針層孔菌研究進(jìn)展

針層孔菌研究進(jìn)展

針蟲(chóng)菌（l.：fr.）qil。它也被稱為紅棕色孔菌和胡孫眼，屬于非褶皺菌和假單胞菌科。該真菌多生長(zhǎng)在楊樹(shù)、柳樹(shù)、白樺、櫟、櫸樹(shù)、杜鵑、四照花等闊葉樹(shù)的樹(shù)干上,分布于我國(guó)東北、華北、西北及四川、云南等地。其子實(shí)體在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥中習(xí)稱桑黃,用于治療血崩,血淋,脫肛瀉血,帶下,經(jīng)閉;現(xiàn)代藥理學(xué)又發(fā)現(xiàn)子實(shí)體熱水提取物對(duì)小白鼠肉瘤-180及艾氏癌的抑制率分別為87%和80%,日本已有人把它的提取物制成抗腫瘤劑,并申請(qǐng)了專利。因此針層孔菌是一種極具研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用潛力的真菌。筆者就針層孔菌的研究進(jìn)展做一綜述。1中國(guó)絲茅的人工栽培1.1針層孔菌在ph的生長(zhǎng)陳艷秋等在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行了不同pH值對(duì)比試驗(yàn),針層孔菌在pH4～12之間菌絲長(zhǎng)速無(wú)明顯差異,但pH10～12的菌絲稀疏,長(zhǎng)勢(shì)弱,pH4的菌絲生長(zhǎng)嚴(yán)重受阻。1.2液體培養(yǎng)基的篩選樊錦艷等以菌絲和胞外多糖產(chǎn)量為指標(biāo),對(duì)針層孔菌進(jìn)行了不同碳、氮源及碳、氮源含量組合的試驗(yàn),結(jié)果表明,最佳碳、氮源分別為玉米淀粉、蛋白胨加酵母粉,而且在碳源、氮源含量分別為4.5%、0.5%時(shí)生長(zhǎng)狀況最佳。楊全等通過(guò)液體發(fā)酵培養(yǎng),篩選出了針層孔菌液體發(fā)酵的優(yōu)化培養(yǎng)基:玉米粉5%、麩皮3%、磷酸二氫鉀0.3%、硫酸鎂0.15%、維生素B1200μg·L-1、維生素B2300μg·L-1;最適菌絲體生長(zhǎng)的液體發(fā)酵條件為:培養(yǎng)溫度為26℃,搖瓶轉(zhuǎn)速130r·min-1,pH值6.5,接種量15%～20%,種子液培養(yǎng)時(shí)間為5d,裝液量(500mL三角瓶)為140mL,發(fā)酵時(shí)間為7d。2物理分化2.1piepdg的測(cè)定So等從其液體發(fā)酵的菌絲中提取得到一種具有抗腫瘤活性的糖蛋白。Kim等則從液體發(fā)酵液中提取得到胞內(nèi)和胞外蛋白聚糖,經(jīng)過(guò)分離純化后得到相對(duì)分子質(zhì)量大約在134000～560000的4種物質(zhì)PIEPDG,PIEPAG,PIIPDG,PIIPAG。其中PIEPDG包含79.0%的總糖和7.2%的蛋白質(zhì),總糖部分僅由葡萄糖組成;PIEPAG包含56.7%的總糖和40.8%的蛋白質(zhì),總糖部分由葡萄糖、果糖、肌醇構(gòu)成;PIIPDG包含64.8%的總糖和17.4%的蛋白質(zhì),總糖部分由葡萄糖和肌醇構(gòu)成;PIIPAG包含56.9%的總糖和41.5%的蛋白質(zhì),總糖部分由葡萄糖和肌醇構(gòu)成。2.2化合物55-5,6-二羥基苯并吡喃,5,6-二羥基苯乙烯基-2,5-二羥基苯-2,5-二羥基苯-2,5-二羥基苯-2,5-二羥基苯乙烯基-5,5,5-2-5,5-二羥基苯乙烯基-2,5-二羥基苯并吡喃-1,6-二羥基苯乙烯基-2,5,5,5,5,5-二羥基苯乙烯基-5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-2-5,5,5,5,5,5,5-二羥基苯磺酸5-2-硫-2,5,5,6-二羥基苯并吡喃-2,5,5,5,5,5,5,5,5,5,6-二羥基苯磺酸5-2-硫-2,5,5-二羥基苯并吡喃-2,5,5,5,6-二羥基苯并吡喃-2,5,5-二羥基苯并吡喃-2,5,5,6-二羥基苯乙烯基-2,5,5,5,5,5,5,5,6-二羥基苯乙烯基-2,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-二羥基苯乙烯基-2,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,莫順燕等從針層孔菌子實(shí)體中分離得到桑黃素A{1H,6H-4-甲基吡喃[4,3c]-8,9-二羥基苯并吡喃-1,6-二酮}、桑黃素B{6-(3′,4′-二羥基苯乙烯基)-4-羥基-2-吡喃酮-3-羧酸甲酯}、桑黃素C{1H,6H-4-(6′-羥基苯乙烯基)吡喃[4,3c]-8,9-二羥基苯并吡喃-1,6-二酮}、桑黃素D{1H,6H-4-(5′,6′-二羥基苯乙烯基)吡喃[4,3c]-8,9-二羥基苯并吡喃-1,6-二酮}、桑黃素E{2,3-二氫-2-甲氧基-2-丙酮基-3-(4″,5″-二羥基苯亞甲基)-6-(5′,6′-二羥基苯乙烯基)-4H-呋喃[3,2c]吡喃-4-酮}、桑黃素F{1H,6H-4-[(4″,5″-二氫)-2″-甲基-4″-氧代吠喃基-5″-螺-1′-(5′,6′-二羥基)-2′-吲哚基]吡喃[4,3c]-8,9-二羥基苯并吡喃-1,6-二酮}以及inoscavinA。2.3羥基二氫黃酮,5,7-二羥基-5-2-羥基芐基二氫黃酮的合成莫順燕等從針層孔菌子實(shí)體中首次分離得到柚皮素(4′,5,7-三羥基二氫黃酮),櫻花亭(4′,5-二羥基-7-甲氧基二氫黃酮),二氫莰非素(4′,5,7-三羥基二氫黃酮醇),7-甲氧基二氫莰非素(4′,5-二羥基-7-甲氧基二氫黃酮醇),北美圣草素(3′,4′,5,7-四羥基二氫黃酮)以及桑黃黃酮A(5,7,4′-三羥基-6-2″-羥基芐基二氫黃酮)和桑黃黃酮B(5,7,4′-三羥基-8-2″-羥基芐基二氫黃酮)2個(gè)新的二氫黃酮化合物。2.4hispoli-5-3,4-二羥苯基-2-苯甲酸-2-甲酸立法據(jù)報(bào)道針層孔菌含有落葉松蕈酸、脂肪酸(主要為C22、C24的飽和脂肪酸)、草酸、三萜酸等有機(jī)酸。此后,莫順燕等又從其子實(shí)體分離得到hispolon[6-(3,4-二羥苯基)-4-羥基-3,5-己二烯-2-酮]、4-(3,4-二羥苯基)-3-丁烯-2-酮、原兒茶醛(3,4-二羥基苯甲醛)、丁香酸(4-羥基-3,5-二甲氧基苯甲酸)、原兒茶酸(3,4-二羥基苯甲酸)和咖啡酸[3-(3′,4′-二羥苯基)-2-丙烯酸]。2.5體成分劉金榮等從針層孔菌子實(shí)體中分離得到麥角甾醇;之后,莫順燕等也從其子實(shí)體中分離得到另一種甾類成分異麥角甾酮。2.6香豆素的成分莫順燕等從針層孔菌子實(shí)體中首次分離得到香豆素(苯并吡喃-2-酮)及莨菪亭(7-羥基-6-甲氧基苯并吡喃-2-酮)。2.7特蘭芬Kirk等則從成熟的子實(shí)體中分離得到一種酚類色素;Malama等和Kurchenko等都從針層孔菌中分離得到黑色素。2.8c25的主要酶據(jù)報(bào)道針層孔菌還含有阿魏酸二十八醇酯、C23、C25的飽和烴、氨基酸(主要為甘氨酸、天門冬氨酸)以及木糖氧化酶、過(guò)氧化氫酶、脲酶、酯酶、蔗糖酶、麥芽糖酶、乳糖酶、纖維素酶等多種酶。3關(guān)于藥效研究3.1抑制腫瘤作用3.1.1納米多糖對(duì)直接致突變物質(zhì)的抑制作用針層孔菌中起抗癌、抗突變作用的主要是多糖物質(zhì)。Ohtsuka等從其液體培養(yǎng)的菌絲中提取得到的多糖對(duì)小鼠肉瘤-180的抑制率達(dá)70%。之后,So等又從其液體培養(yǎng)的菌絲中提取得到一種糖蛋白,該糖蛋白具有很好的抗腫瘤活性。Shon等、Kim等采用鼠傷寒沙門氏桿菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)和宿主培養(yǎng)法,發(fā)現(xiàn)以黃豆為基質(zhì)的針層孔菌固體發(fā)酵所得多糖,子實(shí)體水提物所得多糖、液體發(fā)酵后的菌液及菌絲體所得的多糖對(duì)直接致突變物質(zhì)四硝基苯二胺(NPD)、疊氮化鈉(NaN3)和間接致突變物2-氨基芴(2-AF)、苯并芘(B[a]P)誘發(fā)的突變均有抑制作用。同時(shí)以黃豆為基質(zhì)的針層孔菌固體發(fā)酵后所得多糖,在體外和體內(nèi)都能抑制2-氨基-3,8-二甲基甲烷[4,5-f]-喹啉(MeIQx)誘發(fā)的突變及遺傳毒性。隨后Shon等又報(bào)道以黃豆為基質(zhì)的針層孔菌固體發(fā)酵所得多糖對(duì)二甲基苯并蒽(DMBA)聯(lián)合12-O-十四酰佛波醇-13-醋酸鹽(TPA)誘發(fā)的小鼠皮膚腫瘤有抑制作用,在給小鼠背部涂抹溶于水的多糖溶液之后,小鼠的腫瘤數(shù)目和發(fā)生率都降低了70%。韓國(guó)的學(xué)者對(duì)針層孔菌的抗癌、抗突變機(jī)制進(jìn)行了一系列的研究工作。Shon等、Park等報(bào)道,以黃豆為基質(zhì)的固體發(fā)酵所得多糖及以糙米為基質(zhì)的固體發(fā)酵后所得的甲醇提取物在體外和體內(nèi)都能提高醌還原酶(QR)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、小鼠肝微粒體細(xì)胞色素P450同工酶、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶的活性以及谷胱甘肽(GSH)水平,并且能夠有效地抑制多胺代謝。這些研究結(jié)果都說(shuō)明,針層孔菌的多糖在預(yù)防腫瘤方面具有很大的潛力,有希望開(kāi)發(fā)成預(yù)防及治療腫瘤的藥物。3.1.2體外藥敏活性篩選莫順燕等把針層孔菌子實(shí)體中提取得到的桑黃素A、桑黃素C、桑黃素D、桑黃素E、桑黃素F、inoscavinA、桑黃素B、hispolon、4-(3,4-二羥苯基)-3-丁烯-2-酮進(jìn)行體外藥理活性篩選,發(fā)現(xiàn)桑黃素C和桑黃素D對(duì)人肺癌細(xì)胞A549和人肝癌細(xì)胞Bel7402,hispolon對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和人肝癌細(xì)胞Bel7402有較好的選擇性細(xì)胞毒活性。Lee等發(fā)現(xiàn)針層孔菌胞外木質(zhì)素過(guò)氧化物酶降解木材的產(chǎn)物對(duì)多種癌細(xì)胞(肝癌HepG2、成神經(jīng)細(xì)胞瘤SK-N-SH、黑素瘤B16、膀胱防癌MBT-2)顯示毒性。3.1.3-干法張萬(wàn)國(guó)研究針層孔菌對(duì)人外周血單核細(xì)胞(PMNCs)產(chǎn)生γ-干擾素(IFN-γ)的影響,發(fā)現(xiàn)針層孔菌子實(shí)體水提取物具有誘生IFN-γ的能力,有利于其發(fā)揮調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。3.2抗肝纖維化研究張萬(wàn)國(guó)以四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)大鼠肝纖維化,應(yīng)用針層孔菌提取物進(jìn)行抗肝纖維化研究,結(jié)果顯示,該提取物對(duì)肝纖維化具有明顯的預(yù)防和治療效果。同時(shí),張萬(wàn)國(guó)從改善血液動(dòng)力學(xué)性能、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、誘生γ-干擾素等方面,闡述了針層孔菌抗肝纖維化的機(jī)制。3.3小面積vd據(jù)報(bào)道針層孔菌中的落葉松蕈酸具有抑制汗腺分泌的作用,可用于盜汗;此外,它還有洋地黃樣作用,低濃度能興奮平滑肌,大劑量則發(fā)生抑制作用,中毒量可引起延腦中血管運(yùn)動(dòng)中樞、呼吸中樞先興奮而后麻痹。4針層孔菌的栽培我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥很早就有用針層孔菌治療疾病的記載,不僅積累了寶貴的經(jīng)驗(yàn),也為該真菌的深入研究與開(kāi)發(fā)提供了依據(jù)?，F(xiàn)代研究證明,針層孔菌的多糖具有抗癌、抗突變作用,很有希望開(kāi)發(fā)成預(yù)防及治療腫瘤的藥物。因此加強(qiáng)對(duì)該真菌的研究具有重要的意義。針層孔菌是一種多年生木腐菌,由于受生理生態(tài)