擬南芥論文：擬南芥 突觸結(jié)合蛋白 C2結(jié)構(gòu)域 膜融合

1、擬南芥論文：擬南芥synaptotagmin B基因的克隆及其功能 初步研究【中文摘要】Synaptotagmin (SYT)是一種突觸結(jié)合蛋白，在神經(jīng) 細胞分泌、神經(jīng)遞質(zhì)傳遞過程中擔(dān)當(dāng)Ca2+.感受器的角色，調(diào)節(jié)細胞 膜的融合。在結(jié)構(gòu)上具有一個跨膜結(jié)構(gòu)域(從羧基端到氨基端)、一個 連接肽鏈和一個處于胞質(zhì)中的C2結(jié)構(gòu)域。植物基因組中也有類似syt C2結(jié)構(gòu)域的基因。在模式生物擬南芥基因組中有六個syt相似基因。 目前已有報道sytA在膜損傷修復(fù)以及調(diào)節(jié)胞吞作用和病毒運動蛋白 細胞間運輸?shù)确矫鎿?dān)負著重要功能，但是對于其余五種基因的功能鮮 有報道。本文對擬南芥sytB基因的表達定位、生理功能等方面

2、做了 初步研究。在本實驗中構(gòu)建了 1300:sytB promotor:GUS的轉(zhuǎn)基因植 株，用染色的方法觀察了 sytB在擬南芥組織中的定位。為了研究sytB 的生理功能，購買了 salk_016690、salk_133731、salk_079043 三種 T-DNA插入突變體，構(gòu)建了 1300： 35s:sytB:GFP轉(zhuǎn)基因過表達植株， 并篩選出純合體。利用T-DNA插入突變體和過表達株系，觀察了 sytB 的異常表達所引起的植株的表型。實驗結(jié)果顯示sytB主要在植株維 管組織以及成熟的花粉中表達,sytB缺失突變體表現(xiàn)出花粉管的.【英文摘要】Synaptotagmin genes wh

3、ich exsit as a large family are one kind of Ca2+.sensor that regulate the menbrane fusion in synaptic vesicle exo/endocytosis or neurotransmitter release process. All syts share a common structure namely anN-terminal transmenbrane sequence jointed to a linker of viarable length, followed by two tand

4、emly arranged, distinct C2 domains which louse around in cytoplasm. Genes with the similar sequences as well as domain architecture to C2 domains were also found in plant genomes. There is .【關(guān)鍵詞】擬南芥突觸結(jié)合蛋白C2結(jié)構(gòu)域 膜融合【英文關(guān)鍵詞】Arabidopsis synaptotagmin C2 domain menbrane fusion【索購全文】聯(lián)系 EJQ1： 138113721 EJQ2

5、： 139938848 同時提供論文寫作一對一輔導(dǎo)和論文發(fā)表服務(wù).保過包發(fā)【日錄】擬南芥synaptotagmin B基因的克隆及其功能初步研究 摘要3-4 Abstract 4 第一章文獻綜述 TOC o 1-5 h z 8-191. C2結(jié)構(gòu)域概述9-102.synaptotagmin 10-182.1 脊椎動物 synaptotagmin 的功能及研究進展10-162.1.1 synaptotagmin家族成員的定位研究10-112.1.2 synaptotagmin 的結(jié)構(gòu)域 112.1.3synaptotagmin調(diào)節(jié)膜融合過程的分子機制11-142.1.4synaptotagmin

6、家族各亞型的生理作用14-162.2擬南芥synaptotagmin的功能及研究進展 16-182.2.1 sytA參與擬南芥抗冷脅迫過程中的質(zhì)膜損傷修復(fù)16-172.2.2 sytA能保持質(zhì)膜的完整以及細胞的生活力17-182.2.3 sytA調(diào)節(jié)植物病毒運動蛋白的胞間運動P 183.本研究的日的與意義19第二章 研究內(nèi)容19-521.材料211.1植物材料 191.2菌株及載體 191.3主要酶類、藥品與試劑191.4抗生素及常用緩沖液、培養(yǎng)基的配制19-201.4.1抗生素的配制19-201.4.2常用溶液的配制201.4.3常用培養(yǎng)基的配制201.5常用儀器設(shè)備20-212.方法21-

7、322.1分子生物學(xué)相關(guān)方法 21-292.1.1擬南芥總RNA的提取 21-232.1.2PCR 232.1.3擬南芥基因組DNA的提取 23-242.1.4目的基因的克隆24-252.1.5 DNA片段的回收和純化252.1.6載體構(gòu)建25-272.1.7農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的制備和外源基因轉(zhuǎn)化27-282.1.8農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法-浸花法282.1.9轉(zhuǎn)基因種子的篩選及純合體的獲得28-292.2原核表達蛋白質(zhì)提取純化方法292.2.1融合蛋白的誘導(dǎo)表達292.2.2蛋白純化（GST柱親合層析）292.3花粉表型觀察相關(guān)方法29-312.3.1花粉體外萌發(fā)29-302.3.2花粉活力檢測

8、302.3.3苯胺藍染色 30-312.4 GUS染色 31-322.4.1染液配制312.4.2 染色步驟 31-323.結(jié)果 32-483.1sytB的分子生物學(xué)信息分析32-343.1.1 sytB氨基酸序列中含有信號肽和跨膜序列323.1.2 sytB的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測32-343.2原核表達SYTB蛋白的提取與純化34-363.2.1原核表達載體的構(gòu)建 34-353.2.2 SYTB蛋白的提取與純化35-363.3 sytB的組織定位研究36-393.3.1 sytB啟動子序列的克隆 36-373.3.2真核表達載體構(gòu)建37-383.3.3 1300-sytB-GUS轉(zhuǎn)基因植株的獲得38

9、3.3.4 sytB主要在脈管組織、成熟的花粉中表達38-393.4獲得sytB過表達轉(zhuǎn)基因株系39-413.4.1報告基因GFP的克隆39-403.4.2真核表達載體構(gòu)建403.4.3 獲得 sytB、sytB158、sytB601 的過表達植株413.5篩選得到T-DNA插入突變體純合體443.5.1純合體的鑒定433.5.2精確插入位點的鑒定43-443.5.3純合體中sytB基因表達量的鑒定443.6純合突變體的表型觀察44-483.6.1突變體與野生型根長比較44-453.6.2突變體與野生型營養(yǎng)生長過程無明顯差異45-463.6.3 sytB的缺失不影響花粉的活力但抑制了花粉管的生長速度46-483.6.4 syt