【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）茶毛蟲(chóng)病毒的病理特征和病毒Bt制劑的作用特性研究植物保護(hù)碩士論文

密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 茶毛蟲(chóng)病毒的病理特征 和 病毒 劑的 作用特性研究 on on I 摘 要 茶毛蟲(chóng) 是 我國(guó)茶區(qū)的一種重要害蟲(chóng)，發(fā)生時(shí)常造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，而在茶園中噴施化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行防治易造成農(nóng)藥殘留 、害蟲(chóng)抗性等 問(wèn)題。 茶毛蟲(chóng)病毒 （ 是 茶毛蟲(chóng)高效專(zhuān)一性病原物， 能在田間誘發(fā)茶毛蟲(chóng)病毒病的流行，是控制茶毛蟲(chóng)的有效手段。 蘇云金桿菌（ 是一種廣泛使用的廣譜性殺蟲(chóng)劑，對(duì)多種 害蟲(chóng)具有 防治效果 。 茶毛蟲(chóng)病毒 是 茶毛蟲(chóng)核型多角體病毒與蘇云金桿菌混配而成的生物農(nóng)藥，具有無(wú)毒、無(wú)殘留、不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn) 。 本 研究 運(yùn)用 包埋、超薄切片和 電子顯微鏡 技術(shù) 研究 了 用生物測(cè)定方法研究了 協(xié)同毒力、 田間 藥效 和 作用特性 。結(jié)果表明： 1. 多角體為 不規(guī)則的三角四面體 ，大小為 均 病毒 與多粒包埋 型 病毒 并存 ， 多粒包埋病毒束每束 含 兩個(gè)病毒粒子 。 病毒粒子 和 核衣殼 的外形 呈桿狀 ，兩邊平行，兩端鈍圓 。多粒包埋型病毒粒子大小平均為 粒包埋型病毒粒子 大小 平均 為 2. 毛蟲(chóng)中腸細(xì)胞 ，多角體陸續(xù)形成到形成大量成熟的多角體大約需要 13天。整個(gè)侵染過(guò)程 先是 細(xì) 胞核膨大 ， 核內(nèi)染色質(zhì)凝集 ， 細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn) 病毒形成基質(zhì) ， 繼而核衣殼在 病毒形成基質(zhì) 中大量 形成，多角體蛋白在核衣殼周?chē)奂⒅饾u發(fā)育成熟，隨感染時(shí)間的增長(zhǎng)，出現(xiàn)大量的成熟多角體并充滿整個(gè)細(xì)胞。 病毒的病理特征與病癥特征相吻合 。 3. 數(shù) 在不同時(shí)間和不同溫度下 是動(dòng)態(tài)的， 要表現(xiàn)為相加作用， 在 16 、 19 、 28 溫度條件下 感染前期 有一定增效作用。 4. 有速效 作用 和 拒食 作用 。 蟲(chóng)的 致死 30時(shí)間（ 蟲(chóng) 藥后 19天的 拒食率（以病毒水劑作為對(duì)照）達(dá)到 5. 齡幼蟲(chóng)的 0為 9769 1065倍（ 103 l）， 000倍 液 對(duì)茶毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)的 田間防效 第 18天為 。 6. 用 。 后 7天的死亡率分別為 關(guān)鍵詞 茶毛蟲(chóng)病毒 蘇云金桿菌 形態(tài)學(xué) 病理特征 作用特性 協(xié)同毒力 a in on as a is an by in , a of in a is a of is of as to on to as 1. is a of an in of in of of of 2. of At in in in of 3. is of 6 ,19 8 4. as 8 , 0 of on 9th 5. 769 1065 （ 103 l） . 000 ) on 8th 6. a of 5.8 5.6 of to 錄 第一章 緒論 . 1 究的目的和意義 . 1 內(nèi)外研究現(xiàn)狀 . 2 毛蟲(chóng)的發(fā)生及防治現(xiàn)狀 . 2 毛蟲(chóng)病毒的研究現(xiàn)狀 . 2 t 的研究現(xiàn)狀和應(yīng)用情況 . 7 合生物農(nóng)藥的研究現(xiàn)狀 . 7 究?jī)?nèi)容 . 9 術(shù)路線圖 . 10 第二章 形態(tài)特征及侵染中腸細(xì)胞的病理特征 . 11 料與方法 . 11 驗(yàn)材料 . 11 器設(shè)備 . 13 驗(yàn)方法 . 13 果與分析 . 15 形態(tài)特點(diǎn) . 15 染茶毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)中腸細(xì)胞的超 微結(jié)構(gòu)和病理特征 . 16 第三章 劑的作用特性研究 . 18 料與方法 . 18 驗(yàn)材料 . 18 驗(yàn)方法 . 19 果與分析 . 22 毒力測(cè)定 . 22 協(xié)同毒力 . 22 拒食作用 . 23 速效作用 . 24 田間藥效試驗(yàn) . 25 兼治作用 . 26 第四章 結(jié)論與討論 . 27 小結(jié) . 27 毒的形態(tài)特征和病理特征 . 27 劑的作用特性 . 27 討論 . 28 毛蟲(chóng)病毒的株系之分 . 28 毛蟲(chóng)病毒病的病理特征與病程的關(guān)系 . 29 間的相互關(guān)系 . 29 毛蟲(chóng)病毒制劑在茶園內(nèi)的科學(xué)應(yīng)用技術(shù) . 30 蟲(chóng)病毒的附加效應(yīng) . 30 問(wèn)題與展望 . 31 毛蟲(chóng)病毒的基因工程重組 . 31 毛蟲(chóng)病毒的工廠化生產(chǎn)技術(shù) . 32 毒在環(huán)境中的監(jiān)測(cè)及檢驗(yàn)方法研究 . 32 考文獻(xiàn) . 33 圖版 . 36 致 謝 . 46 作 者 簡(jiǎn) 歷 . 47 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 英文縮略表 0 英文縮略表 1 英文縮寫(xiě) 英文全稱(chēng) 中文名稱(chēng) 毛蟲(chóng)核型多角體病毒 蘇云金桿菌 茶毛蟲(chóng)核型多角體病毒 尺蠖核型多角體病毒 0% 0% 致死時(shí)間 30%致死時(shí)間 角體 s 肯氏新復(fù)極差檢 驗(yàn)法 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 究的目的和意義 茶葉是世界三大無(wú)酒精飲料之一，深受世界人民的喜愛(ài)，我國(guó)既是茶葉的故鄉(xiāng)，也是世界上主要 的 產(chǎn)茶國(guó)之一。 2005 年我國(guó)茶園面積約 130 萬(wàn)公頃， 年產(chǎn)茶葉約 90 萬(wàn)噸， 約占世界茶葉總產(chǎn)量的 25 （ 2006） 。 從 19 世紀(jì)以來(lái)茶葉一直是我國(guó)出口創(chuàng)匯的重要物資， 據(jù)我國(guó)海關(guān)統(tǒng)計(jì) ， 2005 年 我國(guó)茶葉 出口數(shù)量 噸， 出口金額達(dá) 美元 ，同比分別增長(zhǎng) 2005 年我國(guó)茶葉出口量再創(chuàng)歷史新高，穩(wěn)居世界第三 （ 蔡軍 ， 2006） 。 茶樹(shù)是一種多年生的 常綠 作物，主要生長(zhǎng)在亞熱帶、熱帶和暖溫帶，氣候條件溫暖宜于病蟲(chóng)雜草蔓延、繁衍和孳生。我國(guó)已記載的茶樹(shù)害蟲(chóng)種類(lèi)有 500 多種，病害 100 多 種，其中造成危害的，每年約給茶葉生產(chǎn)帶來(lái) 10 30的產(chǎn)量損失，在局部地區(qū)和局部年份損失則更大 （ 陳宗懋， 2002） 。建國(guó)以來(lái)，茶樹(shù)植保工作陸續(xù)展開(kāi)， 六七十年代 利用化學(xué)防治在茶葉生產(chǎn)中取得了良好的保產(chǎn)效果 。 隨著生活水平的 逐步 提高，人們對(duì)環(huán)境、健康提 出了更高的要求， 在茶樹(shù)病蟲(chóng)害防治中要求盡量減少化學(xué)農(nóng)藥的使用 ，這對(duì)茶葉植保工作提出了更高的要求 。 2006 年歐盟和日本 均 出臺(tái) 了更為嚴(yán)格的茶葉衛(wèi)生質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 增 加 了 檢測(cè)農(nóng)藥種類(lèi)，提高 了茶葉準(zhǔn)入門(mén)檻 ，對(duì)我國(guó)茶葉進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)設(shè)置了非關(guān)稅的“綠色壁壘”，成為我國(guó)茶葉出口面臨的一個(gè)突出問(wèn)題。 同時(shí)， 無(wú)公害茶、綠色茶和有機(jī)茶 的認(rèn)證、生產(chǎn)和消費(fèi)在 全國(guó) 范圍內(nèi)正在蓬勃的發(fā)展 ，進(jìn)一步 引發(fā)了對(duì) 生物農(nóng)藥的需求。 茶毛蟲(chóng)是 常在我國(guó)各個(gè)茶區(qū)爆發(fā)成災(zāi) 的主要害蟲(chóng)，常 造成嚴(yán)重的 經(jīng)濟(jì)損失 ，進(jìn)行茶毛蟲(chóng)生物防治方法的研究具有實(shí)用性意義。 本 研 究 著 眼 于 使 用 生物農(nóng)藥 茶毛蟲(chóng)病毒 劑來(lái) 解決茶園內(nèi)茶毛蟲(chóng)及其它害蟲(chóng)的為害問(wèn)題， 通過(guò)研究茶毛蟲(chóng)病毒的形態(tài)學(xué)特征、病理學(xué)特征，以及茶毛蟲(chóng)病毒 劑 的作用特性達(dá)到以下的目的和意義。 （ 1） 研究明確茶毛蟲(chóng)病毒的形態(tài)學(xué)特征 ，為進(jìn)一步研究茶毛蟲(chóng)病毒的株系篩選和分子生物學(xué)打下基礎(chǔ)。 （ 2） 研究明確茶毛蟲(chóng)病毒的病理特征 和 侵染機(jī)理 ，為病毒 的 大量繁殖提供理論依據(jù) ，為進(jìn)一步研究 病毒和宿主的作用關(guān)系 打下理論基礎(chǔ)。 （ 3） 研究明確茶毛蟲(chóng)病毒 劑 的作用特性，為進(jìn)一步開(kāi)展 茶毛蟲(chóng)病毒 劑中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 2 的應(yīng)用技術(shù)研究提供理論基礎(chǔ)。 內(nèi)外 研究 現(xiàn) 狀 茶毛蟲(chóng) 的發(fā)生及 防治現(xiàn)狀 茶毛蟲(chóng)（ 名茶毒 蛾 、擺頭蟲(chóng)等，屬鱗翅目毒蛾科，是我國(guó)茶區(qū)的一種重要害蟲(chóng)。幼蟲(chóng)咬食茶樹(shù)葉片，使葉片殘缺不全，嚴(yán)重時(shí)連芽葉、樹(shù)皮、花和幼果咬食殆盡，僅留禿枝，嚴(yán)重影響了茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)，造成重大經(jīng)濟(jì)損失，還可加害油茶、山茶 、柑桔等經(jīng)濟(jì)作物 。同時(shí) 茶毛蟲(chóng)體表 布 滿 毒毛 ， 人體皮膚觸及會(huì)紅腫痛癢，嚴(yán)重妨礙采茶和茶園管理 。在浙江、江蘇、安徽等省茶毛蟲(chóng)一年發(fā)生 2 代（浙江溫州一年 3 代），以卵塊在老葉背面越冬，越冬卵在 翌年 4 月上、中旬開(kāi)始孵化。幼蟲(chóng) 6 7 齡，具群集性 。幼齡幼蟲(chóng) 聚集在葉片背面取食 下 表皮和葉肉 ， 留上表皮成黃綠色 半透明薄膜狀 ，成長(zhǎng)后許多幼蟲(chóng)整齊排列 在 葉背，自葉尖或葉緣咬食葉片。 近年來(lái)茶毛蟲(chóng)常在我國(guó)各個(gè)茶區(qū)爆發(fā)成災(zāi)， 1995 年在福建福鼎 （ 馬靜等， 1996） 、 1997 年在安徽 （ 鄧余良等， 1997）以及 2002 年在重慶 （ 沈云樹(shù)， 2003） 茶毛蟲(chóng)大面積為害所造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)千萬(wàn)元。 目前茶毛蟲(chóng) 的 防治主要有農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治、 物理防治和 生物防治等 方法 ，農(nóng)業(yè)防治 主要是利用 茶園 栽培管理措施來(lái)控制茶毛蟲(chóng)的為害 ；化學(xué)防治可使 用菊酯類(lèi)農(nóng)藥； 物理防治可以使用燈光誘殺等手段； 生物防治 除了保護(hù)天敵等手段外主要是在茶園內(nèi)使用病毒制劑、 劑及植物 源 或礦物源農(nóng)藥 。 但是現(xiàn)有的防治手段也還存在著 一些 問(wèn)題，并不能很好的滿足當(dāng)前茶葉生產(chǎn)的需要。化學(xué)農(nóng)藥存在污染環(huán)境、易造成農(nóng)藥殘留及潛在威脅消費(fèi)者健康等問(wèn)題 ；而純 劑的田間使用 效果 差， 持效期短；純 劑又存在 殺蟲(chóng)譜狹窄、見(jiàn)效慢等缺點(diǎn)， 且由于 在生物農(nóng)藥劑型方面的研究還比較薄弱，國(guó)內(nèi)適合有機(jī)茶園和出口茶園使用的商品化制劑比較少， 因此 需加強(qiáng)生物農(nóng)藥的研究，盡快滿足生產(chǎn)需要。 茶 毛蟲(chóng)病毒的研究現(xiàn)狀 利用昆蟲(chóng)病毒防治害蟲(chóng)是生物防治的 重要 手段之一 。 昆蟲(chóng)病毒在 農(nóng)業(yè)實(shí)踐 中的應(yīng)用已有 100 多年的歷史（ 1986），經(jīng)過(guò)研究者不懈的努力， 今天 許多昆蟲(chóng)病毒如核型多角體病毒 (昆蟲(chóng)痘病毒 (顆粒體病毒 (已 廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐 （ 呂鴻聲， 1982） 。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，世界上已從 1100 多種昆蟲(chóng)中中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 3 發(fā)現(xiàn)了 1690 多株昆蟲(chóng)病毒，其宿主涉及昆蟲(chóng) 11 目 43 科，目前全世界注冊(cè)的桿狀病毒殺蟲(chóng)劑已有 20 種，在森林、蔬菜和倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)的防治中發(fā)揮了重要作用 （ 劉永平等， 2006） ，我國(guó)已從 7 目 35 科 127 屬的 196 個(gè)蟲(chóng)種中分離到 247 株昆蟲(chóng)病毒（ 陳濤， 1995） 。利用茶樹(shù)病毒防治茶樹(shù)害蟲(chóng)從 50 年代起開(kāi)始發(fā)展， 70 年以后在我國(guó)發(fā)展迅速。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)已從 40 多種茶樹(shù)害蟲(chóng)上分離得 81 種昆蟲(chóng)病毒。其中核型多角體病毒 45 種，顆粒體病毒 24 種，質(zhì)型多角體病毒 9 種，非包涵體病毒 3 種 （ 洪北邊， 1998） 。 茶 毛 蟲(chóng) 核 型 多 角 體 病 毒 (簡(jiǎn)稱(chēng) 按 國(guó)際 病毒分類(lèi)委員會(huì) ( 2005年 7月發(fā)表的最新的病毒分類(lèi)第八次 報(bào)告 （ M et 005） ， 應(yīng)屬于桿狀病毒科（ 狀病毒屬（ 1957 年湖南省茶葉研究所在觀察茶毛蟲(chóng)生活史及田間消長(zhǎng)調(diào)查中，首次發(fā)現(xiàn)幼蟲(chóng)染病，蟲(chóng)體內(nèi)部液化，倒掛于茶樹(shù)枝葉上死亡，當(dāng)時(shí)稱(chēng)為軟化病，后經(jīng)分離和形態(tài)觀察，證實(shí)病原為核型多角體病毒。 1957 年日本 分離到兩株核型多角體病毒，隨后在其它國(guó)家和地區(qū)也有相關(guān)報(bào)道 （ 1960） 。 1974 年在上海昆蟲(chóng)研究所的協(xié)助和指導(dǎo)下，貴州中八農(nóng)場(chǎng)對(duì)得病致死茶毛蟲(chóng)尸體浸出液進(jìn)行分析和提純，得到核型多角體病毒 （ 貴州中八農(nóng)場(chǎng)， 1974） 。福建農(nóng)科院茶葉研究所植保室采取涂片法檢查毒尸的尸液，觀察到多角體，初步認(rèn)定使茶毛蟲(chóng)發(fā)病死亡的病毒是一種多角體病毒 （ 福建農(nóng)科院茶葉研究所植保室， 1979） ,這是國(guó)內(nèi)最早的明確鑒定茶毛 蟲(chóng)核多角體病毒的報(bào)道，其它各省茶園也 陸續(xù) 報(bào)道了 茶毛蟲(chóng)核型多角體病毒病的發(fā)生。 以前的研究者對(duì) 全性、增殖、推廣應(yīng)用等方面進(jìn)行了一定程度的研究，簡(jiǎn)述如下。 毒病 患病 癥狀：煩燥不安，食欲減退，行動(dòng)遲鈍，對(duì)外界刺激反應(yīng)緩慢，呈明顯的腫漲。感病后期以腹足或尾足緊附葉背或枝干，頭部下垂，倒吊死亡，呈明顯的袋狀。幼蟲(chóng)死亡后，體內(nèi)組織液化，充滿白色膿液， 表 皮易碎，一觸即破，無(wú)臭味。 角體在掃描電鏡下大多為不規(guī)則的多面體，有似三角形，四角形，多角形等形狀，表面光滑，少數(shù)有些皺折，多角體大小不一，直徑為 多數(shù)為 貴州中八農(nóng)場(chǎng) ， 1974； 周顯頭 ， 1980； 楊 濟(jì)華 等， 1984； 鄒彤 等， 1992） 。電鏡下茶毛蟲(chóng)病毒粒子為桿狀，大小約為 120 340角體有兩種包埋型：?jiǎn)蝹€(gè)粒子包埋型和成束 粒子包埋型，后者大都為兩個(gè)粒子成一束，也有一束含 3 個(gè)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 4 或 4 個(gè)粒子的 。 用堿溶液溶解多角體所釋放出來(lái)的粒子與核多角體切片中的病毒粒子相比，其長(zhǎng)短大小，稍有差異，其兩個(gè)包埋型的粒子，也有差異。經(jīng)堿 溶 液溶解釋放出的病毒粒子：在單粒包埋型中，其病毒粒子平均為 多粒包埋型中，病毒粒子約為 297.6 角體切面中的病毒 粒子：?jiǎn)瘟０裥秃投嗔０裥筒《緝?nèi)核部分大小分別為 276 在單粒包埋型觀察到一種多角體蛋白質(zhì)晶格，兩晶格間間距為 23 ，而兩晶格的中心距則為 （ 楊濟(jì)華 等， 1984；李琮池 等， 1983） 。 鄒彤報(bào)道了茶毛蟲(chóng)病毒侵染后宿主細(xì)胞學(xué)的病變。在電鏡下觀察病毒侵染72 120 小時(shí)后，宿主中腸細(xì)胞器，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、板層小體、溶酶體等均有明顯的病變。侵染病毒 48 72 小時(shí)后，細(xì)胞核明顯膨大，核膜有些部分皺折，無(wú)定形高電子密度的病毒發(fā)生 基質(zhì)，其后，病毒發(fā)生基質(zhì)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，中間有核衣殼出現(xiàn)，少數(shù)核衣殼正在獲得套膜裝配成病毒粒子。侵染病毒 72 120小時(shí)后，線粒體的數(shù)目增多并拉長(zhǎng)。有的線粒體腫脹，脊伸長(zhǎng)，后來(lái)有些線粒體的脊斷裂成模糊不清乃至空泡化。有的線粒體開(kāi)始出現(xiàn)破裂，其中大量核糖體外溢。侵染 120 小時(shí)后，少量線粒體出現(xiàn)同心園型的脊，膜已破裂，無(wú)形態(tài)學(xué)上的完整性，也有些殘破的線粒體被溶酶體自溶而成為髓樣小體，在同一張切片上，不同構(gòu)型線粒體的病變程度也 有差異。 侵染病毒 72 120 小時(shí)后，胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生，可見(jiàn)到粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的腔和小池等。部分 腫脹的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上核糖體的排列稀疏，有的核糖體大量脫落出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡化 ,有時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特化成板層小體，成為一個(gè)中空的 同心多層膜結(jié)構(gòu)。 隨著病程的進(jìn)展與細(xì)胞器的病理變化，細(xì)胞內(nèi)的核糖體顆粒增多，并且有部分的核糖體似以多聚體的形式存在。大約侵染 72 小時(shí)后，核糖體多以游離的形式存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。還有大量核糖體向胞核轉(zhuǎn)移靠近，可能通過(guò)核孔進(jìn)入核內(nèi)參加病毒的復(fù)制。病毒侵染后，細(xì)胞內(nèi)的溶酶體數(shù)目增加。特別是感染晚期，細(xì)胞器開(kāi)始出現(xiàn)破損時(shí)，溶酶體進(jìn)行自體吞噬作用，有時(shí)成為單層膜所包圍的吞噬膜狀結(jié)構(gòu)的吞噬小泡 （ 鄒彤 等 ， 1992） 。 昆蟲(chóng)病毒毒力的高低決定其是否具有應(yīng)用于生防的潛力。 當(dāng)茶毛蟲(chóng)病毒濃度為 1 106，感染2 齡初幼蟲(chóng)的半數(shù)蟲(chóng)口減退期（ 在 13 14 天，以后即進(jìn)入死亡高峰，到18 天，減退率已達(dá) 90以上。病毒濃度為 106PB/， 16 天，最終減退率稍低于 1 106得結(jié)果，而未感染的對(duì)照，蟲(chóng)口減退率僅為 （ 齊義鵬 等， 1986） 。 胡擁軍等研究 度與致死率的關(guān)系及感染時(shí)間與致死率的關(guān)系。計(jì) 算中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 5 出 染 液 濃 度 對(duì) 數(shù) 值 與 幼 蟲(chóng) 死 亡 機(jī) 率 值 的 回 歸 直 線 方 程 為 ： y 關(guān)系數(shù) r 性相關(guān)顯著。 病毒感染后幼蟲(chóng)死亡天數(shù)與累計(jì)死亡率機(jī)率值的回歸直線方程為： y 關(guān)系數(shù) r 胡擁軍等 ， 1992） 。 基因組大小為 平均分子量約為 106 道爾頓 （ 金明潔 等， 1985） 。 酶切圖譜已先后報(bào)道 （ 金明潔 等， 1985； 陳棣華等 ， 1987； 陳繩亮 等， 1999； 常國(guó)輝 等， 2001） 。 常國(guó)輝等（ 2001）以苜宿丫紋夜蛾多粒包埋核型多角體病毒 (稱(chēng) 多角體蛋白基因所在酶切片段 ( F 片段 )為模板，用 記制備探針，首次確定了 多角體蛋白基因在 E 片段， B 片段， J 片段， A 片段，F(xiàn) 片段和 段的位置，并對(duì)其中的 G 片段進(jìn)行了克隆和亞克隆。該工作對(duì)于揭示該病毒與其它桿狀病毒的進(jìn)化關(guān)系，利用該病毒表達(dá)外源基因，以及構(gòu)建重組病毒殺蟲(chóng)劑意義巨大。 目前已進(jìn)入病毒的 全基因組序列研究及 功能基因組學(xué)研究 階段 ， 以后研究者會(huì)將注意力更多的轉(zhuǎn)向基因工程重組茶毛蟲(chóng) 病毒殺蟲(chóng)劑 的研究 。 溫度對(duì) 染的作用：高溫潛伏期短，死亡快，但死亡率稍低，有的病蟲(chóng)仍能化蛹。低溫潛伏期長(zhǎng)，死亡慢，但死亡率高，無(wú)化蛹現(xiàn)象 （ 華中師范學(xué)院 生物系昆蟲(chóng)病毒研究室茶毛蟲(chóng)病毒組 ， 1979） 。 溫度 對(duì)幼蟲(chóng)的 染病 影響較大， 17時(shí)， 5105 、 106、 5 106、 1 107、 107種濃度的病毒劑量感染 2 齡幼蟲(chóng)， 14 天后 死亡率分別為 35、 40、 24時(shí)， 4 齡幼蟲(chóng)對(duì)上述濃度的病毒較為敏感， 8 天后，感染死亡率分別為 （ 周顯頭 ， 1981） 。 日光和降雨對(duì) 影響不大。 用 茶樹(shù)葉片上涂葉處理，在茶園自然條件下經(jīng)過(guò) 1、 7、 12、 17 和 22 天后，分別喂飼感染 3 齡茶毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)，其死亡率分別為 其致病毒力隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低。涂葉 22 天后，使茶毛蟲(chóng)幼蟲(chóng) 健康幼 蟲(chóng)致死率仍達(dá)到 說(shuō)明茶園中能較穩(wěn)定存活一段時(shí)期且日光照射對(duì)其活性影響較小。茶園葉片不同部位涂抹病毒懸浮液 2h 后降雨，持續(xù) 4h 自然降雨量達(dá) 時(shí)又在自然條件下經(jīng) 12 天后采回毒葉作室內(nèi)接蟲(chóng)感染試驗(yàn)，無(wú)論是葉面、葉背及全葉涂布病毒處理葉片飼喂茶毛蟲(chóng)，罹病死亡率仍達(dá)到 86 96。說(shuō)明 105雨對(duì)其感染活性影 響不大 （ 姚渭 等， 1993） 。 全性試驗(yàn)結(jié)果：大鼠經(jīng)口一次，多次和長(zhǎng)期喂飼，經(jīng)呼吸道吸入；豚中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 6 鼠和家兔經(jīng)皮、眼粘膜接種，均未引起異常表現(xiàn)，各項(xiàng)生理、生化 指標(biāo) 正常，未見(jiàn)病理致變及 染。大鼠生殖試驗(yàn) 鼠受孕率，活產(chǎn)率，哺育成活率等 指標(biāo) 均正常，未引起畸胎； 鼠生長(zhǎng)良好。 小鼠未見(jiàn)顯性致死效應(yīng)（ 李漢帆等 ， 1985） 。 用微核試驗(yàn)測(cè)定 茶尺蠖 油桐尺蠖 小白鼠的安全性，通過(guò)測(cè)定其骨髓中嗜多染紅細(xì)胞微核的出現(xiàn)頻率，證明無(wú)論是單獨(dú)或是混合感染方式均不能測(cè)出這 些病毒對(duì)骨髓細(xì)胞染色體有特定的損傷，而陽(yáng)性對(duì)照 環(huán)磷酰胺所誘發(fā)的微核率與其相比極為顯著。該結(jié)果說(shuō)明這三種 哺乳動(dòng)物小白鼠是安全的，同時(shí)對(duì)復(fù)合病毒殺蟲(chóng)劑也是安全的 （ 陳海雷 等， 1991； 孫椒德等， 1996） 。用間接 ，以 109 份人血清（其中 5 份血清是由與 接觸史的人提供）作為抗原及抗體，與 其抗血清進(jìn)行檢測(cè)，以確定 果均呈陰性反應(yīng)，說(shuō)明茶園應(yīng)用 蟲(chóng)劑對(duì)人體無(wú)害 （ 石正麗等 ， 1993） 。以上結(jié)果都表明 試驗(yàn)動(dòng)物和人是安全的。 殖研究中有研究者認(rèn)為 增殖 的 蟲(chóng)齡以 5 齡為好；濃度以 1 107好；感染期以 為好； 而能 影響 量的提高 的因子中 ，蟲(chóng)齡居主導(dǎo)地位，濃度其次，感染期影響較小，而三個(gè)因素之間的相互作用影響甚微 （ 程修江等， 1991） 。 在前人的報(bào)道中， 致死率及蟲(chóng)口減退率一般都在 85 100之間，其作用穩(wěn)定且持效期長(zhǎng)；生態(tài)及環(huán)境因子對(duì) 果 雖 有一定影響，但最終 幼蟲(chóng) 的致死率一般都高于 85%；大量關(guān)于 安全性研究表明 ， 哺乳動(dòng)物和人是安全的，因此 為一種昆蟲(chóng)病 原物非常適合用于害蟲(chóng)的生物防治。 經(jīng)進(jìn)行了初步的生產(chǎn)和應(yīng)用研究， 周顯頭于 1980 年報(bào)道了茶毛蟲(chóng)核型多角體病毒的生產(chǎn)流程 。 孫椒德等于 1987 年在寧德縣茶場(chǎng)近 300 畝茶園進(jìn)行“ 福建一號(hào) ” 毒株殺蟲(chóng)劑示范應(yīng)用，十天時(shí)校正死亡率為 茶毛蟲(chóng)核型多角體病毒 “ 福建一號(hào) ” 毒株殺蟲(chóng)劑在福建省內(nèi)茶區(qū)共示范噴用 8053 畝，平均防效為 且有 2 5 年的持續(xù)效果 。 (孫椒德 等， 1990； 1991)。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所研究試制出茶毛蟲(chóng)病毒水劑、茶毛蟲(chóng)病毒 劑和茶毛蟲(chóng)病毒 劑，可分別應(yīng)用于 有機(jī)茶園和無(wú)公害茶園，試驗(yàn)結(jié)果表明 3 種劑型對(duì)兩代茶毛蟲(chóng)均具有良好的防治效果，幼蟲(chóng)期最終死亡率均達(dá) 100 （ 殷坤山 等， 2004） ，盡管還談不上已經(jīng)取得了多大的成效 ，但是該系列殺蟲(chóng)劑已經(jīng)在茶毛蟲(chóng)綜合管理項(xiàng)目中表現(xiàn)出控制茶毛蟲(chóng)的良好 前景。 在多個(gè)省茶區(qū)進(jìn)行了示范性推廣并已用于實(shí)際生產(chǎn)。利用 治茶毛蟲(chóng)，不僅防治效果好，后效期長(zhǎng)，不容易產(chǎn)生抗性，能在田 間 長(zhǎng)期控制害蟲(chóng)種群，而且不污染環(huán)境，不傷害天敵，經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益及生態(tài)效益均十分顯著。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 7 研究現(xiàn)狀和應(yīng)用情況 蘇云金桿菌 (稱(chēng) 簡(jiǎn)稱(chēng) ,是包括 29 個(gè)（已鑒定）變種的產(chǎn)晶體芽孢桿菌，是世界上使用最廣泛的生物農(nóng)藥之一 ， 其作為生物農(nóng)藥使用已有較長(zhǎng)的歷史（ 劉品賢 ， 1996；吳繼星， 1995） 。 作用機(jī)制是伴孢晶體破壞昆蟲(chóng)中腸部位， 孢或營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞從 腸道 進(jìn)入血腔，在那里迅速繁殖至大量菌體充滿血腔， 使 昆 蟲(chóng)患敗血病而死亡。 要用于防治鱗翅目的多種害蟲(chóng)，取得了良好的防治效果，且對(duì)人畜無(wú)害，無(wú)殘毒，不污染環(huán)境，不傷害天敵，殺蟲(chóng)譜廣，害蟲(chóng)不易產(chǎn)生抗性，是微生物農(nóng)藥的研究和應(yīng)用中最有成效 的一個(gè)。 的殺蟲(chóng)速度雖比不上作用于神經(jīng)系統(tǒng)的有機(jī)合成殺蟲(chóng)劑，但與其他作用方式的有機(jī)合成殺蟲(chóng)劑相比也并不遜色。一般微生物殺蟲(chóng)劑從感染到害蟲(chóng)死亡需數(shù)天到數(shù)十天，應(yīng)用 ，害蟲(chóng)取食 劑數(shù)小時(shí)則會(huì)停止取食活動(dòng)， 2 3 天死亡 （ 劉品賢 ， 1993；楊華等， 2003） 。大量 研究 表明 茶毛蟲(chóng)防治效果顯著 （ 徐惠清等 ， 1999） ，朱運(yùn)華 等 （ 1999） 報(bào)道 得利防治茶毛蟲(chóng)噴藥后 7 天平均防效高于 90；吳光 遠(yuǎn) （ 2000） 報(bào)道 蘇特靈 400 倍液、 600 倍液對(duì)茶毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)的毒力效果高，處理后 3 天分 別達(dá) 100和 曹明森 （ 1995）報(bào)道 室內(nèi) 2000 500 倍 2 3 齡茶毛蟲(chóng)幼蟲(chóng) 7 天死亡率可達(dá) 100 。但是 一般來(lái)說(shuō) 樣的效果較好，產(chǎn)品的質(zhì)量卻存在不穩(wěn)定性，經(jīng)中國(guó)農(nóng)科院茶葉研究所近年來(lái)收集多種 品對(duì)茶毛蟲(chóng)進(jìn)行生物測(cè)定的結(jié)果表明 ， 其 室內(nèi)毒效僅在 10 48之間，因此認(rèn)為在田間僅應(yīng)用純 劑不能取得令人滿意的防治效果。 前的應(yīng)用研究主要集中在篩選高毒菌株及 其 與化學(xué)農(nóng)藥或生物農(nóng)藥混用等方面。 合生物農(nóng)藥的研究現(xiàn)狀 大量報(bào)道證實(shí) 不同種類(lèi)的生物殺蟲(chóng)劑混用可提 高殺蟲(chóng)效果：棉鈴蟲(chóng)核型多角體病毒 (卵磷脂混用感染棉鈴蟲(chóng)可提高感染率 38 （ 萬(wàn)成松等， 2000） ；美洲粘蟲(chóng) 顆粒體病毒 (用，使粘蟲(chóng)的死亡率達(dá) 80，而單獨(dú)使用其死亡率只有 20 （ 劉強(qiáng)等， 1999） ；松毛蟲(chóng)質(zhì)型多角體病毒 (白僵菌(用，使松毛蟲(chóng)死亡率由 60 65提高到 75 85 （ 李喬等， 2000） 。國(guó)內(nèi)由 蘇云金桿菌 （ 組合生產(chǎn)的 “ 病毒 微生物復(fù)合殺蟲(chóng)劑 ” 已經(jīng)取得了國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利（ 1998）。陳素偉等 （ 1996） 報(bào)道質(zhì)型多角體病毒與 用，可迅速降低赤松毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)的取食量。 因此， 針對(duì)病毒殺蟲(chóng)劑殺蟲(chóng)速度 慢 、殺蟲(chóng)譜窄的問(wèn)題，研究人員嘗試將病毒殺蟲(chóng)劑與其它殺蟲(chóng)劑如 維菌素（ 國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 8 混配，來(lái)彌補(bǔ)病毒殺蟲(chóng)劑的缺點(diǎn)。 蘇云金桿菌侵染寄主后在 5 10造成中腸麻痹， 1 7 個(gè)小時(shí)停止取食， 1 3 天寄主死亡（ 1994）。相對(duì)的，桿狀病毒的最高毒性需要 2 5 天致死寄主，幼蟲(chóng)可以一直取食作物直至死亡，但是桿狀病毒毒性高且效果穩(wěn)定 ，因此 在優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，藥效成分不相克等原則下，應(yīng)用 劑 防治害蟲(chóng)有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)， 是控制害蟲(chóng)的 有效手段 。國(guó)外從 70 年代起就 大量報(bào)道了 用產(chǎn)生的增效作用 及良好的防治效果，但也存在一些爭(zhēng)論 。有學(xué)者認(rèn)為由于 麻痹幼蟲(chóng)內(nèi)臟從而阻止幼蟲(chóng)繼續(xù)取食，造成病毒攝入量低，因此會(huì)降低混劑的效果（ et 1973； e