第十一章-高效毛細(xì)管電泳分析法課件

第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、PHCE基本原理basicprinciplesofPHCE二、電滲現(xiàn)象與電滲流electroosmosisandelectroosmoticflow三、影響電滲流的因素factorsinfluencedelectroosmosis四、淌度mobility五、PHCE中的參數(shù)與關(guān)系式parametersandrelationinHPCE六、影響分離效率的因素factorsinfluencedseparationefficiency第二節(jié)

高效毛細(xì)管電泳理論基礎(chǔ)highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEbasictheoryofHPCE2022/12/21第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、PHCE基本原理第二節(jié)

高1一、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)基本原理

basicprinciplesofPHCE

電泳是指帶電離子在電場(chǎng)中的定向移動(dòng)，不同離子具有不同的遷移速度，遷移速度與哪些因素有關(guān)？當(dāng)帶電離子以速度ν

在電場(chǎng)中移動(dòng)時(shí)，受到大小相等、方向相反的電場(chǎng)推動(dòng)力和平動(dòng)摩擦阻力的作用。電場(chǎng)力：FE=qE

阻力：F=fν故：qE=fνq—離子所帶的有效電荷；E—電場(chǎng)強(qiáng)度；ν—離子在電場(chǎng)中的遷移速度；f—平動(dòng)摩擦系數(shù)(對(duì)于球形離子：f=6πηγ；γ—離子的表觀液態(tài)動(dòng)力學(xué)半徑；η—介質(zhì)的粘度；)2022/12/21一、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)基本原理

basicpr2所以，遷移速度：（球形離子）

物質(zhì)離子在電場(chǎng)中差速遷移是電泳分離的基礎(chǔ)。淌度μ

：?jiǎn)挝浑妶?chǎng)強(qiáng)度下的平均電泳速度。

2022/12/21所以，遷移速度：（球形離子）物質(zhì)離子在電場(chǎng)中3二、電滲現(xiàn)象與電滲流

electroosmosisandelectroosmoticflow1.電滲流現(xiàn)象

當(dāng)固體與液體接觸時(shí)，固體表面由于某種原因帶一種電荷，則因靜電引力使其周?chē)后w帶有相反電荷，在液-固界面形成雙電層，二者之間存在電位差。

當(dāng)液體兩端施加電壓時(shí)，就會(huì)發(fā)生液體相對(duì)于固體表面的移動(dòng)，這種液體相對(duì)于固體表面的移動(dòng)的現(xiàn)象叫電滲現(xiàn)象。

電滲現(xiàn)象中整體移動(dòng)著的液體叫電滲流（electroosmoticflow，簡(jiǎn)稱(chēng)EOF）。

2022/12/21二、電滲現(xiàn)象與電滲流

electroosmosisand42.HPCE中的電滲現(xiàn)象與電滲流

石英毛細(xì)管柱，內(nèi)充液pH>3時(shí)，表面電離成-SiO-,管內(nèi)壁帶負(fù)電荷，形成雙電層。

在高電場(chǎng)的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴(kuò)散層向陰極移動(dòng)，由于這些陽(yáng)離子實(shí)際上是溶劑化的，故將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動(dòng)，速度ν電滲流。2022/12/212.HPCE中的電滲現(xiàn)象與電滲流石英毛細(xì)管柱，內(nèi)充53.HPCE中電滲流的大小與方向

電滲流的大小用電滲流速度ν電滲流表示，取決于電滲淌度μ和電場(chǎng)強(qiáng)度E。即

ν電滲流=μE電滲淌度取決于電泳介質(zhì)及雙電層的Zeta電勢(shì)，即

μ=ε0εξε0—真空介電常數(shù)；ε—介電常數(shù)；ξ—毛細(xì)管壁的Zeta電勢(shì)。

ν電滲流=ε0εξ

E實(shí)際電泳分析，可在實(shí)驗(yàn)測(cè)定相應(yīng)參數(shù)后，按下式計(jì)算

ν電滲流=Lef/teoLef—毛細(xì)管有效長(zhǎng)度；teo—電滲流標(biāo)記物（中性物質(zhì)）的遷移時(shí)間。2022/12/213.HPCE中電滲流的大小與方向電滲流的大小用電滲流速6HPCE中電滲流的方向

電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)：內(nèi)表面帶負(fù)電荷，溶液帶正電荷，電滲流流向陰極；內(nèi)表面帶正負(fù)電荷，溶液帶負(fù)電荷，電滲流流向陽(yáng)極；石英毛細(xì)管；帶負(fù)電荷，電滲流流向陰極；改變電滲流方向的方法：

（1）毛細(xì)管改性表面鍵合陽(yáng)離子基團(tuán)；

（2）加電滲流反轉(zhuǎn)劑內(nèi)充液中加入大量的陽(yáng)離子表面活性劑，將使石英毛細(xì)管壁帶正電荷，溶液表面帶負(fù)電荷。電滲流流向陽(yáng)極。2022/12/21HPCE中電滲流的方向電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電74.HPCE中電滲流的流形電荷均勻分布，整體移動(dòng)，電滲流的流動(dòng)為平流，塞式流動(dòng)（譜帶展寬很小）；液相色譜中的溶液流動(dòng)為層流，拋物線流型，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的2倍（引起譜帶展寬較大）。2022/12/214.HPCE中電滲流的流形電荷均勻分布，整體移動(dòng)，電85.HPCE中電滲流的作用

電滲流的速度約等于一般離子電泳速度的5～7倍；

各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：

ν+=ν電滲流+ν+ef陽(yáng)離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致；

ν-=ν電滲流-ν-ef陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反；

ν0=ν電滲流中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致；（1）可一次完成陽(yáng)離子、陰離子、中性粒子的分離；（2）改變電滲流的大小和方向可改變分離效率和選擇性，如同改變LC中的流速；（3）電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性；在HPCE中，控制電滲流非常重要。2022/12/215.HPCE中電滲流的作用電滲流的速度約等于一般離子9三、HPCE中影響電滲流的因素

factorsinfluencedelectroosmosis1.電場(chǎng)強(qiáng)度的影響

電滲流速度和電場(chǎng)強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長(zhǎng)度一定時(shí)，電滲流速度正比于工作電壓。2.毛細(xì)管材料的影響

不同材料毛細(xì)管的表面電荷特性不同，產(chǎn)生的電滲流大小不同；2022/12/21三、HPCE中影響電滲流的因素

factorsinflu103.電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響（1）溶液pH的影響

對(duì)于石英毛細(xì)管，溶液pH增高時(shí)，表面電離多，電荷密度增加，管壁zeta電勢(shì)增大，電滲流增大，pH=7，達(dá)到最大；pH<3，完全被氫離子中和，表面電中性，電滲流為零。分析時(shí)，采用緩沖溶液來(lái)保持pH穩(wěn)定。（2）陰離子的影響在其他條件相同，濃度相同而陰離子不同時(shí)，毛細(xì)管中的電流有較大差別，產(chǎn)生的焦耳熱不同。緩沖溶液離子強(qiáng)度，影響雙電層的厚度、溶液黏度和工作電流，明顯影響電滲流大小。緩沖溶液離子強(qiáng)度增加，電滲流下降。2022/12/213.電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響（1）溶液pH的影響2022/12112022/12/212022/12/18124.溫度的影響

毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。溫度變化來(lái)自于“焦耳熱”；

焦耳熱：毛細(xì)管溶液中有電流通過(guò)時(shí)，產(chǎn)生的熱量；

HPCE中的焦耳熱與背景電解質(zhì)的摩爾電導(dǎo)、濃度及電場(chǎng)強(qiáng)度成正比。溫度每變化1，將引起背景電解質(zhì)溶液黏度變化2%～3%；2022/12/214.溫度的影響毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降135.添加劑的影響（1）加入濃度較大的中性鹽，如K2SO4，溶液離子強(qiáng)度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減小。（2）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向；加入不同陽(yáng)離子表面活性劑來(lái)控制電滲流。加入陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（SDS），可以使壁表面負(fù)電荷增加，zeta電勢(shì)增大，電滲流增大；（3）加入有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。2022/12/215.添加劑的影響（1）加入濃度較大的中性鹽，如K2SO4，14四、淌度mobility

淌度：帶電離子在單位電場(chǎng)下的遷移速度；

淌度不同是電泳分離的基礎(chǔ)。1.絕對(duì)淌度(absolutemobility)μab無(wú)限稀釋溶液中帶電離子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的平均遷移速度，簡(jiǎn)稱(chēng)淌度?？稍谑謨?cè)中查閱。2.有效淌度(effectivemobility)μef實(shí)際溶液中的淌度(實(shí)驗(yàn)中測(cè)定的)。μef=∑aiμi

ai—溶質(zhì)i的解離度；μi—溶質(zhì)i在解離狀態(tài)下的絕對(duì)淌度3.表觀淌度

μap離子在實(shí)際分離過(guò)程中的遷移速度（表觀遷移速度）：

νap=μapE2022/12/21四、淌度mobility淌度：帶電離子在單位電15五、HPCE中的參數(shù)與關(guān)系式

parametersandrelationinHPCE1.遷移時(shí)間（保留時(shí)間）

HPCE兼具有電化學(xué)的特性和色譜分析的特性。有關(guān)色譜理論也適用。V—外加電壓；L—毛細(xì)管總長(zhǎng)度；2.分離效率（塔板數(shù)）

在HPCE中，僅存在縱向擴(kuò)散，σ2=2Dt

擴(kuò)散系數(shù)小的溶質(zhì)比擴(kuò)散系數(shù)大的分離效率高，分離生物大分子的依據(jù)。2022/12/21五、HPCE中的參數(shù)與關(guān)系式

parametersan163.分離度

影響分離度的主要因素；工作電壓V；毛細(xì)管有效長(zhǎng)度與總長(zhǎng)度比；有效淌度差。分離度可按譜圖直接由下式計(jì)算：2022/12/213.分離度影響分離度的主要因素；工作電壓V；毛細(xì)17六、影響分離效率的因素—區(qū)帶展寬

factorsinfluencedtheefficiency—bandbroadening

1.縱向擴(kuò)散的影響

在HPCE中，縱向擴(kuò)散引起的峰展寬：σ2=2Dt由擴(kuò)散系數(shù)和遷移時(shí)間決定。大分子的擴(kuò)散系數(shù)小，可獲得更高的分離效率，大分子生物試樣分離的依據(jù)。2.進(jìn)樣的影響

當(dāng)進(jìn)樣塞長(zhǎng)度太大時(shí)，引起的峰展寬大于縱向擴(kuò)散。分離效率明顯下降；理想情況下，進(jìn)樣塞長(zhǎng)度：

Winj=(24Dt)1/2實(shí)際操作時(shí)進(jìn)樣塞長(zhǎng)度小于或等于毛細(xì)管總長(zhǎng)度的1%～2%。2022/12/21六、影響分離效率的因素—區(qū)帶展寬

factorsinfl183.焦耳熱與溫度梯度的影響

電泳過(guò)程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計(jì)算：m—電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo)；I—工作電流：cm—電解質(zhì)濃度；

散熱過(guò)程中，在毛細(xì)管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流，導(dǎo)致區(qū)帶展寬。改善方法：（1）減小毛細(xì)管內(nèi)徑；（2）控制散熱；2022/12/213.焦耳熱與溫度梯度的影響電泳過(guò)程產(chǎn)生的焦耳熱可由194.溶質(zhì)與管壁間的相互作用

存在吸附與疏水作用，造成譜帶展寬；蛋白質(zhì)、多肽帶電荷數(shù)多，有較多的疏水基，吸附問(wèn)題特別嚴(yán)重，是目前分離分析該類(lèi)物質(zhì)的一大難題。細(xì)內(nèi)徑毛細(xì)管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機(jī)會(huì)。減小吸附的方法和途徑：加入兩性離子代替強(qiáng)電解質(zhì)，兩性離子一端帶正電，另一端帶負(fù)電，帶正電一端與管壁負(fù)電中心作用，濃度約為溶質(zhì)的100-1000倍時(shí)，抑制對(duì)蛋白質(zhì)吸附，又不增加溶液電導(dǎo)，對(duì)電滲流影響不大。2022/12/214.溶質(zhì)與管壁間的相互作用存在吸附與疏水作用，造成205.其他影響因素

（1）電分散作用對(duì)譜帶展寬的影響當(dāng)溶質(zhì)區(qū)帶與緩沖溶液區(qū)帶的電導(dǎo)不同時(shí)，也造成譜帶展寬；盡量選擇與試樣淌度相匹配的背景電解質(zhì)溶液。（2）“層流”現(xiàn)象對(duì)譜帶展寬的影響一般情況下，HPCE中不存在層流，但當(dāng)毛細(xì)管兩端存在壓力差時(shí)，出現(xiàn)拋物線形的層流；

產(chǎn)生的原因：毛細(xì)管兩端液面高度不同。實(shí)際操作時(shí)，保持毛細(xì)管兩端緩沖溶液平面高度相同。2022/12/215.其他影響因素（1）電分散作用對(duì)譜帶展寬的影響2022/21請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)概述generalization第二節(jié)高效毛細(xì)管電泳的理論基礎(chǔ)basictheoryofHPCE第三節(jié)高效毛細(xì)管電泳儀器highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus第四節(jié)高效毛細(xì)管電泳的分離模式separatetypesofHPCE第五節(jié)應(yīng)用與進(jìn)展applicationandadvancesofHPCE結(jié)束2022/12/21請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)概述結(jié)束2022/12/1822第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、PHCE基本原理basicprinciplesofPHCE二、電滲現(xiàn)象與電滲流electroosmosisandelectroosmoticflow三、影響電滲流的因素factorsinfluencedelectroosmosis四、淌度mobility五、PHCE中的參數(shù)與關(guān)系式parametersandrelationinHPCE六、影響分離效率的因素factorsinfluencedseparationefficiency第二節(jié)

高效毛細(xì)管電泳理論基礎(chǔ)highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEbasictheoryofHPCE2022/12/21第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、PHCE基本原理第二節(jié)

高23一、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)基本原理

basicprinciplesofPHCE

電泳是指帶電離子在電場(chǎng)中的定向移動(dòng)，不同離子具有不同的遷移速度，遷移速度與哪些因素有關(guān)？當(dāng)帶電離子以速度ν

在電場(chǎng)中移動(dòng)時(shí)，受到大小相等、方向相反的電場(chǎng)推動(dòng)力和平動(dòng)摩擦阻力的作用。電場(chǎng)力：FE=qE

阻力：F=fν故：qE=fνq—離子所帶的有效電荷；E—電場(chǎng)強(qiáng)度；ν—離子在電場(chǎng)中的遷移速度；f—平動(dòng)摩擦系數(shù)(對(duì)于球形離子：f=6πηγ；γ—離子的表觀液態(tài)動(dòng)力學(xué)半徑；η—介質(zhì)的粘度；)2022/12/21一、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)基本原理

basicpr24所以，遷移速度：（球形離子）

物質(zhì)離子在電場(chǎng)中差速遷移是電泳分離的基礎(chǔ)。淌度μ

：?jiǎn)挝浑妶?chǎng)強(qiáng)度下的平均電泳速度。

2022/12/21所以，遷移速度：（球形離子）物質(zhì)離子在電場(chǎng)中25二、電滲現(xiàn)象與電滲流

electroosmosisandelectroosmoticflow1.電滲流現(xiàn)象

當(dāng)固體與液體接觸時(shí)，固體表面由于某種原因帶一種電荷，則因靜電引力使其周?chē)后w帶有相反電荷，在液-固界面形成雙電層，二者之間存在電位差。

當(dāng)液體兩端施加電壓時(shí)，就會(huì)發(fā)生液體相對(duì)于固體表面的移動(dòng)，這種液體相對(duì)于固體表面的移動(dòng)的現(xiàn)象叫電滲現(xiàn)象。

電滲現(xiàn)象中整體移動(dòng)著的液體叫電滲流（electroosmoticflow，簡(jiǎn)稱(chēng)EOF）。

2022/12/21二、電滲現(xiàn)象與電滲流

electroosmosisand262.HPCE中的電滲現(xiàn)象與電滲流

石英毛細(xì)管柱，內(nèi)充液pH>3時(shí)，表面電離成-SiO-,管內(nèi)壁帶負(fù)電荷，形成雙電層。

在高電場(chǎng)的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴(kuò)散層向陰極移動(dòng)，由于這些陽(yáng)離子實(shí)際上是溶劑化的，故將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動(dòng)，速度ν電滲流。2022/12/212.HPCE中的電滲現(xiàn)象與電滲流石英毛細(xì)管柱，內(nèi)充273.HPCE中電滲流的大小與方向

電滲流的大小用電滲流速度ν電滲流表示，取決于電滲淌度μ和電場(chǎng)強(qiáng)度E。即

ν電滲流=μE電滲淌度取決于電泳介質(zhì)及雙電層的Zeta電勢(shì)，即

μ=ε0εξε0—真空介電常數(shù)；ε—介電常數(shù)；ξ—毛細(xì)管壁的Zeta電勢(shì)。

ν電滲流=ε0εξ

E實(shí)際電泳分析，可在實(shí)驗(yàn)測(cè)定相應(yīng)參數(shù)后，按下式計(jì)算

ν電滲流=Lef/teoLef—毛細(xì)管有效長(zhǎng)度；teo—電滲流標(biāo)記物（中性物質(zhì)）的遷移時(shí)間。2022/12/213.HPCE中電滲流的大小與方向電滲流的大小用電滲流速28HPCE中電滲流的方向

電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)：內(nèi)表面帶負(fù)電荷，溶液帶正電荷，電滲流流向陰極；內(nèi)表面帶正負(fù)電荷，溶液帶負(fù)電荷，電滲流流向陽(yáng)極；石英毛細(xì)管；帶負(fù)電荷，電滲流流向陰極；改變電滲流方向的方法：

（1）毛細(xì)管改性表面鍵合陽(yáng)離子基團(tuán)；

（2）加電滲流反轉(zhuǎn)劑內(nèi)充液中加入大量的陽(yáng)離子表面活性劑，將使石英毛細(xì)管壁帶正電荷，溶液表面帶負(fù)電荷。電滲流流向陽(yáng)極。2022/12/21HPCE中電滲流的方向電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電294.HPCE中電滲流的流形電荷均勻分布，整體移動(dòng)，電滲流的流動(dòng)為平流，塞式流動(dòng)（譜帶展寬很小）；液相色譜中的溶液流動(dòng)為層流，拋物線流型，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的2倍（引起譜帶展寬較大）。2022/12/214.HPCE中電滲流的流形電荷均勻分布，整體移動(dòng)，電305.HPCE中電滲流的作用

電滲流的速度約等于一般離子電泳速度的5～7倍；

各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：

ν+=ν電滲流+ν+ef陽(yáng)離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致；

ν-=ν電滲流-ν-ef陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反；

ν0=ν電滲流中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致；（1）可一次完成陽(yáng)離子、陰離子、中性粒子的分離；（2）改變電滲流的大小和方向可改變分離效率和選擇性，如同改變LC中的流速；（3）電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性；在HPCE中，控制電滲流非常重要。2022/12/215.HPCE中電滲流的作用電滲流的速度約等于一般離子31三、HPCE中影響電滲流的因素

factorsinfluencedelectroosmosis1.電場(chǎng)強(qiáng)度的影響

電滲流速度和電場(chǎng)強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長(zhǎng)度一定時(shí)，電滲流速度正比于工作電壓。2.毛細(xì)管材料的影響

不同材料毛細(xì)管的表面電荷特性不同，產(chǎn)生的電滲流大小不同；2022/12/21三、HPCE中影響電滲流的因素

factorsinflu323.電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響（1）溶液pH的影響

對(duì)于石英毛細(xì)管，溶液pH增高時(shí)，表面電離多，電荷密度增加，管壁zeta電勢(shì)增大，電滲流增大，pH=7，達(dá)到最大；pH<3，完全被氫離子中和，表面電中性，電滲流為零。分析時(shí)，采用緩沖溶液來(lái)保持pH穩(wěn)定。（2）陰離子的影響在其他條件相同，濃度相同而陰離子不同時(shí)，毛細(xì)管中的電流有較大差別，產(chǎn)生的焦耳熱不同。緩沖溶液離子強(qiáng)度，影響雙電層的厚度、溶液黏度和工作電流，明顯影響電滲流大小。緩沖溶液離子強(qiáng)度增加，電滲流下降。2022/12/213.電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響（1）溶液pH的影響2022/12332022/12/212022/12/18344.溫度的影響

毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。溫度變化來(lái)自于“焦耳熱”；

焦耳熱：毛細(xì)管溶液中有電流通過(guò)時(shí)，產(chǎn)生的熱量；

HPCE中的焦耳熱與背景電解質(zhì)的摩爾電導(dǎo)、濃度及電場(chǎng)強(qiáng)度成正比。溫度每變化1，將引起背景電解質(zhì)溶液黏度變化2%～3%；2022/12/214.溫度的影響毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降355.添加劑的影響（1）加入濃度較大的中性鹽，如K2SO4，溶液離子強(qiáng)度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減小。（2）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向；加入不同陽(yáng)離子表面活性劑來(lái)控制電滲流。加入陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（SDS），可以使壁表面負(fù)電荷增加，zeta電勢(shì)增大，電滲流增大；（3）加入有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。2022/12/215.添加劑的影響（1）加入濃度較大的中性鹽，如K2SO4，36四、淌度mobility

淌度：帶電離子在單位電場(chǎng)下的遷移速度；

淌度不同是電泳分離的基礎(chǔ)。1.絕對(duì)淌度(absolutemobility)μab無(wú)限稀釋溶液中帶電離子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的平均遷移速度，簡(jiǎn)稱(chēng)淌度?？稍谑謨?cè)中查閱。2.有效淌度(effectivemobility)μef實(shí)際溶液中的淌度(實(shí)驗(yàn)中測(cè)定的)。μef=∑aiμi

ai—溶質(zhì)i的解離度；μi—溶質(zhì)i在解離狀態(tài)下的絕對(duì)淌度3.表觀淌度

μap離子在實(shí)際分離過(guò)程中的遷移速度（表觀遷移速度）：

νap=μapE2022/12/21四、淌度mobility淌度：帶電離子在單位電37五、HPCE中的參數(shù)與關(guān)系式

parametersandrelationinHPCE1.遷移時(shí)間（保留時(shí)間）

HPCE兼具有電化學(xué)的特性和色譜分析的特性。有關(guān)色譜理論也適用。V—外加電壓；L—毛細(xì)管總長(zhǎng)度；2.分離效率（塔板數(shù)）

在HPCE中，僅存在縱向擴(kuò)散，σ2=2Dt

擴(kuò)散系數(shù)小的溶質(zhì)比擴(kuò)散系數(shù)大的分離效率高，分離生物大分子的依據(jù)。2022/12/21五、HPCE中的參數(shù)與關(guān)系式

parametersan383.分離度

影響分離度的主要因素；工作電壓V；毛細(xì)管有效長(zhǎng)度與總長(zhǎng)度比；有效淌度差。分離度可按譜圖直接由下式計(jì)算：2022/12/213.分離度影響分離度的主要因素；工作電壓V；毛細(xì)39六、影響分離效率的因素—區(qū)帶展寬

factorsinfluencedtheefficiency—bandbroadening

1.縱向擴(kuò)散的影響

在HPCE中，縱向擴(kuò)散引起的峰展寬：σ2=2Dt由擴(kuò)散系數(shù)和遷移時(shí)間決定。大分子的擴(kuò)散系數(shù)小，可獲得更高的分離效率，大分子生物試樣分離的依據(jù)。2.進(jìn)樣的影響

當(dāng)進(jìn)樣塞長(zhǎng)度太大時(shí)，引起的峰展寬大于縱向擴(kuò)散。分離效率明顯下降；理想情況下，