T-CRHA 040.2-2024 神經系統變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范 第2部分：人類腦脊液樣本采集與處理

ICS07.080CCSA40團體標準神經系統變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范第2部分：人類腦脊液樣本采集與處理SpecificationforbiobankconstructionofneurodegenerativedisePart2:Collectionandprocessingofhumancerebrospinalfluidbiomaterial中國研究型醫(yī)院學會發(fā)布IT/CRHA040.2—2024前言 Ⅱ Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術語和定義 4總體要求 5腦脊液樣本采集前準備 6腦脊液樣本采集操作規(guī)程 7腦脊液樣本處理操作規(guī)程 附錄A（資料性）腦脊液樣本采集的禁忌癥 4參考文獻 T/CRHA040.2—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是T/CRHA040《神經系統變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范》的第2部分。T/CRHA040—2024已經發(fā)布了以下部分：—第1部分：通用要求—第2部分：人類腦脊液樣本采集與處理—第3部分：死亡供者腦組織樣本的采集與處理請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中國研究型醫(yī)院學會臨床數據與樣本資源庫專業(yè)委員會提出。本文件由中國研究型醫(yī)院學會歸口。本文件起草單位：廣州金域醫(yī)學檢驗集團股份有限公司、中山大學附屬第三醫(yī)院、上海交通大學附屬仁濟醫(yī)院、中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所、同濟大學附屬東方醫(yī)院、廣東省人民醫(yī)院、廣州金域醫(yī)學檢驗中心有限公司、廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院、北京宣武醫(yī)院、南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院。本文件主要起草人：周紅梅、龍玲、何新月、唐聞晶、康曉楠、湯媛媛、毛志鋒、仇文穎、李慧源、吳景文、張玉虎、陳曲波、羅文婷、徐群、韓曉燕、程凱汀、蔡彥寧、孫海濤。T/CRHA040.2—2024腦脊液對中樞神經系統具有物理性支持、保護及維持內環(huán)境穩(wěn)定的作用，在各類神經系統疾病中，腦脊液能夠反映大腦特殊的病理生理學過程，研究其中的多種分子標志物對神經系統疾病科研與診療至關重要，已成為診斷中樞神經系統疾病的主要依據之一。近年來，在社會老齡化加重、人口平均壽命延長的背景下，老年神經變性病如阿爾茨海默病、帕金森病患者持續(xù)增加，我國很多科研與醫(yī)療機構建立了基于神經系統疾病的生物樣本庫，但針對腦脊液的采集與處理，國內尚未建立統一標準，樣本質量參差不齊，無法用于科研并實現轉化，造成資源的嚴重浪費?！渡窠浵到y變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范》旨在提供高質量的神經系統變性疾病生物樣本與數據，擬由三個部分組成：—第1部分：通用要求。目的在于規(guī)定在符合倫理與法規(guī)的框架下標準化進行科研立項、供者入組、樣本與信息采集、處理與質量控制等，從而推動我國神經病學與轉化醫(yī)學的發(fā)展?！?部分：人類腦脊液樣本采集與處理。目的在于規(guī)范人類腦脊液樣本采集、處理標準化操作過程，為神經系統疾病發(fā)生機制、診療、藥物研發(fā)和疾病防控等研究與應用提供良好的物質基礎和技術支持，促進國內外交流與合作，推動我國神經病學與轉化醫(yī)學的發(fā)展?！?部分：死亡供者腦組織樣本的采集與處理。目的在于規(guī)范死亡供者腦組織樣本采集、處理標準化操作過程，有助于了解神經系統變性疾病機制、發(fā)現風險基因、新的診斷和預后標志物以及潛在的藥物靶點，對推動疾病的診療、藥物研發(fā)和疾病防控具有重要意義，也將為中國“腦計劃”提供不可或缺的戰(zhàn)略資源支撐。神經系統變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范主要涉及通用要求，人類腦脊液樣本的采集與處理和死亡供者腦組織樣本的采集與處理。1T/CRHA040.2—2024神經系統變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范第2部分：人類腦脊液樣本采集與處理本文件規(guī)定了腦脊液樣本采集與處理的總體要求、腦脊液樣本前準備、采集與處理操作規(guī)程。本文件適用于涉及人類腦脊液樣本采集與處理的生物樣本庫以及基于腦脊液樣本進行神經系統變性等疾病研究的所有機構。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T37864—2019生物樣本庫質量和能力通用要求GB/T39707—2020醫(yī)療廢物處理處置污染控制標準GB/T39767—2021人類生物樣本管理規(guī)范GB/T40364—2021人類生物樣本庫基礎術語WS/T662—2020臨床體液檢驗技術要求T/CRHA040.1—2024神經系統變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范第1部分：通用要求T/CRHA040.3—2024神經系統變性疾病生物樣本與數據庫建設規(guī)范第3部分：死亡供者腦組織樣本的采集與處理3術語和定義GB/T40364—2021界定的術語和定義適用于本文件。4總體要求4.1腦脊液樣本的采集與處理應遵循T/CRHA040.1—2024的規(guī)定。4.2腦脊液采集應根據個體差異確定安全采量，通常總采集量宜不小于12mL，應采集多管分別滿足常規(guī)生化檢測、微生物、細胞學檢測及生物樣本庫的前瞻性保藏，腦脊液常規(guī)檢驗按WS/T662—2020要求進行。注：開始1mL～2mL腦脊液用于常規(guī)分析評估，后續(xù)收集腦脊液樣本到聚丙烯（polypro4.3腦脊液應在采集后2h內完成分離、分裝與保存，分裝應在生物安全柜中進行，避免交叉污染。4.4應根據研究需求分別存儲經處理后的腦脊液上清和/或沉淀，并記錄腦脊液樣本的凍融次數，反復凍融次數應小于3次。4.5腦脊液應使用帶螺帽、無菌聚丙烯材質（polypropylene，PP）管保存并做唯一性標識便于檢索。4.6肉眼可見的血液污染或污染的紅細胞計大于500個/μL腦脊液不應作為樣本庫保存的樣本。2T/CRHA040.2—20244.7應完整記錄腦脊液體樣本的標準分析前變量，包括但不僅限于：a）采集時間、采集量、采集部位；b）主要添加劑；c）離心前延遲時間、離心次數、離心速度與時間；d）存儲容器與長期存儲時間。4.8新鮮腦脊液的轉運應符合GB/T37864-2019中7.4的規(guī)定，并根據分析項目、分析方法等的不同選擇在低溫或室溫進行轉運。4.9凍存的腦脊液樣本應采用液氮或干冰運輸。4.10應對腦脊液樣本進行質量控制，并根據目標標志物建立并實施相應質量控制（QualityControl，QC）方案、規(guī)定QC的頻次以評估腦脊液的質量，保留QC過程和結果的記錄，以證明樣本能滿足預期要求。4.11因不當操作或質量不合格所致腦脊液的報廢處置與管控應符合GB/T39767—2021、GB/T39707—2020的規(guī)定。5腦脊液樣本采集前準備5.1應審查和確認知情同意書已簽署，并對供者進行評估以排除腰椎穿刺的禁忌癥（采集禁忌癥詳見附錄A），并告知供者腰椎穿刺的風險及相關注意事項。5.2核對供者姓名、住院號等信息以確認供者身份信息保持一致。5.3準備腰穿包、穿戴個人防護裝備，至少兩層手套，宜在一次性手套下佩戴耐切割手套。5.4應根據供者體型選擇合適的腰椎穿刺針，肥胖者宜使用長度大于90mm的穿刺針，一般體型者使用長度小于90mm的穿刺針。5.5選擇標準型號為21G～23G的非創(chuàng)傷性針頭進行腰椎穿刺。6腦脊液樣本采集操作規(guī)程6.1活體供者6.1.1活體供者腦脊液采集按臨床腰椎穿刺術標準化技術規(guī)范實施，宜選擇L3～L4腰椎棘突間隙作為穿刺點，經消毒、麻醉、行腰椎穿刺、測壓、收集腦脊液并進行術后護理。6.1.2腦室引流的患者可直接從腦室外引流管的接入口獲取腦脊液，具體實施步驟參照《神經外科腦脊液外引流中國專家共識（2018版）》。6.2死亡供者6.2.1在尸檢過程中收集腦脊液應在病理學家詳細檢查大腦并記錄其特征和所有異常后進行。6.2.2對于需要進行完整尸檢的供者，或在局部解剖中樞神經系統的情況下［有或沒有附加器官系統和（或）體腔限制在移除顱骨后直接從側腦室獲取（具體操作參照T/CRHA040.3—2024中第5章、第6章規(guī)定進行）。6.2.3將穿刺針插入大腦半球背側的副矢狀面（正中線正外側）至合適的深度，直至將注射器的柱塞縮回導致液體流出，獲取腦脊液。3T/CRHA040.2—20246.2.4若尸檢不對顱內內容物進行評估（如顱骨和顱底、硬腦膜、軟腦膜、腦、垂體、顱神經），仍可以通過腰椎穿刺收集腦脊液且穿刺的位置可不必局限于脊髓的腰部區(qū)域。6.2.5腦脊液采集結束后應徹底清潔工作站、沖洗使用過的手術器械，并進行手消毒。一次性穿刺針應放在指定的鋒利物容器內，所有個人防護設備脫下后按醫(yī)療廢棄物進行統一處置。7腦脊液樣本處理操作規(guī)程7.1采集后腦脊液宜控制在30min內離心（離心力2000×g，室溫10min）。7.2將腦脊液等量分裝到PP凍存管中，分裝量宜按每支凍存管0.2mL、0.5mL或1.0mL，最小分裝量為0.1mL；腦脊液分裝量應達每支凍存管總容量的75%，以防止冷凍干燥。7.3分裝結束后，所有腦脊液樣本應分配唯一性二維碼進行標識，并確保樣本與研究對象的基本信息、采樣信息及隨訪信息等可追溯。7.4將腦脊液于-80℃以下保存，宜將多個復份樣本存儲在不同的位置，實現異地備份保存。4T/CRHA040.2—2024附錄A（資料性）腦脊液樣本采集的禁忌癥腦脊液樣本采集的禁忌癥如下：a）具有腫塊效應的顱內占位性病變以及后顱窩腫塊。因CSF壓力升高而引起的顱內壓升高，無論采樣的CSF體積如何，都會導致小腦扁桃體突出。在實施腰穿留取腦脊液時，應要考慮是否有顱檢查；影像學上如腦室大小正常且沒有移位，后顱凹沒有占位征象，方可腰穿取腦脊液，否則不能做腰穿。b）穿刺部位的局部皮膚感染。穿刺部位有化膿性感染灶的患者，通過受感染組織進行腰穿會增加中樞神經系統感染的風險。c）Arnold-Chiari畸形。此類患者在腰穿時應謹慎，即使采集少量腦脊液，Arnold-Chiari畸形患者也容易發(fā)展為扁桃體疝。d）未糾正的出血風險（如血小板減少、凝血障礙、使用抗凝藥物）。應在近期的血液檢測值達到要求時方可行腰穿，如凝血國際標準化比值（INR）<1.5，血小板計數>40×109/L，Quick's試驗>50%。e）開放性顱腦損傷或有腦脊液漏者。f）先天性脊柱異常和脊髓異常（如脊髓栓系）。在先天性脊柱畸形的情況下，腰穿程序可以通過透視、超聲或計算機斷層掃描進行引導。5T/CRHA040.2—2024參考文獻[1]許紹強,周道銀,吳茅等.腦脊液細胞形態(tài)學檢驗中國專家共識（2020）[J].現代檢驗醫(yī)學雜志,2020,35(06):9-11+77.[2]中華醫(yī)學會神經外科學分會,中國神經外科重癥管理協作組.神經外科腦脊液外引流中國專家共識(2018版)[J].中華醫(yī)學雜志,2018,98(21):1646-1649.[3]EngelborghsS,NiemantsverdrietE,StruyfsH,etal.Consensusguidelinesforlumbarpunctureinpatientswithneurologicaldiseases[J].AlzheimersDement(Amst).2017,8:111-126.[4]TeunissenCE,PetzoldA,BennettJL,etal.Aconsensusprotocolforthestandardizationofcerebrospinalfluidcollectionandbiobanking[J].Neurology.2009,73(22):1914-1922.[5]BestPracticesforRepositories?Coll