登革熱的危害及防治

登革熱的危害及防治

登吉熱（df）是登吉病毒（d）引起的急性傳染病，通常由蚊子傳播。除常見(jiàn)的DF外,DV的感染還可造成登革出血熱(DHF)、登革休克綜合征(DSS),DHF和DSS的病死率高。據(jù)估計(jì),全球約有25億人受登革病毒感染的威脅,每年約5千萬(wàn)人感染,其中約有210萬(wàn)嚴(yán)重病例、50萬(wàn)例登革出血熱。每年全球約有50萬(wàn)名DHF/DSS患者因病情嚴(yán)重而住院,病死率約5%。登革熱已成為目前世界上分布最廣、發(fā)病最多的蟲(chóng)媒病毒病,由于人口數(shù)量和流動(dòng)性增加及有效疫苗缺乏,對(duì)人類健康造成嚴(yán)重威脅。本文對(duì)登革熱的研究進(jìn)行綜述,為登革熱防治提供借鑒。1從亞洲國(guó)家和地區(qū)分布情況來(lái)看,人群對(duì)dv的初次感染較多,易產(chǎn)生較大的免疫能力全球約有100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)曾發(fā)生過(guò)DF。目前,DF主要流行地區(qū)為非洲、東南亞、中南美洲、西地中海和太平洋的熱帶和亞熱帶地區(qū)。除歐洲外,所有大陸都有DF流行。DHF主要發(fā)生在東南亞、中南美洲地區(qū),以及太平洋的一些島嶼,且亞洲國(guó)家和地區(qū)的病例數(shù)比其他地區(qū)多,主要集中在馬來(lái)西亞、老撾、柬埔寨、泰國(guó)、越南、菲律賓、中國(guó)的大陸和臺(tái)灣地區(qū)。流行地區(qū)登革熱病例常年均有報(bào)告,多發(fā)于氣溫高和雨量大的季節(jié)。在非流行地區(qū),多以輸入性病例或由此導(dǎo)致的本地暴發(fā)為主。在初次傳入的地區(qū),人群對(duì)任何一型DV的初次感染均較敏感,初次暴發(fā)可使大量人群發(fā)病;感染后對(duì)同型病毒有較穩(wěn)固的免疫力,并可維持多年。但對(duì)異型病毒的免疫力則只能維持2個(gè)月至1年。在流行地區(qū),當(dāng)?shù)爻赡昃用褚虼蠖嗍艿礁腥径忻庖吡?故病例多以兒童為主。2病毒復(fù)制動(dòng)力學(xué)DV屬黃病毒科黃病毒屬,是一種有包膜的單股正鏈RNA病毒。按病毒抗原差異可分為4種血清型。病毒基因組長(zhǎng)約11kb,基因組的5′端和3′端均有一段非編碼區(qū)(UTR)。序列分析表明,基因組只含有1個(gè)長(zhǎng)的開(kāi)放讀碼框架,約96%的核苷酸在此框架內(nèi),框架分為2個(gè)區(qū)段,即5′端1/4區(qū)編碼3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(C、M、E)和3′端3/4區(qū)編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NS)?；蚓幋a順序:5′-Ⅰ型帽子結(jié)構(gòu)-UTR-AUG-C-PrM-E-NS1-NS2a-NS2b-NS3-NS4a-NS4b-NS5-UTR-3′。2.1結(jié)構(gòu)蛋白(S)病毒衣殼(C)蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量約為13500,富含有賴氨酸和精氨酸,使之能與病毒體RNA相互作用裝配成核衣殼。病毒基因組的翻譯起始于C蛋白。C蛋白上有特異的抗原決定簇,純化的C蛋白為補(bǔ)體結(jié)合性抗原,但一般不誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和性抗體。在C蛋白之后的前膜(PrM)蛋白是一種糖蛋白,為膜(M)蛋白的前體,在病毒成熟過(guò)程中,PrM糖蛋白經(jīng)特異性酶切后形成一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量約8000的M蛋白,PrM裂解為M的過(guò)程導(dǎo)致了病毒表面結(jié)構(gòu)的重新構(gòu)建,結(jié)果不僅促進(jìn)了病毒從細(xì)胞中釋放,且增加了病毒的感染性。PryorMJ等對(duì)M蛋白39位His殘基在DV-2生命周期中的作用做了調(diào)查,發(fā)現(xiàn)沒(méi)有任何突變能影響細(xì)胞內(nèi)prM/E異二聚體的形成。但是,突變阻滯了病毒的復(fù)制,進(jìn)而影響prM/E復(fù)合物分泌,該項(xiàng)研究結(jié)果表明,M蛋白中的一個(gè)關(guān)鍵性殘基可能在病毒形態(tài)發(fā)生、分泌和進(jìn)入宿主細(xì)胞中發(fā)揮潛在作用。病毒外膜蛋白(E)全長(zhǎng)494個(gè)氨基酸,相對(duì)分子質(zhì)量約為60000,是病毒體最大的結(jié)構(gòu)蛋白和主要包膜糖蛋白,構(gòu)成病毒粒表面的突起,決定著組織嗜性、介導(dǎo)病毒與細(xì)胞受體的結(jié)合,同時(shí)還影響毒力,引起保護(hù)性免疫反應(yīng)和病理?yè)p傷;含有中和抗原表位、型特異表位和種及黃病毒屬特異性表位,同時(shí)有“增強(qiáng)性”的抗原表位,會(huì)引起抗體依賴的增強(qiáng)感染作用(ADE),而ADE與登革出血熱和登革休克綜合征有關(guān)。E蛋白DⅡ和DⅢ區(qū)存在有誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生以及和血凝作用有關(guān)的抗體表位,它能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生保護(hù)性的中和抗體和血凝抑制抗體。有研究顯示DⅢ區(qū)只包含誘導(dǎo)中和抗體的型與亞型特異性抗原表位,不含誘導(dǎo)產(chǎn)生非中和抗體、交叉反應(yīng)抗體的抗原表位,因而減少了產(chǎn)生ADE的危險(xiǎn)。E蛋白可能是某些宿主細(xì)胞表面受體的配體,與受體的結(jié)合可能促進(jìn)DV對(duì)細(xì)胞的感染。它可能還是一種膜融合蛋白,當(dāng)病毒與宿主細(xì)胞接觸時(shí),E蛋白可能在細(xì)胞表面誘導(dǎo)病毒包膜與細(xì)胞膜的融合,從而促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞引起感染。2.2非結(jié)構(gòu)蛋白(NS)非結(jié)構(gòu)蛋白共有7個(gè),在病毒復(fù)制過(guò)程中的作用尚不清楚。但已有資料表明,NS1和NS3在病毒免疫反應(yīng)中起重要作用。有報(bào)道發(fā)現(xiàn),NS1可與STAT3β結(jié)合,對(duì)STAT介導(dǎo)的干擾素信號(hào)通路具有調(diào)控作用。另有研究顯示,NS1可能與DHF/DSS病人血漿滲漏有關(guān),其可與人血漿中的補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子簇Clu競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合,阻礙抑制攻膜復(fù)合物形成的功能,從而導(dǎo)致補(bǔ)體參與的微血管發(fā)生病變。DV2-NS2B可能與蛋白激酶的激活有關(guān)。有研究表明NS3蛋白是一種多功能蛋白,其可能參與了病毒前體蛋白的加工及病毒的復(fù)制。該蛋白還存在可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的CD+4識(shí)別表位和產(chǎn)生特異性體液免疫的CD+8細(xì)胞識(shí)別表位,具有很好的免疫原性,且多具有型間交叉免疫特性。UmareddyI等通過(guò)酵母雙雜交試驗(yàn)確定了NS4B和NS3通過(guò)解螺旋區(qū)域的物理相互作用調(diào)節(jié)DV復(fù)制。NS5是非結(jié)構(gòu)蛋白中分子量最大的一種蛋白,是RNA依賴的RNA聚合酶。YonC等發(fā)現(xiàn)NS5可增強(qiáng)NS3NTP磷酸酶和RNA磷酸酶活性。3傳統(tǒng)血清學(xué)診斷的局限性目前,特異性的DF實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)主要包括病毒分離、抗體和抗原血清學(xué)檢測(cè)、基因診斷等。然而,病毒分離所需時(shí)間較長(zhǎng),達(dá)不到快速診斷的目的,而傳統(tǒng)血清學(xué)診斷又因存在廣泛的交叉反應(yīng),特異性較差。近年來(lái),隨著DV基因組序列成功測(cè)定和注釋,以及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)和分子克隆技術(shù)的建立,對(duì)DV感染的診斷已進(jìn)入到分子生物學(xué)檢測(cè)的新階段。3.1血液樣本分離病毒分離是登革熱的確診依據(jù),但病毒血癥存在的時(shí)間較短,通常在發(fā)熱前2~3d至發(fā)熱后4~5d內(nèi),只有發(fā)病早期的血液樣本分離DV才有較高的檢出率。蚊蟲(chóng)接種病毒被認(rèn)為是最敏感的病毒分離方法,但由于技術(shù)和污染的緣故,存在生物安全隱患,較少被應(yīng)用。目前最常用的方法是利用蚊子卵巢細(xì)胞C6/36細(xì)胞系培養(yǎng)分離病毒。乳鼠腦內(nèi)接種也可用于病毒分離,但敏感性較差。因病毒分離至少需要1周才能出結(jié)果,無(wú)法實(shí)現(xiàn)早期診斷病例的目的。3.2實(shí)驗(yàn)適應(yīng)證方法傳統(tǒng)的血清學(xué)方法包括血凝抑制實(shí)驗(yàn)(HI)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)(CF)和中和實(shí)驗(yàn)。單份血清紅細(xì)胞凝集抑制效價(jià)需超過(guò)1∶1280,補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)效價(jià)要超過(guò)1∶32才有診斷意義,雙份血清恢復(fù)期抗體效價(jià)比急性期高4倍以上者才可確診,這些實(shí)驗(yàn)的敏感性差,且操作復(fù)雜;中和實(shí)驗(yàn)特異性高,但操作困難。這些方法都不適合于基層推廣。免疫熒光法(IFA)可用于檢測(cè)血清特異性的DV抗體。以感染病毒后的C6/36細(xì)胞制成抗原片與患者血清作用后,再結(jié)合熒光標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體,通過(guò)熒光顯微鏡下觀察,可用于檢測(cè)登革病毒抗體的存在,但是型別之間交叉反應(yīng)明顯,不能用于型別的鑒定,而且該方法需要使用熒光顯微鏡且需要經(jīng)驗(yàn)豐富的操作人員,難以在基層普及。ELISA法由于具有敏感性高、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。早期ELISA通常是以病毒感染的細(xì)胞上清液或細(xì)胞裂解液作為抗原,與其它黃病毒之間存在交叉反應(yīng),因此不少學(xué)者從病毒基因?qū)用嬲归_(kāi)了大量的研究,通過(guò)重組抗原進(jìn)行ELISA檢測(cè),致力于尋求更簡(jiǎn)單、特異的診斷方法。3.3pcr檢測(cè)微量目標(biāo)基因隨著PCR技術(shù)成熟,利用PCR檢測(cè)病毒抗原已被廣泛用于DV的抗原檢測(cè)及型別鑒定。根據(jù)PCR擴(kuò)增原理,應(yīng)用引物擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行分型鑒定,能快速特異擴(kuò)增樣品中所存在的微量目標(biāo)基因。針對(duì)目標(biāo)基因,選擇適當(dāng)?shù)耐ㄓ靡飻U(kuò)增可增加病毒檢出率,為了提高試驗(yàn)的靈敏度和特異性,簡(jiǎn)化操作程序,各學(xué)者在模板提取及PCR反應(yīng)條件等方面進(jìn)行了探索,其中單管法較為成功。為解決直接擴(kuò)增法存在非特異性擴(kuò)增問(wèn)題,提高檢測(cè)準(zhǔn)確性,學(xué)者們針對(duì)擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定和相應(yīng)的研究,如用核酸探針?lè)ā⑸飩鞲衅鳈z測(cè)法、序列測(cè)定法及套式PCR技術(shù)等,這些方法不僅能成功地鑒定出登革病毒多重感染的病例,且也被廣泛的用于病毒基因變異研究。4df和dhf疫情防控的展望國(guó)內(nèi)外學(xué)者經(jīng)過(guò)幾十年的努力,雖然在登革熱疫苗方面取得了一定進(jìn)展,但是目前仍無(wú)成熟的疫苗問(wèn)世。制約登革熱疫苗發(fā)展的因素主要是缺乏適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型及抗體依賴增強(qiáng)現(xiàn)象(ADE),理想疫苗應(yīng)同時(shí)誘生對(duì)4種血清型產(chǎn)生中和水平的持久抗體,因此其研制難度大大增加。目前研究的疫苗包括減毒疫苗、滅活疫苗、DNA疫苗、cDNA疫苗、亞單位疫苗、嵌合體疫苗。其中,新型減毒活疫苗和ChimeriVax疫苗在臨床Ⅱ期試驗(yàn)中顯示了良好前景。控制蚊媒是防止DF傳播的重要手段。過(guò)去主要用殺蟲(chóng)劑控制成蚊孳生地,但在一些地區(qū)已出現(xiàn)了殺蟲(chóng)劑抗藥性問(wèn)題,另外還易造成環(huán)境污染,因此應(yīng)減少殺蟲(chóng)劑的濫用,重點(diǎn)清除蚊蟲(chóng)孳生場(chǎng)所,但在DF和DHF發(fā)生暴發(fā)流行時(shí),使用殺蟲(chóng)劑殺滅室內(nèi)外成蚊是必需和有效的方法。為了降低和控制DF流行,建立一個(gè)能及時(shí)早期發(fā)現(xiàn)病例并進(jìn)行疫情預(yù)測(cè)的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)是關(guān)鍵。這個(gè)系統(tǒng)應(yīng)包括早期臨床疑似病人的及時(shí)報(bào)告和確認(rèn)、早期DF流行及時(shí)預(yù)警報(bào)告、人群的免疫狀態(tài)、蚊媒的繁殖情況、密度變化、棲息地種