實(shí)驗(yàn)一 細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查.ppt

1、實(shí)驗(yàn)一 細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查,生物安全,1、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大褂，離室時脫下反折；無菌操作時必須戴口罩。 2、不必要物品勿帶入實(shí)驗(yàn)室，必要的文具、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)和筆記本應(yīng)放在指定的操作區(qū)。 3、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止帶入飲食，抽煙，不得高聲談笑或隨便走動。 4、需培養(yǎng)的物品應(yīng)做好標(biāo)記放在指定地點(diǎn)。用過的有菌器材必須放在消毒缸內(nèi)，小心處理傳染材料、培養(yǎng)物和污染的物品。 5、避免任何有菌材料的濺出，若不甚污染工作臺、手、眼、衣服和地面等處，應(yīng)立即報告老師及時適當(dāng)處理。 6、實(shí)驗(yàn)完畢后物歸原處，并清潔桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗凈后，關(guān)閉水、電、煤氣和門窗方可離開實(shí)驗(yàn)室。,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1 掌握臨床微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)則，生

2、物安全及其它注意事項(xiàng)。 2 掌握顯微鏡油鏡的使用和保護(hù)。 3 熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)和各部分的功能。 4 不染色和各種染色標(biāo)本的顯微鏡觀察。 5 細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的染色與觀察。,【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】,光學(xué)顯微鏡的使用 不染色標(biāo)本的檢查 革蘭氏染色和細(xì)菌基本形態(tài)觀察 細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)染色和觀察,形態(tài)學(xué)檢查的意義,細(xì)菌鑒定的重要手段，有助于細(xì)菌的初步分群 是決定采用何種生化反應(yīng)的重要提示 初步診斷 結(jié)核涂片 淋球菌涂片,顯微鏡的使用,先用低倍鏡找出標(biāo)本位置，再轉(zhuǎn)用油鏡 粗調(diào) + 微調(diào) 香柏油的作用：玻片和空氣密度不同，使部分光線經(jīng)空氣折射后不能進(jìn)入透鏡，而香柏油的折光率與玻璃相近，可使進(jìn)入油鏡的光線增多，視野光度增強(qiáng)，

3、物像清晰 鏡頭要保持清潔（可用二甲苯擦拭鏡頭）,形態(tài)學(xué)檢查的方法,不染色標(biāo)本檢查法 染色標(biāo)本檢查法 特殊染色檢查法,不染色標(biāo)本檢查法1,壓片法（壓滴法） 1. 用接種環(huán)分別取細(xì)菌23環(huán)，置于潔凈載玻片中央 2. 輕輕覆上蓋玻片 3. 油鏡下觀察,不染色標(biāo)本檢查法2,懸滴法,染色標(biāo)本檢查法,染色基本步驟： 涂片： 干燥：室溫自然干燥 固定：殺死細(xì)菌; 使菌體與玻片粘附; 菌體蛋白變性易著色 染色：革蘭染色 鏡檢,革蘭染色-基本步驟,a)初染：結(jié)晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min； c)脫色：95%乙醇 至無紫色脫落為止； d)復(fù)染：石碳酸復(fù)紅 30 s，自然干燥后鏡檢,革蘭染色-結(jié)果

4、與注意事項(xiàng),結(jié)果判斷：紫色為革蘭陽性菌、紅色為革蘭陰性菌 注意事項(xiàng)： 涂片不宜過厚 固定不宜過熱 脫色是關(guān)鍵：脫色不夠：革蘭陰性菌 革蘭陽性菌 脫色過度：革蘭陽性菌 革蘭陰性菌 1824 h 菌齡最佳 已知金葡與大腸作為陽性和陰性對照,特殊染色（示教）,鞭毛染色 芽胞染色 莢膜染色,鞭毛染色-套組內(nèi)容及規(guī)格,鞭毛染色-工作液配制,根據(jù)使用量將A液、B液、C液等比例混合，并置于工作液過濾瓶內(nèi)，混合均勻靜置2 h 后方可使用 工作液28 約可保存23天,鞭毛染色-玻片的處理,鞭毛染色成功與否，與玻片的潔凈度有非常密切的關(guān)系 取新的載玻片，先用洗潔精清洗干凈后，再浸泡在3%鹽酸酒精2天以上，使用時從

5、酸性酒精中取出，并用純水沖洗干凈，再以干凈紗布擦干或自然干燥后使用,鞭毛染色-涂片的制備,將菌種接種在肉湯管中，經(jīng)24 h 37孵育后離心，倒掉上清液，用接種環(huán)沾取沉淀物一環(huán)置于玻片的一端，并將玻片傾斜，使菌液自然流動至玻片的另一端，室溫下自然干燥,鞭毛染色-操作方法,滴加工作液于玻片上，染色1015 min 將玻片微傾斜，用蒸餾水一滴滴沖洗干凈 將玻片直立使水分流盡，自然晾干，鏡檢 結(jié)果：菌體及鞭毛均為紅色,芽胞染色-染液規(guī)格,石碳酸復(fù)紅液 20 ml 堿性品紅 脫色液 20 ml 乙醇 堿性美藍(lán)液 20 ml 亞甲藍(lán),芽胞染色-染色步驟與方法,將有芽胞細(xì)菌制成涂片，自然干燥后加熱固定 滴加石碳酸復(fù)紅液于涂片上，并弱火加熱，使染液冒蒸氣約5 min，冷后水洗，并用脫色液脫色2 min，水洗 堿性美藍(lán)復(fù)染30 s，水洗，干后用油鏡鏡檢 結(jié)果：芽胞呈紅色，