實(shí)驗(yàn)五大腸桿菌與沙門氏菌

關(guān)于實(shí)驗(yàn)五大腸桿菌與沙門氏菌第一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一實(shí)驗(yàn)原理各種細(xì)菌在其新陳代謝中，由于利用營養(yǎng)物質(zhì)的能力有所差異，排泄的代謝產(chǎn)物亦不同，所以利用這點(diǎn)進(jìn)行生化試驗(yàn)，可達(dá)到鑒定細(xì)菌種的目的，尤其在鑒定腸道桿菌時(shí)，生化試驗(yàn)是極其常用的一種方法。第二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一一、目的要求學(xué)習(xí)常用的生化實(shí)驗(yàn)方法；掌握大腸桿菌與沙門氏菌的主要生化特點(diǎn)。第三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一個(gè)體為桿狀散在或成對G－二、背景知識介紹大腸桿菌中等大小0.4-0.7×2-3μm大腸埃希氏菌是這個(gè)菌群的代表成原；與廣泛的獸醫(yī)臨床病征有關(guān)，如：犢牛的腸道感染和水瀉；幼豬的水瀉和腹瀉，斷奶仔豬水腫病；狗的尿道感染；雞：臍炎、眼炎、腸炎、肝周炎、肺炎、氣囊炎、腹膜炎、肉芽腫等。

第四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一第五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一第六頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一個(gè)體為桿狀散在或成對G－沙門氏菌是一大群寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi)、生化特性和抗原結(jié)構(gòu)相似，G－，兼性厭氧的無芽胞直桿菌。在醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)和公共衛(wèi)生上均十分重要：絕大多數(shù)沙門氏菌對人和動(dòng)物有致病性；能致人和動(dòng)物多種不同臨床表現(xiàn)的沙門氏菌病；人類食物中毒的主要病原之一。第七頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一第八頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌除雛沙門和雞沙門氏菌外，其余各菌具有周生鞭毛。第九頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一三、實(shí)驗(yàn)材料常規(guī)接種工具：接種棒、酒精燈等革蘭氏染色液、玻片、滴管等菌種:大腸桿菌的普通瓊脂（或麥康凱）培養(yǎng)物（1個(gè)/組）沙門氏菌的普通瓊脂（或麥康凱）培養(yǎng)物（1個(gè)/組）大腸桿菌、沙門氏菌的鄧亨氏蛋白胨水培養(yǎng)物；大腸桿菌、沙門氏菌的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物。培養(yǎng)基：三糖鐵斜面（1支/人）生化管：葡、乳、麥、甘、蔗、H2S、尿、枸（1套/人）試劑：吲哚試劑、M.R試劑、V-P試劑等第十頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容觀察大腸桿菌在普通瓊脂上的生長表現(xiàn)；大腸桿菌在麥康凱平板上生長表現(xiàn)；沙門氏菌在普通瓊脂上的生長表現(xiàn)；沙門氏菌在麥康凱平板上生長表現(xiàn)；大腸桿菌與沙門氏菌的革蘭氏染色、鏡檢；記錄結(jié)果。第十一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一三糖鐵瓊脂接種挑取待試菌菌落穿刺接種三糖鐵底部并涂布于斜面；置37℃培養(yǎng)。第十二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一生化管接種培養(yǎng)糖發(fā)酵試驗(yàn)：葡乳麥甘蔗H2S試驗(yàn)；尿素酶試驗(yàn)；枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)。葡乳麥甘蔗H2S尿枸第十三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一葡乳麥甘蔗H2S尿枸大腸桿菌沙門氏菌大腸桿菌沙門氏菌置37℃培養(yǎng)第十四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一吲哚試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門氏菌于5mL鄧亨氏蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d；靜置分層后，沿試管壁加入吲哚試劑1mL；上層變?yōu)榧t色者為陽性反應(yīng)。乙醚混勻分層吲哚試劑陽性陰性第十五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一吲哚試驗(yàn)原理蛋白質(zhì)中的色氨酸有些細(xì)菌如大腸埃希氏菌吲哚對位二甲基氨基苯甲醛+玫瑰吲哚紅色①試劑配方一：對二甲基氨基苯甲醛 1g無水乙醇 95mL濃鹽酸 20mL②試劑配方二：對二甲基氨基苯甲醛5g戊醇（或異戊醇）75mL濃鹽酸 25mL先用乙醇溶解試劑后加鹽酸，避光保存。第十六頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一M.R試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d）；于培養(yǎng)物中加入幾滴試劑；變紅色者為陽性反應(yīng)，桔紅到黃色則為陰性。M.R試劑陽性陰性第十七頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一V-P試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d）；于培養(yǎng)物中加入0.5mLV-P甲液；隨后加V-P乙液0.5mL，輕搖；靜置10-15min。15min內(nèi)變紅者為陽性。V-P甲液V-P乙液陽性陰性第十八頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一M.R與V-P試驗(yàn)原理M.R試驗(yàn)：甲基紅是一種pH指示劑：當(dāng)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸且產(chǎn)酸量大時(shí)；在加入甲基紅指示劑后顯紅色為陽性。pH4.4-6.2

紅→黃葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇2,3-丁二烯醇某些細(xì)菌能發(fā)酵二乙酰堿V-P試驗(yàn)：+胨中的胍基化合物注意：通常M.R和V-P試驗(yàn)是密切相關(guān)：如果一個(gè)微生物M.R是陽性，則V-P是陰性；或者相反。粉紅色化合物+第十九頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一M.R試劑V-P試劑甲基紅0.02g95％酒精60mL蒸餾水40mL甲液：α萘酚酒精溶液（α萘酚5g無水乙醇100mL）乙液：KOH溶液（KOH40g，水100ml）將甲液和乙液分裝棕色瓶中，于4-10℃保存。第二十頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一五、結(jié)果觀察大腸桿菌的生長表現(xiàn)普通瓊脂：形成圓形、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落，直徑約2~3mm；麥康凱：瓊脂上形成紅色菌落較大的菌落。第二十一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)酸（黃色）底部產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)氣＋H2S－反應(yīng)模式表示：A／A＋；－第二十二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一沙門氏菌的生長表現(xiàn)普通瓊脂：生長不良；麥康凱：瓊脂上形成灰白色菌落。第二十三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)堿（紅色）底部產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)氣－H2S＋反應(yīng)模式表示：K／A＋(－)；＋(－)第二十四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一細(xì)菌的染色、鏡檢大腸桿菌沙門氏菌G－直桿菌，大小0.4-0.7×2-3μm，無芽胞，兩端鈍圓，散在或成對。第二十五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一生化管接種培養(yǎng)葡乳麥甘蔗H2S尿枸葡乳麥甘蔗H2S尿枸大腸桿菌沙門氏菌⊕⊕⊕⊕⊕/-－－－⊕－⊕⊕－＋