醫(yī)學(xué)微生物學(xué)課件微生物實驗2

實驗二

主要內(nèi)容

（一）細(xì)菌培養(yǎng)基的制備與滅菌（二）懸滴法觀察細(xì)菌動力培養(yǎng)基的分類：1.按其營養(yǎng)組成和用途分類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)基。2.按其物理狀態(tài)分類：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基：是由人工配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。方法與步驟

配料溶化矯正PH分裝高壓滅菌實驗步驟（8人一組，每組200ml）1．配料按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入裝有蒸餾水的燒杯中，加熱溶化。稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把藥匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。蒸餾水要少于所需量、牛肉膏很粘稠、蛋白胨很易吸潮、節(jié)約使用稱量紙。加熱時需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。2．矯正pH待培養(yǎng)基冷至40~50℃時，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入2NNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達(dá)7.6（4~5滴/100ml）。注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)，否則，將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。對于有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進(jìn)行。3.將稱好的瓊脂粉放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂，同時要注意防止瀑溢。最后補(bǔ)足所失的水分。

注意用電安全，防止瀑溢！

4．分裝中試管裝量不超過管高的1/4（約5ml），滅菌后制成斜面。余下裝三角燒瓶，其量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。5．加塞、包扎：培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口、三角燒瓶口上塞上塞子，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并用記號筆注明姓名。在三角燒瓶的塞子外、約20支試管的塞子外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕塞子，其外再用一道線繩扎好。6．高壓蒸汽滅菌：將上述培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌器，

121.3℃，15~20分鐘高壓蒸汽滅菌。應(yīng)用此法滅菌是否徹底的一個重要關(guān)鍵是在壓力上升之前，必須將鍋內(nèi)的冷空氣完全排盡，否則雖然壓力表已指15磅時，但鍋內(nèi)的溫度還只有100℃，結(jié)果往往造成滅菌不徹底。壓力未降至0磅時，切勿打開鍋蓋，否則突然降壓，招致培養(yǎng)基沸騰，甚至沖出管外。7．?dāng)R置斜面將滅菌的試管培養(yǎng)基塞子端擱在木棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。8.傾注平皿待三角燒瓶中培養(yǎng)基冷至50~60℃時以無菌技術(shù)傾注平皿，每個平皿鋪平即可（約15ml），冷凝后翻轉(zhuǎn)于底部寫上姓名，放入冰箱。

注意無菌操作、冷凝后再翻轉(zhuǎn)！傾注于平皿底部注意無菌操作！懸滴法屬于不染色標(biāo)本檢查法中的一種，可以用來檢測細(xì)菌的動力?；罹慈旧珪r呈無色半透明，在顯微鏡下主要靠細(xì)菌的折光率與周圍環(huán)境的不同進(jìn)行觀察。有鞭毛的細(xì)菌在鏡下呈活潑有方向的運(yùn)動，無鞭毛的細(xì)菌則呈不規(guī)則布朗運(yùn)動。懸滴法觀察細(xì)菌的動力染色觀察普通染色特殊染色單染法復(fù)染法革蘭氏染色抗酸染色細(xì)菌的觀察不染色觀察壓滴法懸滴法1.取一張凹玻片，在凹窩四角涂上少許凡士林。2.用接種環(huán)取2～3環(huán)葡萄球菌或大腸桿菌液體培養(yǎng)物置于蓋玻片中央。實驗方法3.將凹玻片凹面向下，使凹槽中央正對菌液，倒扣于蓋玻片上。

4.迅速翻轉(zhuǎn)載玻片，用小鑷子輕壓，使蓋玻片與凹槽邊緣粘緊封閉，以防止菌液蒸發(fā)。菌液懸于蓋玻片下面，放于顯微鏡下觀察。實驗方法5.先用低倍鏡觀察，找到觀察部位后再換高倍鏡觀察。6.用顯微鏡觀察結(jié)果時，應(yīng)下降聚光器，調(diào)小光圈，使背景變暗，易于觀察結(jié)果。實驗方法結(jié)果