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文檔簡介
1、實(shí)驗(yàn)一 細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查,生物安全,1、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大褂,離室時(shí)脫下反折;無菌操作時(shí)必須戴口罩。 2、不必要物品勿帶入實(shí)驗(yàn)室,必要的文具、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)和筆記本應(yīng)放在指定的操作區(qū)。 3、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止帶入飲食,抽煙,不得高聲談笑或隨便走動(dòng)。 4、需培養(yǎng)的物品應(yīng)做好標(biāo)記放在指定地點(diǎn)。用過的有菌器材必須放在消毒缸內(nèi),小心處理傳染材料、培養(yǎng)物和污染的物品。 5、避免任何有菌材料的濺出,若不甚污染工作臺(tái)、手、眼、衣服和地面等處,應(yīng)立即報(bào)告老師及時(shí)適當(dāng)處理。 6、實(shí)驗(yàn)完畢后物歸原處,并清潔桌面;肥皂洗手、消毒液浸泡洗凈后,關(guān)閉水、電、煤氣和門窗方可離開實(shí)驗(yàn)室。,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1 掌握臨床微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)則,生
2、物安全及其它注意事項(xiàng)。 2 掌握顯微鏡油鏡的使用和保護(hù)。 3 熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)和各部分的功能。 4 不染色和各種染色標(biāo)本的顯微鏡觀察。 5 細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的染色與觀察。,【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】,光學(xué)顯微鏡的使用 不染色標(biāo)本的檢查 革蘭氏染色和細(xì)菌基本形態(tài)觀察 細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)染色和觀察,形態(tài)學(xué)檢查的意義,細(xì)菌鑒定的重要手段,有助于細(xì)菌的初步分群 是決定采用何種生化反應(yīng)的重要提示 初步診斷 結(jié)核涂片 淋球菌涂片,顯微鏡的使用,先用低倍鏡找出標(biāo)本位置,再轉(zhuǎn)用油鏡 粗調(diào) + 微調(diào) 香柏油的作用:玻片和空氣密度不同,使部分光線經(jīng)空氣折射后不能進(jìn)入透鏡,而香柏油的折光率與玻璃相近,可使進(jìn)入油鏡的光線增多,視野光度增強(qiáng),
3、物像清晰 鏡頭要保持清潔(可用二甲苯擦拭鏡頭),形態(tài)學(xué)檢查的方法,不染色標(biāo)本檢查法 染色標(biāo)本檢查法 特殊染色檢查法,不染色標(biāo)本檢查法1,壓片法(壓滴法) 1. 用接種環(huán)分別取細(xì)菌23環(huán),置于潔凈載玻片中央 2. 輕輕覆上蓋玻片 3. 油鏡下觀察,不染色標(biāo)本檢查法2,懸滴法,染色標(biāo)本檢查法,染色基本步驟: 涂片: 干燥:室溫自然干燥 固定:殺死細(xì)菌; 使菌體與玻片粘附; 菌體蛋白變性易著色 染色:革蘭染色 鏡檢,革蘭染色-基本步驟,a)初染:結(jié)晶紫 1 min; b)媒染:碘液 1 min; c)脫色:95%乙醇 至無紫色脫落為止; d)復(fù)染:石碳酸復(fù)紅 30 s,自然干燥后鏡檢,革蘭染色-結(jié)果
4、與注意事項(xiàng),結(jié)果判斷:紫色為革蘭陽性菌、紅色為革蘭陰性菌 注意事項(xiàng): 涂片不宜過厚 固定不宜過熱 脫色是關(guān)鍵:脫色不夠:革蘭陰性菌 革蘭陽性菌 脫色過度:革蘭陽性菌 革蘭陰性菌 1824 h 菌齡最佳 已知金葡與大腸作為陽性和陰性對(duì)照,特殊染色(示教),鞭毛染色 芽胞染色 莢膜染色,鞭毛染色-套組內(nèi)容及規(guī)格,鞭毛染色-工作液配制,根據(jù)使用量將A液、B液、C液等比例混合,并置于工作液過濾瓶內(nèi),混合均勻靜置2 h 后方可使用 工作液28 約可保存23天,鞭毛染色-玻片的處理,鞭毛染色成功與否,與玻片的潔凈度有非常密切的關(guān)系 取新的載玻片,先用洗潔精清洗干凈后,再浸泡在3%鹽酸酒精2天以上,使用時(shí)從
5、酸性酒精中取出,并用純水沖洗干凈,再以干凈紗布擦干或自然干燥后使用,鞭毛染色-涂片的制備,將菌種接種在肉湯管中,經(jīng)24 h 37孵育后離心,倒掉上清液,用接種環(huán)沾取沉淀物一環(huán)置于玻片的一端,并將玻片傾斜,使菌液自然流動(dòng)至玻片的另一端,室溫下自然干燥,鞭毛染色-操作方法,滴加工作液于玻片上,染色1015 min 將玻片微傾斜,用蒸餾水一滴滴沖洗干凈 將玻片直立使水分流盡,自然晾干,鏡檢 結(jié)果:菌體及鞭毛均為紅色,芽胞染色-染液規(guī)格,石碳酸復(fù)紅液 20 ml 堿性品紅 脫色液 20 ml 乙醇 堿性美藍(lán)液 20 ml 亞甲藍(lán),芽胞染色-染色步驟與方法,將有芽胞細(xì)菌制成涂片,自然干燥后加熱固定 滴加石碳酸復(fù)紅液于涂片上,并弱火加熱,使染液冒蒸氣約5 min,冷后水洗,并用脫色液脫色2 min,水洗 堿性美藍(lán)復(fù)染30 s,水洗,干后用油鏡鏡檢 結(jié)果:芽胞呈紅色,
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