中藥含量測定技術(shù).ppt

1、1,第四章-復(fù)習(xí),雜質(zhì) 概念 來源 分類 重金屬 概念 檢查原因 檢查方法 干擾物排除 最終產(chǎn)物 砷鹽 檢查原因 藥典收載方法 檢查中酸性SnCl2作用？,2,中藥制劑含量測定技術(shù),3,方法,化學(xué)方法 *儀器分析方法,有效成分 指標(biāo)性成分 毒性成分,分析成分,中藥制劑含量測定技術(shù),4,高效液相色譜法薄層掃描法可見-紫外分光光度法氣相色譜法原子吸收分光光度法,方法,儀器分析方法,滴定法浸出物測定法重量法揮發(fā)油測定法總氮測定法,化學(xué)方法,5,儀器分析法之,紫外-可見分光光度法,6,A:吸光度 K:吸收系數(shù) C:溶液濃度 L:液層厚度,基本原理:Lamber-Beer定律,紫外-可見分光光度法,7,

2、吸收系數(shù)兩種表示法： 摩爾吸收系數(shù)： 一定，C=1mol/L，L=1cm時的吸光度 百分含量吸收系數(shù)/ 比吸收系數(shù) 一定，C=1g/100ml，L=1cm時的吸光度,紫外-可見分光光度法,*,8,紫外-可見分光光度法,吸收光譜 （吸收曲線）： 定性依據(jù): 吸收峰max 吸收谷min 肩峰sh 定量依據(jù):吸收峰max,9,光源,單色器,樣品池,檢測器,記錄裝置,紫外|可見分光光度計(jì),數(shù)據(jù)處理,報(bào)告書,10,鎢燈或鹵鎢燈：可見光源 3501000nm 氫燈或氘燈：紫外光源 200360nm,吸收池： 玻璃-能吸收UV光，僅適用于可見光區(qū) 石英-不能吸收紫外光，適用于紫外和可見光區(qū) 要求：匹配性（對

3、光的吸收和反射應(yīng)一致）,光 源,紫外-可見分光光度法,11,測定波長的選擇：max 吸光度讀數(shù)范圍的選擇：A=0.30.7,UV 吸光度測量的條件選擇,樣,參,調(diào)節(jié)光路,光學(xué)性質(zhì)和厚度相同,樣品池,樣品溶液,，,參比池,空白溶液,樣品池,參比池,配制樣品的溶劑,空白溶液,A,T,A,+,=,=,+,%,100,0,12,樣品A值,UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法,對照品溶液：一系列不同濃度的對照品溶液,相同條件下,A為縱坐標(biāo)，C為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)曲線（工作曲線）,樣品的濃度和含量,一系列A值,13,標(biāo)準(zhǔn)曲線又稱工作曲線。如吸光光度法，在繪制時，首先在一定條件下配制一系列具有不同已知濃度吸光物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后在確

4、定的波長和光程等條件下，分別測量系列溶液的吸光度，繪制A-c曲線，從而得到一條通過原點(diǎn)的直線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)需要對某未知液的濃度cx進(jìn)行測定時，只需要在相同條件下測得未知液的吸光度Ax，就可由cx=Ax/b計(jì)算得出或直接在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得cx。在實(shí)際操作中，應(yīng)注意調(diào)整cx的大小，使其對應(yīng)的Ax處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線范圍（線性范圍）之內(nèi)。,UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法,14,UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法,標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線部分所對應(yīng)的被測物質(zhì)濃度（或含量）的范圍稱為該方法的線性范圍。,15,標(biāo)準(zhǔn)曲線是依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度（或含量）和其相對應(yīng)的相應(yīng)信號測量值來繪制的。如濃度（或含量）分別為x1,x2xn，其相應(yīng)信號(吸光度)的測量值

5、分別為y1,y2yn，用簡單的方法很難繪制出能準(zhǔn)確反映y與x之間關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通常，用“一元線性回歸法”來給出y與x的關(guān)系式 y=a+bx （1-1） 式中其中 式(1-1)稱為一元線性回歸方程，b稱為回歸系數(shù)，即回歸直線的斜率，a為截距。,UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法,16,當(dāng)兩個變量之間直線關(guān)系不夠嚴(yán)格，數(shù)據(jù)的偏離較嚴(yán)重時，雖然也可以求得一條回歸線，但是，實(shí)際上只有當(dāng)兩個變量之間存在某種線性關(guān)系時，這條回歸線才有意義。判斷回歸線是否有意義，可用相關(guān)系數(shù)r來檢驗(yàn)。 相關(guān)系數(shù)的定義式為： r值在-1.0000與+1.0000之間。相關(guān)系數(shù)的物理意義如下： （1）r=1時，y與x之間存在嚴(yán)格的線性關(guān)系，所

6、有的yi值都在回歸線上。 （2） r=0時， y與x之間完全不存在線性關(guān)系。 （3） 0r1時， y與x之間存在一定的線性關(guān)系。 r值愈接近1，線性關(guān)系就愈好,UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法-相關(guān)系數(shù)r,17,例：用光度法測定合金鋼中Mn的含量，吸光度與Mn的含量間有下列關(guān)系：Mn的質(zhì)量/g 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 未知樣吸光度/A 0.032 0.135 0.187 0.268 0.359 0.435 0.511 0.242試求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及其相關(guān)系數(shù)r并計(jì)算未知樣品中Mn的含量,解：此組數(shù)據(jù)中，組分濃度為零時，吸光度不為零，這可能是在試劑中含有少量Mn，或

7、者含有其它在該測量波長下有吸光的物質(zhì)。 設(shè)Mn含量值為x，吸光度值為y，按公式計(jì)算回歸系數(shù)a，b值。n=7。 所以 該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為 y=0.038+3.95x,UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法-實(shí)例,18,未知樣品的吸光度為y=0.242 0.242=0.038+3.95x 所以x=0.052g 故求出樣品中含Mn為0.052g (注：該題可用計(jì)算機(jī)方便統(tǒng)計(jì)處理),相關(guān)系數(shù),UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法-實(shí)例,19,-,特點(diǎn)：用于可見分光光度法 批量生產(chǎn) 曲線可多次使用,UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法,20,UV-對照品比較法,對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為： 供試品溶液中被測成分標(biāo)示量的100%10%,C供=（A供/A對）

8、C對,供試的含量（%）=,C供D供 V,W供,100%,對照品、樣品：各配制兩份,21,吸收系數(shù)法,注意：儀器波長 空白校正 吸收度準(zhǔn)確度的檢定 雜散光的檢查 優(yōu)點(diǎn)：無需對照品，方法簡便,AD1%V,LW,含量（%）=,100%,22,注意事項(xiàng),光源選擇 波長 吸收池種類 溶液高度 吸收度讀數(shù)范圍 供試品應(yīng)取2份 （對照品比較法，對照品一般也應(yīng)取2份） 平行操作，平均偏差應(yīng)在0.5%以內(nèi),23,例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定,本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑。每片含環(huán)維黃楊星D 0.5mg或1mg。可用對照品比較法測其含量。 環(huán)維黃楊星D,24,測定原理：酸性染料比色法,例題：黃楊寧片中黃楊寧的

9、含量測定,25,對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)105干燥至恒重的環(huán)維黃楊星D對照品25mg（實(shí)際稱取24.94mg)，置250ml量瓶中，加甲醇70ml使溶解，用0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含黃楊星D10g的對照溶液（實(shí)際濃度C對=9.976g/ml） 試寫出計(jì)算過程,例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定,26,供試品溶液的制備 取本品20片（標(biāo)示量為0.5mg/片），精密稱定（2.050g)，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于黃楊寧0.5mg）(稱取0.1021g)，置50ml

10、量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至近刻度，80水浴恒溫1.5小時后取出，冷卻至室溫，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，離心6分鐘（3000轉(zhuǎn)/分），取上清液，即可 若標(biāo)示量為1mg/片，其他數(shù)值不變，試求取樣范圍？,例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定,27,測定法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各5ml，分別置分液漏斗中，各精密加入溴麝香草酚藍(lán)溶液（取溴麝香草酚藍(lán)18mg，置250ml量瓶中，加甲醇5ml使溶解，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，即得）5ml，搖勻，立即分別精密加入三氯甲烷10ml，振搖2分鐘，靜置1.5小時，分取三氯甲烷層，置含0.5

11、g無水硫酸鈉的具塞試管中，振搖，靜置，取上清液，照分光光度法在410nm處分別測定吸光度（A對=0.454,A樣=0.445），計(jì)算，即得。藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每片含環(huán)維黃楊星D（C26H46N2O），應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110% 試寫出計(jì)算公式,例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定,28,計(jì)算 藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每片含黃楊寧以環(huán)維黃楊星D（C26H46N2O）計(jì)算，應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0%。,例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定,29,六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測定,取裝量差異項(xiàng)下的本品約2g，研細(xì)，精密稱定，用水蒸汽蒸餾，收集餾出液約450ml，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法

12、在274nm波長處測定吸收度，按丹皮酚（C9H10O3）的吸收系數(shù)為862計(jì)算，即得。藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每袋（裝量為5g）含牡丹皮按丹皮酚（ C9H10O3 ）計(jì)，不得少于6.0mg。,30,1g供試品中含牡丹皮按丹皮酚計(jì)，含量為：,每袋六味地黃顆粒（5g裝）含牡丹皮按丹皮酚計(jì) 含量為：,六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測定,31,儀器分析法之,薄層掃描法（TLCS）,32,概念：指用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜中有紫外或可見吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品質(zhì)量檢測的方法 色譜條件：選擇性好，組分能完全分離，斑點(diǎn)對稱、均勻、不拖尾。 測量方法：多使

13、用反射法 光源 氘燈：200370nm 鎢燈：370700nm 氙燈 汞燈,薄層掃描法,33,薄層掃描法有外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。常用外標(biāo)法 外標(biāo)法系指將一定量的供試品溶液和對照品溶液分別交叉點(diǎn)加在同一塊薄層板上，展開，顯色，定位，掃描待測組分和對照品斑點(diǎn)，測定相應(yīng)的吸光度或熒光強(qiáng)度積分值，計(jì)算被測成分的含量。 外標(biāo)一點(diǎn)法：標(biāo)準(zhǔn)曲線通過原點(diǎn)，馬錢子散等個別品種 外標(biāo)兩點(diǎn)法：標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)，絕大多數(shù)品種采用 所謂一點(diǎn)法是指在一塊薄層板上對照品的濃度為一種點(diǎn)樣濃度，兩點(diǎn)法則是指在一塊薄層板上對照品的濃度為兩種點(diǎn)樣濃度。 操作方法： 供試品溶液：兩份或以上 點(diǎn)樣：供試品和對照品交叉點(diǎn)樣，每份原點(diǎn)不得少于

14、2個 展開：展距為15cm,薄層掃描法,34,掃描方式： 單波長 雙波長 測定波長 被測組分max， 參比波長 組分無吸收位置上 若背景有均勻污染時，可選擇背景光譜中與測定波長的等吸收處。,薄層掃描法,薄層掃描法,計(jì)算 外標(biāo)一點(diǎn)法 外標(biāo)二點(diǎn)法,35,薄層掃描法,馬錢子散中馬錢子的含量測定：【含量測定】取裝量差異項(xiàng)下的本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷20ml，濃氨試液1ml，輕輕搖勻，稱定重量后，于室溫放置24小時，再稱定重量，用三氯甲烷量補(bǔ)足減失重量，充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶液。另取士的寧對照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色

15、譜法（附錄 B）試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液8l和對照品溶液4l，交叉點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（16:12:1:4）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。照薄層色譜法（附錄 B薄層色譜掃描法）進(jìn)行掃描，波長：S=257nm，R300nm，測量供試品與對照品吸光度積分值，計(jì)算，即得。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：m對=24.90mg,mS=0.5324,A對=22000.73,A供=15659.12 本品每袋含馬錢子以士的寧計(jì)（C21H22N2O2）應(yīng)為7.28.8mg。,36,薄層掃描法,馬錢子散中馬錢子的含量測定,37,薄層掃描法,大山楂丸中山楂的含量測定：【含量測定】 取重量

16、差異項(xiàng)下的本品，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定，加水30ml， 60水浴溫?zé)崾钩浞秩苌?，加硅藻?g，攪勻，濾過，殘?jiān)盟?0ml洗滌，100烘干，連同濾紙一并置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流提取4小時，提取液回收溶劑至干，殘?jiān)檬兔眩?060）浸泡2次（每次約2分鐘），每次5ml，傾去石油醚液，殘?jiān)訜o水乙醇-三氯甲烷（3:2）的混合溶液適量，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用上述混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，分別精密吸取供試品溶液5l、對照品溶液4l

17、與8l，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20:5:8:0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法（附錄 B薄層色譜掃描法）進(jìn)行掃描，波長：S=535nm； R=650nm，測量供試品吸光度積分值與對照品吸光度積分值，計(jì)算，即得。 測得數(shù)據(jù)：A供=5659.12、A對1=2057.73、A對2=7901.25。 本品每丸含山楂以熊果酸（C30H4803）計(jì)，不得少于7.0mg。,38,薄層掃描法,大山楂丸中山楂的含量測定,39,補(bǔ):分析天平使用和稱量,感量

18、 0.1mg 0.01mg 0.001mg 用途：較精密的檢驗(yàn)工作稱量 含量測定 對照品稱量 滴定液標(biāo)化 微量水分測定,40,補(bǔ):分析天平使用前準(zhǔn)備,精度選擇：精密稱定 大于100mg，感量為0.1mg天平 10010mg，感量為0.01mg天平 小于10mg，感量為0.001mg天平 檢查該天平的使用登記表 檢查水準(zhǔn)器內(nèi)的氣泡：水準(zhǔn)器圓的中心位置 檢查硅膠 軟毛刷輕刷天平 調(diào)好零點(diǎn),41,高效液相色譜法,在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法 適用范圍 溶解后能制成溶液的樣品 不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制 分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子和離子型樣品均可檢測 用途廣泛，占有

19、機(jī)物的80% 特點(diǎn) 高柱效（n=104片/米） 高靈敏度 高選擇性 分析速度快,42,高效液相色譜法,儀器 高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 1.儲液罐；2.脫氣裝置；3.梯度洗脫；4.高壓輸液泵；5.流動相流量顯示；6.柱前壓力表；7.輸液泵頭；8.過濾器；9.阻尼器；10.進(jìn)樣裝置；11.色譜柱；12.檢測器；13.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；14.廢液儲罐,43,高效液相色譜法,儀器 高壓輸液系統(tǒng) 貯液罐：盛裝流動相 過濾器：過濾流動相中的塵?；虿蝗苄缘念w粒物質(zhì) 高壓輸液泵：完成流動相的輸送任務(wù) 進(jìn)樣系統(tǒng) 六通進(jìn)樣閥進(jìn)樣：定量環(huán)定量和微量注射器定量 自動進(jìn)樣器 色譜系統(tǒng)：色譜柱

20、和柱溫箱 檢測系統(tǒng)：紫外檢測器（UVD）、二極管陣列檢測器（DVD）、熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),44,HPLC進(jìn)樣裝置 隔膜進(jìn)樣（高分子有機(jī)硅膠墊進(jìn)樣室）HPLC系統(tǒng)壓力太大，必須停泵進(jìn)樣（早期） 閥進(jìn)樣：不必停泵，六通閥,45,透明(棕色)玻璃樣品瓶 自動進(jìn)樣器,高效液相色譜法,色譜柱- ODS柱 非極性固定相 反相色譜法 流動相：極性流動相 甲醇-水 乙腈-水 洗脫 梯度洗脫 等度洗脫 極性大組分先出柱，極性小的組分后出柱,46,高效液相色譜法,高效液相色譜法,HPLC 流出曲線和色譜峰 流出曲線（色譜圖）：電信號強(qiáng)度隨時間變化曲

21、線 色譜峰：流出曲線上突起部分,47,48,基本概念 基線：當(dāng)沒有待測組分進(jìn)入檢測器時，反映檢測器噪音隨時間變化的曲線；穩(wěn)定平直直線 噪音：儀器本身所固有的，以噪音帶表示（儀器越好，噪音越小） 漂移：（儀器未穩(wěn)定造成），基線向某個方向穩(wěn)定移動 保留時間tR：從進(jìn)樣開始到組分出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時所需時間，即組分通過色譜柱所需要的時間 死時間tm：不被固定相溶解或吸附的組分的保留時間（即組分在流動相中的所消耗的時間），或流動相充滿柱內(nèi)空隙體積占據(jù)的空間所需要的時間，又稱流動相保留時間 調(diào)整保留時間tR：組分的保留時間與死時間之差值，即組分在固定相中滯留的時,高效液相色譜法,色譜圖及其參數(shù)（見圖） 保留

22、時間tR ：定性 峰高h(yuǎn) ：峰頂?shù)交€的距離?？捎糜诙?半峰寬W1/2：峰高一半處的寬度 峰寬W：從色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)作切線與基線相交部分 峰面積A：色譜峰與基線之間所包括的面積，常用來定量,49,高效液相色譜法,不對稱因子,HPLC 流出曲線和色譜峰,高效液相色譜法,系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)： 理論塔板數(shù)（n）： 分離度（R）： 重復(fù)性 對照溶液（待測物質(zhì)或其他）連續(xù)進(jìn)樣35次 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0% 拖尾因子（T）： 0.951.05,高效液相色譜法,分離度計(jì)算 相臨兩組分間峰頂間距離是峰底寬平均值的幾倍（衡量色譜分離條件優(yōu)劣的參數(shù)）,52,高效液相色譜法,操作方法 操作前的準(zhǔn)備： 儀器檢查 流

23、動相的制備純化 供試品和對照品溶液配制（各兩份） 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 測定法 定量依據(jù)：峰面積（或峰高）定量 雜質(zhì)含量：峰面積法,53,高效液相色譜法,含量測定 面積歸一法 C%=Ai/A100% 內(nèi)標(biāo)加校正因子法：少用 外標(biāo)法:常用,54,高效液相色譜法,三黃片（小片）中大黃的測定 檢驗(yàn)依據(jù)（中國藥典2010年版一部457頁） 【處方】大黃300g 鹽酸小檗堿5g 黃芩浸膏21g,55,高效液相色譜法,【含量測定】大黃 照高效液相色譜法（附錄 D）測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）為流動相；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按大黃素

24、峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。 對照品溶液的制備 取大黃素對照品和大黃酚對照品適量，精密稱定，加無水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液制成每1ml含大黃素10g、大黃酚25g的混合液，即得。 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)（過三號篩），取約0.26g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加乙醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置燒瓶中，蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10:1）混合溶液15ml，置水浴中加熱水解1小時，立即冷卻，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取4次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)脽o水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶

25、液溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測定，即得。 本品每片含大黃以大黃素（C15H10O5）和大黃酚（C15H10O4）總量計(jì)，小片不得少于1.55mg；大片不得少于3.1mg。,56,高效液相色譜法：三黃片中大黃的測定,流動相的配制 取甲醇（色譜純）425ml和0.1%磷酸溶液75ml混合均勻，用0.45m的濾膜過濾，超聲處理30min，即得。 對照品溶液的制備 分別精密稱取大黃素對照品25mg和大黃酚對照品63mg，置25ml量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液至刻度，搖勻，

26、精密量取1ml，置100ml量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液至刻度，搖勻，用0.45m的濾膜過濾，即得。 供試品溶液的制備 取本品20片，用小刀除去包衣（注意勿損失內(nèi)容物），精密稱定，置研缽中研細(xì)后，過三號篩，取約0.26g，置錐形瓶中，依法操作，即得。 測定，照高效液相色譜法測定。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：20片總重量為5.3100g；m供=0.2610g、m對（大黃素）=0.02509g、m對（大黃酚）=0.06286g；A供（大黃素）=285721、A供（大黃酚）=538079、A對（大黃素）463379、A對（大黃酚）=1300561。,57,高效液相色譜法：三黃片中大黃的測定,58,

27、高效液相色譜法：三黃片中大黃的測定,【處方】黃連165g 大黃500g 黃芩250g 【含量測定】照高效液相色譜法(附錄 )測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇0.2mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.7）(4258)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。 對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品12.5mg，置250ml量瓶中,加甲醇10ml使溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml中含黃芩苷50g)。 供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.75g，精密稱定，置100ml量瓶中,加甲醇10ml，

28、超聲處理（功率250W，頻率50kHz）10分鐘，放冷，加水稀釋至刻度,搖勻，離心，取上清液，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10l,注入液相色譜儀,測定，即得。 本品每袋含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，不得少于21mg。,59,高效液相色譜法：一清顆粒,氣相色譜法,氣相色譜法：以氣體為流動相的柱色譜分離技術(shù) 分類 按固定相分 氣-固色譜 氣-液色譜 按分離原理分 吸附色譜 分配色譜 按柱子粗細(xì)分 填充柱色譜 毛細(xì)管柱色譜 適用性 分析氣體、易揮發(fā)的液體及固體 不適合分析不易氣化或不穩(wěn)定性物質(zhì) 樣品的衍生化使應(yīng)用范圍進(jìn)一步擴(kuò)大,60,氣相色譜法,氣相色譜儀的組成 載氣

29、系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、記錄系統(tǒng),61,62,氣相色譜法,流出曲線（色譜圖）：電信號強(qiáng)度隨時間變化曲線 色譜峰：流出曲線上突起部分,63,不對稱因子,fs在0.951.05之間,fs小于0.95,fs大于1.05,氣相色譜法,操作前準(zhǔn)備 樣品溶液和對照品溶液的制備：定量測定時，對照品溶液和供試品溶液均應(yīng)分別配制2份。 儀器檢查 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：同高效液相色譜法 理論板數(shù) 分離度 重復(fù)性：相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0% 拖尾因子,64,氣相色譜法,氣相色譜法,氣相色譜實(shí)驗(yàn)條件的選擇 柱溫的選擇 載氣與流速的選擇 進(jìn)樣條件的選擇 氣化室溫度一般稍高于樣品沸點(diǎn) 檢測室溫度應(yīng)高于柱溫3050

30、0C 進(jìn)樣量不可過大，否則造成拖尾峰,66,氣相色譜法,定性定量分析 定性分析 保留時間比較法 定量分析：以峰高或峰面積定量 峰面積的測量 定量校正因子 定量方法 歸一化法 外標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)對比法,67,氣相色譜法,定量分析：以峰高或峰面積定量 歸一化 法前提：試樣中所有組分都產(chǎn)生信號并能檢出色譜峰 依據(jù)：組分含量與峰面積成正比 優(yōu)點(diǎn) 簡便，準(zhǔn)確 定量結(jié)果與進(jìn)樣量、重復(fù)性無關(guān)（前提柱子不超載） 色譜條件略有變化對結(jié)果幾乎無影響 缺點(diǎn)： 所有組分必須在一定時間內(nèi)都出峰 必須已知所有組分的校正因子 不適合微量組分的測定,68,氣相色譜法,定量分析 外標(biāo)法：以待測組分純品為對照物，與試樣中待測組

31、分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量的方法 工作曲線法：i純品工作曲線，同體積樣品與之比較 c 前提：進(jìn)入檢測器樣品量與峰面積成正比 外標(biāo)一點(diǎn)法：一種濃度對照物對比樣品中待測組分含量 前提：截距為0，對照品濃度與待測組分濃度接近 外標(biāo)兩點(diǎn)法： 前提：選取兩點(diǎn)對照品的濃度，需涵蓋待測濃度 外標(biāo)法特點(diǎn) 不需要校正因子，不需要所有組分出峰 結(jié)果受進(jìn)樣量、進(jìn)樣重復(fù)性和操作條件影響大 每次進(jìn)樣量應(yīng)一致，否則產(chǎn)生誤差,69,氣相色譜法,70,氣相色譜法,定量分析-內(nèi)標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)法是以待測組分純品為對照物，與試樣中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量的方法 優(yōu)點(diǎn) 進(jìn)樣量不超量時，重復(fù)性及操作條件對結(jié)果無影響 只需待測組分和

32、內(nèi)標(biāo)物出峰，與其他組分是否出峰無關(guān) 適合測定微量組分 缺點(diǎn)： 制樣要求高；找合適內(nèi)標(biāo)物困難；已知校正因子 對內(nèi)標(biāo)物要求： 內(nèi)標(biāo)物須為原樣品中不含組分 內(nèi)標(biāo)物與待測物保留時間應(yīng)接近且R1.5 內(nèi)標(biāo)物為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或含量已知物質(zhì),定量分析-內(nèi)標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)法是根據(jù)待測組分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比與其濃度比在一定濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，對組分進(jìn)行定量分析，對照品溶液和供試品溶液中分別加入相同量的內(nèi)標(biāo)溶液，在相同條件下分別測定其中被測組分和內(nèi)標(biāo)物的色譜峰峰面積 計(jì)算 校正因子的計(jì)算 含量計(jì)算,71,氣相色譜法,檢驗(yàn)依據(jù)（中國藥典2010年版一部471頁） 【處方】川貝母流浸膏45ml 桔梗45g 枇杷葉300g

33、 薄荷腦0.34g 川貝枇杷糖漿由川貝母流浸膏、桔梗、枇杷葉、薄荷腦四味中藥制備而成。薄荷腦具局麻作用，有薄荷的特殊香氣，味初灼熱后清涼，可掩蓋苦味；在乙醇、三氯甲烷、乙醚中極易溶解，在水中極微溶解。中國藥典采用揮發(fā)油測定法（附錄X D）試驗(yàn)，用環(huán)己烷為溶劑提取、氣相色譜法測定薄荷腦含量。,72,氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測定,薄荷腦對照品氣相色譜圖,川貝枇杷糖漿氣相色譜圖,【含量測定】照氣相色譜法（附錄 E）測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 改性聚乙二醇毛細(xì)管柱（柱長30m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚度0.25m）；柱溫為110，分流進(jìn)樣，分流比為25:1，理論板數(shù)按萘峰計(jì)算應(yīng)不低于50

34、00。 校正因子測定 取萘適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml含15mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取薄荷腦對照品75mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻。吸取1l，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。 測定法 精密量取本品50ml，加水250ml，照揮發(fā)油測定法（附錄X D）試驗(yàn)，自測定器上端加水使充滿刻度部分并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷3ml，連接回流冷凝管，加熱保持微沸4小時，放冷，將測定器中的液體移至分液漏斗中，冷凝管及揮發(fā)油測定管內(nèi)壁用少量環(huán)己烷洗滌，并入分液漏斗中，分取環(huán)己烷液，水液再用環(huán)

35、己烷提取2次，每次3ml，用鋪有無水硫酸鈉0.5g的漏斗濾過，合并環(huán)己烷液，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。吸取1l，注入氣相色譜儀，測定，即得。 本品每1ml含薄荷腦（C10H20O）應(yīng)不少于0.20mg。,73,氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測定,校正因子測定 精密稱定環(huán)己酮75.15mg，置5ml量瓶中，加無水乙醇適量溶解并稀釋至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另精密稱取薄荷腦對照品73.26mg，置5ml量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻。吸取1l，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正

36、因子。 測定法 精密量取本品50ml，加水250ml，照揮發(fā)油測定法（附錄X D）試驗(yàn)，自測定器上端加水使充滿刻度部分并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷3ml，連接回流冷凝管，加熱保持微沸4小時，放冷，將測定器中的液體移至分液漏斗中，冷凝管及揮發(fā)油測定管內(nèi)壁用少量環(huán)己烷洗滌，并入分液漏斗中，分取環(huán)己烷液，水液再用環(huán)己烷提取2次，每次3ml，用鋪有無水硫酸鈉0.5g的漏斗濾過，合并環(huán)己烷液，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。吸取1l，注入氣相色譜儀，測定，即得。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：m內(nèi)為75.15mg、m對為73.26mg；A內(nèi)=851302.0、A對=798023.5、 =

37、841603.2、A供=814180.5。,74,氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測定,75,氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測定,檢驗(yàn)依據(jù)（中國藥典2010年版一部1222頁） 【檢查】乙醇量 應(yīng)為60%70%（附錄 M） 測定:精密量取恒溫至20的顛茄酊8ml和正丙醇5ml，置100ml容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取恒溫至20的無水乙醇5ml和正丙醇5ml，置100ml容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。取標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各2l，連續(xù)進(jìn)樣3次，測得校正因子（f）分別為0.6925、0.6921、0.6918。AX/AS分別為1.466、1

38、.458、1.431。求出該供試品乙醇量及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。,76,氣相色譜法-顛茄酊中乙醇量的檢查,77,氣相色譜法-顛茄酊中乙醇量的檢查,78,氣相色譜法,79,適用性,浸出物測定,有效成分不清楚的,無定量方法的,有效成分溶解性能,藥用部位 制劑處方,溶劑浸出物含量質(zhì)量,測定方法 水溶性浸出物測定法 醇溶性浸出物測定法 揮發(fā)性醚浸出物測定法 前處理 粉碎二號篩（水、醇） 四號篩（醚）,80,浸出物測定,81,水溶性浸出物測定法,溶劑：水,水溶性成分,方法,冷浸法,熱浸法,不含或少含淀粉、黏液質(zhì),浸出物測定,水溶性浸出物測定法 冷浸法:取供試品約4g，稱定重量，置250300ml的錐形瓶中，精密加入水100ml，塞緊，冷浸，前6小時內(nèi)時時振搖，再靜置18小時，用干燥濾器迅速濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置己干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于105干燥3小時，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有