麻疹風(fēng)疹腮腺炎水痘標(biāo)本采集處理運(yùn)送李芳彩

麻疹/風(fēng)疹/腮腺炎/水痘

標(biāo)本采集、處理、保存及運(yùn)送李芳彩湖南省疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗(yàn)科2012.11.29主要內(nèi)容方案中關(guān)于標(biāo)本的要求病毒感染過程與機(jī)體免疫反應(yīng)操作流程注意事項(xiàng)每個散發(fā)病例都要采集血清學(xué)標(biāo)本來確診病例；出疹后3天內(nèi)采集的血標(biāo)本檢測麻疹I(lǐng)gM抗體陰性或可疑的病例，應(yīng)在出疹后4-28天采集第2份血標(biāo)本；對每起麻疹暴發(fā)疫情至少采集5例暴發(fā)早期病例血清學(xué)標(biāo)本（5例以下應(yīng)全部采集）；實(shí)驗(yàn)室血清檢測結(jié)果7天內(nèi)（從標(biāo)本采集至網(wǎng)上結(jié)果錄入）上報至麻疹監(jiān)測信息系統(tǒng)。麻疹消除前后血清學(xué)監(jiān)測工作的要求基因分型需要在有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行–通過盲樣考核

每個散發(fā)病例都要采集病原學(xué)標(biāo)本鑒定病毒來源---消除階段；要在接觸病例的第一時間采集標(biāo)本；每次爆發(fā)要針對每個可能的傳播鏈都要采集標(biāo)本，以鑒別每個傳播鏈的傳播來源；各省要提高散發(fā)和暴發(fā)疫情病原學(xué)標(biāo)本采集率、病毒分離率和基因型別的及時鑒定率-引入分子生物學(xué)方法；強(qiáng)調(diào)病毒分離的重要性：仍要進(jìn)行病毒分離！各項(xiàng)指標(biāo)嚴(yán)格按照麻疹監(jiān)測方案執(zhí)行：病毒株的及時上送；有能力進(jìn)行基因分型的省份，須及時將原始序列峰圖結(jié)果上報NML,同時按月上送病毒分離物至NML進(jìn)行復(fù)核；麻疹消除前后病毒學(xué)監(jiān)測工作的要求每年采集10份左右典型散發(fā)病例病原學(xué)標(biāo)本，并同時采集血清學(xué)標(biāo)本，分離分析野病毒株特征，獲得基因特征本底資料每次爆發(fā)從爆發(fā)的早期和晚期采集5－10份標(biāo)本，分析野毒株，監(jiān)測它們的分布和流行腮腺炎、水痘病毒學(xué)監(jiān)測工作的要求沒有并發(fā)癥的首次感染麻疹病毒的過程天過程0呼吸道飛沫中的麻疹病毒接觸鼻咽部的上皮細(xì)胞表面。感染上皮細(xì)胞和病毒復(fù)制。1-2病毒傳播至局部淋巴結(jié)2-3初次病毒血癥3-5麻疹病毒在呼吸道上皮，局部淋巴結(jié)和遠(yuǎn)端組織的復(fù)制5-7第2次病毒血癥7-11感染皮膚和其他組織，包括呼吸道11-14病毒到達(dá)血液，呼吸道，皮膚和其他器官15-17病毒血癥減輕以至停止，隨著免疫屏障的建立，病毒及其產(chǎn)物迅速減少。

急性麻疹病毒感染的免疫反應(yīng)典型風(fēng)疹病毒感染的臨床特征

——疾病發(fā)生的時間進(jìn)程天進(jìn)程0患者呼吸道分泌物中的風(fēng)疹病毒侵入接觸者鼻咽上皮表面而感染易感者。在呼吸道上皮組織中建立局部感染，然后病毒傳播到局部淋巴結(jié)。1-22病毒在鼻咽部和局部淋巴結(jié)復(fù)制3-8病毒首次從鼻咽部排出6-20病毒血癥8-14在皮膚和其它部位出現(xiàn)感染灶10-17大量的病毒血癥和病毒尿癥10-24大量的病毒自鼻咽部排出（在出疹前3天至疹后7天）17-19病毒血癥減少，隨后停止典型風(fēng)疹病毒感染的免疫反應(yīng)麻疹/風(fēng)疹控制和消除階段中實(shí)驗(yàn)室的作用

階段監(jiān)測活動控制*通過IgM檢測，在暴發(fā)期間證實(shí)最初的病例*從選擇的病例中分離分析野病毒株特征，獲得基因特征本底資料預(yù)防暴發(fā)和消除*證實(shí)可疑病例的臨床診斷，早期發(fā)現(xiàn)病毒循環(huán)。*從選擇的病例中分離分析野病毒株，鑒定正在循環(huán)的基因型，追溯病毒傳播途徑，了解全球麻疹和風(fēng)疹病毒基因型分布和循環(huán)，幫助評估免疫策略的效果*在必要的情況下，建立人群血清流行病調(diào)查，幫助預(yù)測暴發(fā)。

由于出疹后3-5天內(nèi)采集的標(biāo)本病毒分離率較高，因此用于病毒分離標(biāo)本的采集不能等到對疑似病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室證實(shí)之后才開始，建議在首次接觸病人時同時采集血清學(xué)標(biāo)本、咽拭子標(biāo)本和尿液標(biāo)本標(biāo)本采集的記錄所有采集到的標(biāo)本都要有記錄，最好使用標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室表格。下表中提供了一個標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室表格范例。標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室表格應(yīng)至少包含以下信息：唯一的識別碼（采用統(tǒng)一格式）；實(shí)驗(yàn)室編碼；病人姓名；年齡（或者用標(biāo)準(zhǔn)格式標(biāo)明出生日期）；省份（或地區(qū)）；縣或區(qū)；國家編碼；麻疹和（或）風(fēng)疹疫苗的最后接種日期；出疹日期；病人是否符合病例定義？標(biāo)本類型；標(biāo)本采集日期；標(biāo)本送出日期。用于抗體檢測的血清學(xué)標(biāo)本采集與處理采集方法與采集量：靜脈穿刺取血收集于無菌管中，兒童和成人取5ml，嬰兒取2ml，幼兒取適量處理：全血在進(jìn)行血清分離前可置4–8℃保存24小時，但不可冷凍保存。待全血凝集后，于1500rpm/20分鐘分離血清，在無菌條件下，將血清移至外螺旋蓋帶墊圈的無菌管中，避免吸到紅血球保存和運(yùn)輸：無菌分離的血清在運(yùn)輸之前應(yīng)置于4–8℃保存，保存時間不能超過7天。如果需要保存更長時間，則應(yīng)置于-20℃或更低溫度冷凍保存，運(yùn)送過程中要放置冰袋保溫。要求保存所有血清學(xué)標(biāo)本以備復(fù)核咽拭子標(biāo)本采集避免在進(jìn)食后兩小時內(nèi)取標(biāo)本；患者對光而坐，頭部上仰口張大；口腔進(jìn)入伸向鼻咽部，到達(dá)咽后壁涂擦取標(biāo)本；用無菌棉簽適度用力擦拭腭弓兩側(cè)、咽、扁桃體；注意棉簽不觸及其他部位；在酒精燈火焰上消毒試管口；棉簽插入試管、塞緊；采完后迅速把拭子放到有旋轉(zhuǎn)蓋的并裝有病毒保存液的帶墊圈的螺口塑料凍存管中,在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋。在48小時內(nèi)冷藏運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室（4-8℃）。不同病毒咽拭子標(biāo)本采集的要求麻疹病人可采集柯氏斑于同一病毒采樣管中，以提高病毒分離陽性率；腮腺炎病人可通過咬另一根干凈棉簽后收集唾液于同一病毒采樣管中，以提高病毒分離陽性率；水痘—帶狀皰疹病人可通過無菌采集病人皰疹液于同一病毒采樣管中，以提高病毒分離陽性率。采咽拭子的器材和容器尿液標(biāo)本采集收集10-50ml中段尿液標(biāo)本于無菌離心管中，注意不收集晨尿；1500rpm，4℃離心5分鐘，沉淀細(xì)胞。（最好在收集標(biāo)本后24小時內(nèi)離心）；棄上清，并用2-3ml病毒運(yùn)輸液重懸沉淀，并保存在帶螺旋蓋的凍存管中，-70℃保存；在離心重懸沉淀前不要凍融尿液標(biāo)本。備注：風(fēng)疹病毒不適宜病原學(xué)標(biāo)本的處理與保存市級實(shí)驗(yàn)室收到病原學(xué)標(biāo)本（鼻咽拭子、尿液重懸液）后，首先加入2%三抗處理，然后將標(biāo)本分成3份，1份約200ul用于核酸檢測，1份約1ml用于病毒分離，1份約2ml用于保存用于病毒分離和核酸檢測的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行檢測

24小時內(nèi)能檢測的標(biāo)本，置于4℃保存；不能于24小時內(nèi)接種的標(biāo)本，置于-70℃或以下保存。注：標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融。病原學(xué)標(biāo)本送檢的時限要求能承擔(dān)病毒分離工作的麻疹實(shí)驗(yàn)室在接到標(biāo)本后28天內(nèi)完成病毒分離工作，分離到的毒株在14天內(nèi)送中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所麻疹實(shí)驗(yàn)室（以下簡稱國家麻疹實(shí)驗(yàn)室）進(jìn)行病毒基因定型；不能承擔(dān)病毒分離工作的實(shí)驗(yàn)室在接到標(biāo)本后7天內(nèi)將所有處理好的病原學(xué)標(biāo)本送至湖南省疾病預(yù)防控制中心麻疹實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒分離，并完整填寫標(biāo)本送檢單，附上核酸檢測結(jié)果；特殊標(biāo)本，如國外輸入病例、暴發(fā)疫情病例、媒體關(guān)注、社會影響較大的病例、疫苗相關(guān)病例等，在標(biāo)本采集后要快速送檢（一般要求為標(biāo)本采集后48小時內(nèi)）至省麻疹實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸檢測和病毒分離。省麻疹實(shí)驗(yàn)室在完成核酸檢測后進(jìn)行病毒分離和標(biāo)本上送至國家麻疹實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒基因定型標(biāo)本送檢的生物安全要求標(biāo)本放入專用運(yùn)輸箱內(nèi)，四周放置冰袋，空隙部分用具有吸水和緩沖性能的材料充填