常作為尿蛋白選擇性指數(shù)的計算指標(biāo)。在急性腎小球腎炎、慢性腎小球腎炎、慢性腎功能不全等疾病中尿TF均可升高。血清轉(zhuǎn)鐵蛋白的臨床意義：血清TRF濃度受

11、鐵離子供應(yīng)的調(diào)節(jié)，與血漿中鐵離子濃度呈負(fù)相關(guān)。測定血清中TRF含量可用于貧血的診斷、療效觀察、肝病預(yù)后判斷。TRF也是一種負(fù)時相反應(yīng)蛋白。增高：常見于缺鐵性貧血、妊娠未期、口服避孕藥及使用雌激素等。減少：常見于嚴(yán)重肝病、營養(yǎng)不良、急慢性炎癥、惡性腫瘤、結(jié)締組織病、腎病綜合癥、慢性腎功能衰竭、嚴(yán)重?zé)齻⑽改c道疾病及再生障礙性貧血等。 第28頁，共48頁。 轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測臨床意義腦脊液TRF的臨床意義：增高可見于吉蘭-巴雷綜合癥、結(jié)核性腦膜炎、神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、腦出血及慢性缺鐵性貧血。減少：可見于急慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、腦膜白血病及腦腫瘤等。第29頁，共48頁。 尿免疫球蛋白G檢測臨床意義免疫球蛋白是指

12、具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)上與抗體相似的球蛋白。根據(jù)其重鏈定區(qū)的分子結(jié)構(gòu)與抗原特異性不同,可分為五類,即IgG、IgA、IgM、IgE、IgD。人血清中以IgG含量最多,占血清中Ig7580%。主要由脾臟和淋巴結(jié)中漿細(xì)胞合成,半衰期約23天。它較其他Ig更易透過毛細(xì)血管壁,彌散到組織間隙中。人體任何組織中都有IgG分布。IgG的分子量為1517萬而正常腎小球濾過膜只允許分子量4萬的蛋白通過。故血清中IgG不能通過腎小球濾過,尿液含量甚微。第30頁，共48頁。 尿免疫球蛋白G檢測臨床意義實驗證明,分子量40萬的蛋白,可通過毛細(xì)血管內(nèi)皮孔,但被基膜阻攔。分子量16萬,可通過內(nèi)皮孔和基膜,但被足細(xì)胞裂孔

13、膜阻攔。分子量4萬,能通過三層濾過膜而進(jìn)入腎小球囊。故分子量1517萬IgG,能反映腎小球濾過膜基膜受損情況。有人檢測尿IgG以表示尿蛋白的選擇程度,以反映腎小球濾過膜的“漏洞”,若尿中IgG含量增高,尿蛋白選擇性差,腎小球濾過膜損害嚴(yán)重,預(yù)后差。第31頁，共48頁。 尿2微球蛋白檢測臨床意義 正常人血清內(nèi)2-M濃度相當(dāng)恒定，0.82.0mg/L(平均為1.8mg/L)，臨界范圍是2.02.4mg/L，2.5mg/L以上為異常。 2-M容易通過腎小球濾膜，但幾乎全部由近曲小管以胞飲形式攝取，在局部被代謝降解為氨基酸。正常人每天從腎小球濾過的2-M約為340mg，但尿中每天最大排泄量只有370u

14、g，僅占濾過總量的0.1%。尿中正常健康人2-M濃度為0.030.37mg/L(或0.30mg/L或0.20mg/gCr)。 第32頁，共48頁。 尿2微球蛋白檢測臨床意義 尿液中的2-M不很穩(wěn)定，酸性尿，尤其是pH5.2以下時極易分解。測定尿液2-M的標(biāo)本，取得后及時測定或調(diào)節(jié)pH6.57.0，放冰箱保存。第33頁，共48頁。 尿2微球蛋白檢測臨床意義 2-M測定的臨床意義：1.評價腎小球疾?。?對腎小球濾過功能，其敏感度顯著高于目前常規(guī)應(yīng)用的血肌酐測定，部分患者的腎小球功能雖已受損，當(dāng)血肌酐還不能反映異常時，血2-M已顯示腎功能的異常。因此，對血肌酐測定處于盲區(qū)而腎小球濾過功能已受損害的患

15、者，測定其尿中2-M有利于早期發(fā)現(xiàn)腎小球濾過功能異常。 對IgA腎病，尤其是腎小球硬化者，即使腎功能正常，2-M也增高，可能由于該類疾病的患者體內(nèi)免疫反應(yīng)較強(qiáng)，淋巴細(xì)胞被激活，從T和B淋巴細(xì)胞中釋放的2-M增加之故。 第34頁，共48頁。 尿2微球蛋白檢測臨床意義 2.評價腎小管疾病： 可早期識別氨基甙類抗生素或鎘等在金屬的腎中毒。藥物主要集中在近端小管，當(dāng)局部濃度高出血清50倍時，往往在血肌酐升高前46天，尿中2-M即可增加兩倍以上。對于重金屬中毒腎損害的流行病調(diào)查，尿2-M可作為篩選試驗。 2-M水平為小管間質(zhì)性疾病的靈敏指標(biāo)，如Bartter綜合癥、萬可尼綜合癥、Willson病，以及原

16、發(fā)性間質(zhì)性腎炎等，尿中2-M均升高。 第35頁，共48頁。 尿2微球蛋白檢測臨床意義 3.鑒別上尿路與下尿路感染：上尿路感染時累及腎小管，而下尿路感染則無腎小管損傷。因此，測定尿中2-M可確定感染部位。動態(tài)觀察有助于療效觀察及早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)者。第36頁，共48頁。 尿2微球蛋白檢測臨床意義 4.監(jiān)測腎移植后排異反應(yīng)：腎移植剛完成時，血清2-M有時比肌酐下降得更早。因為腎移植后存活的腎小管細(xì)胞分解了從原尿或腎小管周圍毛細(xì)血管重吸收的2-M。發(fā)生排斥反應(yīng)時，由于腎功能下降，加上排斥引起的炎癥刺激宿主的淋巴細(xì)胞而使2-M合成增加、血清2-M升高，往往比血肌酐升高要早幾天。因此，血、尿2-M的變化對早期

17、識別排斥反應(yīng)提供了一項的價值的輔助診斷指標(biāo)。無排斥或偶有輕度排斥反應(yīng)的腎移植病人尿2-M不高，有排反應(yīng)者，在排斥期前17天就可以見到尿2-M明顯升高。在沒有腎功衰竭時，尿2-M增高一般表示移植后免疫損傷引起的腎小管功能障礙。由于免疫抑制劑可影響2-M的合成，在采用此類制劑控制急性排斥時，對2-M變化的意義就難以評價了。第37頁，共48頁。 尿2微球蛋白檢測臨床意義 5.某些惡性疾病和免疫性疾病，2-M合成加快，導(dǎo)致血2-M升高，但尿液2-M并不隨之升高。如多發(fā)性骨髓瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、何杰金氏病、干燥綜合癥、淋巴瘤、白血病、愛滋病、肝炎等，在無腎功能損害的情況下，血2-M也升高

18、。判斷這些疾病患者2-M增高的意義時，必須除去腎外因素。 血2-M水平升高，由于GFR降低者，主要見于腎功能衰竭。長期血液透析病人，血清2-M濃度明顯升高，其水平與血液透析的療程長短呈正相關(guān)。長期血液透析，可出現(xiàn)淀粉樣變，其原纖維(Fibrils)的主要構(gòu)成部分為2-M，腹膜透析不出現(xiàn) 上述現(xiàn)象。第38頁，共48頁。 尿1微球蛋白檢測臨床意義 尿1-微量蛋白1-MG是一種小分子蛋白, 分子量約為26000-33000u的糖蛋白，由肝臟產(chǎn)生。存在于血中的游離型1-MG可經(jīng)腎小球濾過膜自由濾過并極大部分被腎近曲小管重吸收而分解。正常情況下,尿1-MG排泄甚微,當(dāng)腎近曲小管受損時,排泄率明顯增加,因

19、而尿1-MG是反映腎近曲小管受損的敏感指標(biāo)，由于尿中微球蛋白不受PH值影響，一般認(rèn)為血清或尿液標(biāo)本在pH48之間，4保存一周，1-微球蛋白仍可保持穩(wěn)定。因此在腎臟疾病診斷中具有重要的臨床應(yīng)用價值。第39頁，共48頁。 尿1微球蛋白檢測臨床意義臨床意義：1. 腎功能損傷的早期診斷：1-MG作為低分子量蛋白質(zhì)，在腎小管性蛋白尿，腎小球性蛋白尿和混合性蛋白尿患者排泄量均明顯增加。故在腎小球腎炎、腎功能不全、高血壓、糖尿病和抗生素及其它藥物引起的腎臟損害中，尿中-MG均可增加。第40頁，共48頁。 尿1微球蛋白檢測臨床意義2. 鑒別診斷上泌尿道與下泌尿道感染、腎性與腎后性血尿和蛋白尿：在上泌尿道感染。

20、腎性血尿和蛋白尿時尿中1-MG明顯增多。反之下泌尿道感染及腎后性血尿和蛋白尿時尿中1-MG無明顯增多。第41頁，共48頁。 尿1微球蛋白檢測臨床意義 3. 尿1-微球蛋白升高： 腎小球、腎小管發(fā)生病變時，尿1-微球蛋白水平升高，與判斷腎功能的另外二項指標(biāo)2-微球蛋白(2-M)和肌酐(Cr)呈密切相關(guān)。肌酐廓清率(Ccr)在100ml/分以下時，1-微球蛋白升高，Ccr為80ml/分以下時，2-M開始升高?？梢?-微球蛋白比2-M敏感，而且患惡性腫瘤時不升高，因此，與2-M相比，1-微球蛋白在早期和鑒別診斷腎功能方面更具有臨床價值 。第42頁，共48頁。 尿視黃醇結(jié)合蛋白檢測臨床意義視黃醇結(jié)合蛋

21、白(retinol-bindingprotein,R為血中維生素A的特異轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。1968年Kanai等首次分離發(fā)現(xiàn)了RBP,1971年P(guān)eterson和Berggard從尿中將其分離。RBP為低分子量蛋白,能自由濾過腎小球,近端腎小管幾乎完全重吸收,其在血尿中變化與腎臟疾病密切相關(guān)。第43頁，共48頁。 尿視黃醇結(jié)合蛋白檢測臨床意義。RBP的理化特性和生理功能，RBP為一種單一肽鏈蛋白質(zhì),含有184個氨基酸殘基和3個二硫鍵,有一個結(jié)合一分子全反式視黃醇的結(jié)合點。RBP分子量為21000,沉降系數(shù)2.132.30,等電點為pH4.44.8,半衰期約為312小時,合成率為每天公斤體重5mg。RBP在肝臟合成,受到全反式視黃醇刺激后分泌出來，釋放入血后與視黃醇(retinol,ROH)、甲狀腺素運(yùn)載蛋白(transthretin,TTR)以1:1:1的比例形成