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文檔簡介

聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳分離血清蛋白【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

1.學(xué)習(xí)聚丙烯酰胺凝膠電泳原理

2.掌握聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳的操作技術(shù)【實(shí)驗(yàn)原理】

聚丙烯酰胺是由單體丙烯酰胺（簡稱Acr）和交聯(lián)劑N,N’-甲叉雙丙烯酰胺（簡稱Bis）在催化劑過硫酸銨（簡稱AP）和加速劑N,N,N’N’-四甲基乙二胺(簡稱TEMED)的作用下,聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。

1編輯ppt聚丙烯酰胺凝膠電泳分離原理分子篩效應(yīng)：分子量或分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)通過一定孔徑分離膠時(shí)，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率，這就是分子篩效應(yīng)。電荷效應(yīng)：電荷量不同，遷移率不同。濃縮效應(yīng)2編輯ppt【實(shí)驗(yàn)器材】樣品：血清凝膠儲備液：1號液：pH8.9Tris~HCl緩沖液+TEMED2號液：Acr+Bis3號液：AP電泳緩沖液：pH8.3的Tris-Gly緩沖液染色液：氨基黑溶液脫色劑：冰乙酸3編輯ppt【實(shí)驗(yàn)器材】電泳儀、圓盤電泳槽、電泳玻璃管、青霉素小瓶蓋、微量注射器、長針頭注射器、燒杯、移液管、ParaFilm膜。4編輯ppt【實(shí)驗(yàn)步驟】1.凝膠的制備

（1）準(zhǔn)備工作：用ParaFilm膜密封細(xì)橡皮塞的一端，塞入放到木質(zhì)試管架上的小瓶塞中；5編輯ppt（2）制備小孔膠（分離膠）凝膠濃度:7.5%試劑用量蒸餾水1號液2號液

1mL1mL2mL混勻3號液4mL6編輯ppt2.灌膠，裝膠用滴管吸取凝膠沿管壁裝入玻璃管中，檢查管內(nèi)無氣泡，加完凝膠后沿管壁緩緩注入幾滴蒸餾水，聚合約40-60分鐘；時(shí)間到后，輕輕取下管底部的橡皮塞和ParaFilm膜，用濾紙吸取凝膠上方水層，將凝膠管垂直插入電泳槽圓孔中并盡量使各管高度一致，其余孔用膠塞堵住，電泳槽內(nèi)加注電泳液；7編輯ppt3.加樣：

用微量注射器吸取20/50ml

的樣品（含溴酚藍(lán)），沿內(nèi)壁緩慢加入，注意觀察樣品的狀態(tài)變化；4.電泳：負(fù)極在上，正極在下，電流調(diào)節(jié)到2mA/管，開通電源；2min后，電流調(diào)節(jié)到5mA/管，電泳約1h左右，直到溴酚藍(lán)跑到凝膠底部。8編輯ppt5.剝膠

9編輯ppt6.固定與染色：將取下的膠條放入染色液中，在室溫下，固定染色10min。

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