山茱萸總降血糖作用的實驗研究

山茱萸總降血糖作用的實驗研究

中藥山茱萸是山茱萸科植物的干燥成熟果肉，包括環(huán)烯醚類、脂肪酸和提取物?！侗静菥V目》中記述,其味酸澀,性微溫;有補肝腎,澀精氣,固虛脫的功效,常用于腎氣丸、六味地黃丸、鹿茸丸等治療糖尿病的中藥復方?，F(xiàn)代藥理學研究表明,山茱萸中含有的環(huán)烯醚萜類(主要為馬錢素和莫羅苷)和三萜酸類(主要為熊果酸和齊墩果酸)是降糖作用的主要活性部位。本文通過不同的糖尿病模型較系統(tǒng)地觀察了山茱萸總萜的降血糖作用及對糖耐量的影響,為其進一步研究開發(fā)及機理研究提供了試驗依據(jù)。1實驗材料1.1ls-2000a型電子研制Sartorius分析天平:北京多利斯天平有限公司;TLS-2000A型電子秤:常熟雙杰測試儀器廠;722型光柵分光光度計:上海第三分析儀器廠;LD5-10低速離心機:北京醫(yī)用離心機廠;電熱恒溫水浴箱:淮陰醫(yī)療器械廠。1.2tfc類藥物山茱萸總萜(terpenesoffructuscorni,TFC)由江蘇吳中蘇藥醫(yī)藥開發(fā)有限公司提供。乙醇提取,大孔樹脂分離獲得萜類有效部位,經(jīng)HPLC分析,環(huán)烯醚萜和三萜酸的總含量為54%。提取物用0.5%CMC-Na溶液混懸到所需濃度備用。1.3聚丁二醇acarbose,4-l-1,3-甲基苯磺酸酯四氧嘧啶(alloxan)、鏈脲佐菌素(streptozotocin):Sigma公司,臨用前分別用生理鹽水、0.1mol·L-1檸檬酸溶液配成所需溶液;拜唐平(acarbose):北京拜耳醫(yī)藥保健有限公司;葡萄糖測定試劑盒:上海榮盛生物技術有限公司;胰島素放免試劑盒:北京華英生物技術研究所;糖化血清蛋白測定試劑盒、肝糖原測定試劑盒:南京建成生物工程研究所。1.4scxk-婦人場致scxk蘇2002-4008昆明種小鼠,雌雄各半,由江寧縣青龍山動物繁殖場提供,合格證號:SCXK(蘇)2002-0018。SD大鼠,雌雄各半,由南京軍區(qū)總醫(yī)院提供,合格證號:SCXK(蘇)2003-004。2實驗方法2.1灌胃給藥,多次灌胃小鼠禁食12h,眼眶靜脈叢取血,離心分離血清,按試劑盒方法測定空腹血糖值,將小鼠分為5組:陰性對照組(溶劑:0.5%CMC-Na溶液,下同)、陽性藥組(拜糖平30mg·kg-1)、山茱萸總萜高(100mg·kg-1)、中(50mg·kg-1)、低(25mg·kg-1)劑量組,每組12只。按0.2mL·10g-1體重連續(xù)灌胃給藥10d,每天一次。第10天禁食7h后灌胃給藥,同法測定給藥后1h、2h、4h、6h時的血糖值。2.2灌胃給藥后血糖值測定分組和給藥劑量同上,連續(xù)給藥4d。第4d禁食7h后灌胃給藥,給藥1h后灌胃給予淀粉5g·kg-1,給淀粉后同法測定0.5h、1h、2h的血糖值,并用梯形面積法計算曲線下面積。2.3山基層小鼠血糖檢測小鼠禁食16h后尾靜脈注射四氧嘧啶70mg·kg-1。72h后,測定空腹血糖值,血糖值高于16.7mmol·L-1者為高血糖小鼠。根據(jù)血糖水平將高血糖小鼠分為5組:模型對照組、陽性藥組、山茱萸總萜高、中、低劑量組,每組14只。另取14只同批次正常小鼠作為正常對照組。給藥劑量同上,同法連續(xù)給藥10d。第10d禁食7h后灌胃給藥,同法測定給藥后1h、2h、4h、6h時的血糖值。繼續(xù)給藥2d,即第12d禁食過夜,給藥1h后采血分離血清,按試劑盒方法測定胰島素水平。2.4模型大鼠分組、給藥及大鼠輸注后糖化血清蛋白gsp的檢測大鼠禁食24h后腹腔注射鏈脲佐菌素70mg·kg-1。72h后,測定空腹血糖值,血糖值高于16.7mmol·L-1者為高血糖大鼠。根據(jù)血糖水平將高血糖大鼠分為5組:模型對照組(溶劑)、陽性藥組(拜糖平20mg·kg-1)、山茱萸總萜高(60mg·kg-1)、中(30mg·kg-1)、低(15mg·kg-1)劑量組,每組10只。另取10只同批次正常大鼠作為正常對照組(溶劑)。按1mL·100g-1體重連續(xù)灌胃給藥12d。第12d禁食7h后灌胃給藥,同法測定給藥后1h、2h、4h、6h時的血糖值。繼續(xù)給藥2d,即第14d禁食過夜,給藥1h后采血分離血清,按試劑盒方法測定胰島素、糖化血清蛋白GSP的含量;取肝臟按試劑盒方法測定肝糖原含量。2.5統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)均用均值±標準差(xˉ±s)(xˉ±s)表示。用t檢驗進行顯著性檢驗。3結果3.1對正常大鼠血糖癥的影響陽性藥組和山茱萸總萜各劑量組空腹血糖值與陰性對照組比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。結果見表1。3.2各組降血糖的比較與陰性對照組相比,陽性藥組和山茱萸總萜高劑量組在0.5h、1h時能顯著或非常顯著地降低小鼠血糖值;中劑量組在1h時能顯著降低小鼠血糖值;陽性藥組、山茱萸總萜高、中劑量組在2h時也有降血糖的趨勢,但與陰性對照組相比均無統(tǒng)計學差異(P>0.05);低劑量組血糖值與陰性對照組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與陰性對照組相比,陽性藥組與山茱萸總萜高劑量組分別可顯著和極顯著地降低糖耐量曲線下面積;中劑量和低劑量組有降低糖耐量曲線下面積的趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。山茱萸總萜三個劑量組血糖值及糖耐量曲線下面積與陽性藥組相比均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。結果見表2。3.3影響四氧嘧啶糖尿病模型中小鼠血糖和胰島素水平的影響3.3.1各組小鼠血糖值的比較模型組較正常對照組血糖水平極顯著性升高。與模型對照組比較,陽性藥組和山茱萸總萜高劑量組在各時間點均能顯著或非常顯著地降低模型小鼠血糖值;中劑量組在1h、2h時和低劑量組在1h時能顯著降低模型小鼠血糖值。結果見表3。ΔΔP<0.01vsnormal;*P<0.05,**P<0.01vsmodel.3.3.2各組大鼠血清中胰島素含量的比較模型組較正常對照組胰島素水平極顯著性降低。與模型組比較,陽性藥組、山茱萸總萜高、中、低劑量組均能顯著提高血清中胰島素的含量。結果見表4。3.4影響鏈霉菌糖尿病模型中大鼠血糖、胰島素、糖化血、蛋白、肝糖原的影響3.4.1影響鏈霉菌糖尿病模型中大鼠血糖的形成3.4.2影響鏈霉菌的糖尿病模型中小鼠胰島素、糖化血清蛋白和肝糖原的水平4山基層對-糖苷酶抑制劑的降血糖作用糖尿病是一種臨床常見的慢性內(nèi)分泌代謝性疾病,病程長且復雜、難根治,并可導致心腦血管疾病、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜病變等嚴重的并發(fā)癥。隨著對糖尿病發(fā)病機制的深入研究,發(fā)現(xiàn)降糖藥物主要通過保護胰島β細胞或促進受損β細胞的修復、促進胰島素分泌以增加血清胰島素含量、增加胰島素敏感性、改善胰島素抵抗、延緩對葡萄糖的吸收、增加糖原的合成等途徑達到降低血糖的目的。山茱萸總萜可能通過保護胰島β細胞或促進受損β細胞的修復而提高血清胰島素水平,通過促進糖原合成而增加肝糖原含量。α-糖苷酶抑制劑是新型的治療糖尿病藥物,通過抑制腸道內(nèi)α-糖苷酶的活性而延緩葡萄糖的生成及吸收,減輕餐后高血糖現(xiàn)象。拜糖平是最早上市的α-糖苷酶抑制劑。有文獻報道,山茱萸中含有α-糖苷酶抑制劑的活性成分,故選用拜糖平作為陽性對照藥。山茱萸總萜可以提高正常小鼠糖耐量,作用強度與拜糖平相當,因此,推測可能對α-糖苷酶具有抑制作用,深入地研究正在進行中。近代研究認為,長期高血糖引起蛋白質發(fā)生非酶糖化反應,生成的糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)是導致糖尿病并發(fā)癥的重要因素。有文獻報道,山茱萸環(huán)烯醚萜總苷可以延緩糖尿病腎病和血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。糖化血清蛋白反映了過去1～2周平均血糖水平且不受當時血糖濃度的影響,同時也能反映藥物對體內(nèi)非酶糖化作用的影響。山茱萸總萜可以顯著降低糖尿病模型動物的血糖值和糖化血清蛋白的含量,提示其可能對糖尿病及其并發(fā)癥均有一定的治療作用。綜上,山茱萸總萜對糖尿病模型動物具有良好的降血糖活性,推測可能是通過提高糖耐量、保護胰島β細胞或促進受損β細胞的修復、增加肝糖原合成等多種途徑發(fā)揮作用,其確切的作用機制正在進一步研究中。模型組較正常對照組血糖水平極顯著性升高。與模型組比較,陽性藥組和山茱萸總萜高、中、低劑量組在各時間點均能顯著或非常顯著地降低模型大鼠血糖值。結果見表5。模型組與正常對照組胰島素水平、GSP含量