第六章芳酸類非甾體抗炎藥物分析(2)

1、第六章 芳酸類非甾體抗炎藥物的分析,主要內(nèi)容：,1 典型藥物分類與理化性質(zhì) 2 鑒別試驗(yàn) 3 特殊雜質(zhì)檢查 4 含量測定 5 體內(nèi)藥物分析,醇羥基,酚羥基,醇,酚,羧酸,芳酸,酯,游離羧基,游離羧基,按結(jié)構(gòu)分類,水楊酸類,鄰氨基苯甲酸類,芳酸類非甾體藥物：分子結(jié)構(gòu)中含 有取代苯基的一類羧酸化合物。,鄰氨基苯乙酸類,芳基丙酸類,吲哚乙酸類,苯并噻嗪甲酸類,其他非甾體抗炎藥,1 典型藥物分類與理化性質(zhì),一、水楊酸類,典型藥物,水楊酸 (salicylic acid),游離羧基,酚羥基，發(fā)生三氯化鐵反應(yīng),苯環(huán),游離羧基,阿司匹林 (aspirin),酯鍵,苯環(huán),pKa = 3.49,直接中和法 兩步

2、滴定法,水解后生成水楊酸雜質(zhì),水解后才發(fā)生三氯化鐵反應(yīng),雙水楊酯,甲芬那酸,二、鄰氨基苯甲酸類,有強(qiáng)烈綠色熒光,三、鄰氨基苯乙酸類,雙氯芬酸鈉,有刺鼻感,布洛芬,ibuprofen,四、芳基丙酸類,五、吲哚乙酸類,吲哚美辛,六、苯并噻嗪甲酸類,吡羅昔康,其他非甾體抗炎藥,對乙酰氨基酚,結(jié)構(gòu)分析,包括：芳酸、芳酸酯、芳酸鹽 共同點(diǎn)： 苯環(huán)、羧基 不同點(diǎn)：不同的取代基（如酚羥基、芳伯氨基、鹵原子、雜環(huán)等）,主要理化性質(zhì),1.性狀：固體，有一定的熔點(diǎn)。 2.溶解性：幾乎不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑。堿金屬鹽易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。,3.酸性：,芳酸具游離羧基，呈酸性，其pKa在36之間，屬中等強(qiáng)度的酸

3、或弱酸； X、NO2、OH等吸電子取代基存在使酸性增強(qiáng)。水楊酸阿司匹林苯甲酸； CH3、NH2等斥電子取代基存在使酸性減弱。,鄰位取代間位、對位取代，尤其是鄰位取代酚羥基，由于形成分子內(nèi)氫健，酸性大為增強(qiáng)。 芳環(huán)取代的脂肪酸類，酸性較弱。如雙氯芬酸、布洛芬等。,4.易水解 具有酯鍵和酰胺鍵的藥物均可發(fā)生水解。 可用剩余堿量法測定含量，如美洛昔康。 5.紫外、紅外特征吸收光譜 分子中具有苯環(huán)和特征官能團(tuán)，具有紫外和紅外特征吸收。 6.基團(tuán)或元素特性 酚羥基、芳伯氨基、鹵素、硫元素等。,2 鑒別試驗(yàn),一、與三氯化鐵的反應(yīng),1.水楊酸反應(yīng),紫堇色,a.反應(yīng)極為靈敏。,b.反應(yīng)適宜的pH值為46 ，在

4、強(qiáng)酸性下配合 物分解。,阿司匹林,+,+,+Fecl3,紫堇色配位化合物,水解后鑒別,對乙酰氨基酚 藍(lán)紫色,2.酚羥基反應(yīng),二、縮合反應(yīng),硫酸,二硝基苯肼,酮洛芬,腙,橙色,三、重氮化偶合反應(yīng),芳香第一氨的反應(yīng),HCl,Ar-NH2,重氮鹽,偶合,紅色,對乙酰氨基酚 貝諾酯,貝諾酯,水解,重氮化,偶合,四、氧化反應(yīng),甲芬那酸,黃色(綠色熒光)(JP13),K2Cr2O7,深藍(lán)色棕綠色,H2SO4,五、水解反應(yīng),1.阿司匹林,酯結(jié)構(gòu)水解,2.雙水楊酯,雙水楊酯,NaOH,煮沸,水楊酸鈉,稀HCl,水楊酸,（白色）,沉淀在醋酸銨試液中可溶解,六、特征元素的分析,1.氯元素 雙氯芬酸鈉+碳酸鈉 熾灼

5、灰化 加水煮沸 過濾 濾液顯氯化物鑒別反應(yīng) 2.硫元素 美洛昔康于試管中熾灼，產(chǎn)生的氣體能使?jié)?潤的醋酸鉛試紙顯黑色。,1.紫外分光光度法,最大吸收波長（和/或最小吸收波長） 吸光度法 吸光度比值法,七、光譜法,對照圖譜對照,藥品紅外光譜集,水楊酸的紅外吸收光譜圖,2.紅外分光光度法,八、薄層色譜法 比較供試品溶液與對照品溶液的比移值,九、HPLC 比較供試品溶液與對照品溶液的保留時間,3 特殊雜質(zhì)檢查,阿司匹林中游離水楊酸及有關(guān)物質(zhì)的檢查,1.阿司匹林中游離水楊酸的檢查,來源：生產(chǎn)過程中乙酰化不完全，或貯藏過程中 水解產(chǎn)生 。,ChP2005方法：鐵鹽比色法（稀硫酸鐵銨 ）,原理：阿司匹林結(jié)

6、構(gòu)中無酚羥基，不與高鐵鹽反應(yīng); 水楊酸有酚羥基，則可與高鐵反應(yīng)呈紫堇色。,缺點(diǎn)：供試品溶液制備過程中阿司匹林可水解生成 新的游離水楊酸。 ChP2010采用HPLC檢查。 原料藥和制劑均需檢查游離水楊酸，限量各不相同。,2.阿司匹林中有關(guān)物質(zhì)的檢查,指除游離水楊酸外的合成原料苯酚及其他合成副產(chǎn)物。 色譜條件：與檢查“游離水楊酸”的流動相不同。 要求：除水楊酸峰外，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（0.5%） 。,雜質(zhì)對照品法,方法： 供試品供試品溶液 雜質(zhì)對照品對照品溶液,供試品,對照品,判斷：供試品中所含雜質(zhì)斑點(diǎn)不得超過相應(yīng)的雜質(zhì)對照斑點(diǎn)。 優(yōu)點(diǎn)：同一物質(zhì)，同一Rf值比較，準(zhǔn)確度

7、高、直觀性強(qiáng)。 缺點(diǎn)：需要雜質(zhì)對照品。,2.主成分自身對照法（高低濃度對比法）,方法：,（）,判斷：,供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)不得深于對照溶液的主斑點(diǎn)（或熒光強(qiáng)度）,4 含量測定,本類藥物原料藥的含量測定：酸堿滴定法 制劑的含量測定：紫外-可見分光光度法和HPLC法,一、酸堿滴定法,1.直接滴定法阿司匹林,原理: 阿司匹林分子中有游離羧基，具弱酸性，可用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液直接滴定。,方法: 取本品約0.4g, 精密稱定, 加中性乙醇 (對 酚酞指示液顯中性) 20mL溶解后, 加酚 酞指示液3滴, 用氫氧化鈉滴定(0.1mol/L) 滴定。每 1ml的氫氧化鈉滴定(0.1mol/L) 相當(dāng)于18.02m

8、g的C9H8O4 。,生成的鈉鹽是強(qiáng)堿弱酸鹽，偏堿性。,（2）指示劑為何選用酚酞？,討論:（1）溶劑為何使用中性乙醇？,使用乙醇：a.使供試品易于溶解;b.防止酯水解 使用中性乙醇：乙醇對酚酞顯酸性，扣除乙醇的 酸性對測定的影響。,（3）操作事項(xiàng),滴定過程中不斷振搖，防止局部水解 。,（4）特點(diǎn) 操作簡便，但缺乏專屬性，酸性物質(zhì)有干擾。,不適合用于水楊酸含量較高的樣品測定。,（5）滴定度的計(jì)算,2. 剩余量滴定法,美洛昔康有烯醇式結(jié)構(gòu)，顯酸性，可用氫氧化鈉滴定液滴定，但在一般溶劑中溶解性差。用定量過量的氫氧化鈉滴定液溶解后，用鹽酸滴定液回滴定剩余的氫氧化鈉。,美洛昔康,【含量測定】取本品約0.

9、4g，精密稱定，精密加氫氧化鈉滴定液（0. lmol/L)25ml，微溫溶解，放冷，加中性乙醇（對溴麝香草酚藍(lán)指示液顯中性）100ml ，加溴麝香草酚藍(lán)指示液10滴，用鹽酸滴定液（0.lmol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml氫氧化鈉滴定液（0.lmol/L)相當(dāng)于35.14mg的 C14H13N3O4S2。,3. 水解后剩余滴定法阿司匹林,原理: 阿司匹林酯結(jié)構(gòu)在堿性條件下易于水解, 加入定量過量的氫氧化鈉滴定液, 加熱 水解, 剩余的堿用硫酸滴定液回滴定。,方法：取本品約1.5g，精密稱定，置燒杯中，加氫氧化鈉滴定液(0.5mol/L)50.0ml，混合，緩緩煮沸10min

10、 加酚酞指示液，用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml的氫氧化鈉滴定液(0.5mol/L)相當(dāng)于45.04mg的C9H8O4 。,討論：（1）為何做空白試驗(yàn)？如何操作？,氫氧化鈉在加熱時易吸收CO2，生成碳酸鹽。 使測定結(jié)果偏高。 不加入樣品，其余操作步驟和加樣一致。,（2）滴定度如何計(jì)算？,阿司匹林：氫氧化鈉=1:2,T=0.5180.161/2=45.04(mg/ml),F：硫酸滴定液的校正因子,4. 兩步滴定法ChP2005 阿司匹林片和腸溶片,原理: 阿司匹林片中加入少量穩(wěn)定劑（酒石酸或枸櫞酸）, 制劑過程中分解產(chǎn)物（水楊酸、醋酸）均消耗氫氧化鈉。

11、因此，不能采用直接滴定法，采用先“中和”再“水解滴定”的兩步滴定法。,第一步 中和,酒石酸 枸櫞酸 水楊酸 醋酸,+NaOH ,酒石酸鈉 枸櫞酸鈉 水楊酸鈉 醋酸鈉,第二步 水解后剩余滴定,反應(yīng)摩爾比為11,+NaOH,定量過量,方法,中和: 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取片粉適量(約相當(dāng)于阿司匹林0.3 g)，置錐形瓶中，加入中性乙醇20ml，振搖使溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色。 此時中和了存在的游離酸，阿司匹林也同時成為鈉鹽。,水解和測定: 在中和后的供試品溶液中，精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15mi

12、n并時時振搖，迅速放冷置室溫，用硫酸滴定液 (0.05mol/L)滴定，結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每 1ml氫氧化鈉滴定液 (0.1mol/L) 相當(dāng)于18.02 mg的C9H8O4 。,討論: （1）優(yōu)點(diǎn) 消除了酸性雜質(zhì)的干擾,（2）反應(yīng)的摩爾比 阿司匹林:氫氧化鈉1:1 T=0.1180.16=18.02mg/ml,（3）含量計(jì)算,F：硫酸滴定液的校正因子,5. 非水溶液滴定法,吡羅昔康具有吡啶環(huán)，顯堿性。 【含量測定】取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸20ml使溶解，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.lmol/L)滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每l ml 高氯酸滴定液（0 .lmol/ L ) 相當(dāng)于 33.14 mg的C15H13N3O4S。,二、紫外-可見分光光度法,1. 直接紫外-可見分光光度法,原理:藥物在某一波長處有最大吸收，采用 對照品法或吸收系數(shù)法進(jìn)行含量測定。,A,C L,USP（29）測定阿司匹林膠囊的含量?？蓪⑺酒チ峙c水楊酸和其他中性堿性雜質(zhì)分離。,2. 柱分配色譜紫外分光光度法,1.色譜柱的制備：,硅藻土3g和新制碳酸氫鈉液（112）2ml的混合填充劑,2.對照溶液：用冰醋酸氯仿溶液（1100） 供試液：樣品的氯仿溶液鹽酸-甲醇（150 ）,3.樣品上樣、氯仿洗滌,乙酰水楊酸和水