藤茶中主要活性成分降血脂作用研究

藤茶中主要活性成分降血脂作用研究

隨著現(xiàn)代生活水平的提高，人們不再吃高脂肪和蛋白質(zhì)等食物，而是在中老年人中增加了高脂肪患者。而高血脂極易導(dǎo)致各種心腦血管疾病的發(fā)生,嚴(yán)重威脅著人們的身心健康?，F(xiàn)有的降血脂藥物大多有副作用,不宜長期飲用。因而,尋求從天然植物中提取具調(diào)節(jié)血脂的活性成分越來越得到人們的關(guān)注。藤茶屬葡萄科蛇葡萄屬顯齒蛇葡萄(Ampelopsisgrossedentata),主要分布在我國湖北、湖南、廣西、江西、福建等地,為民間茶用、藥用植物,其莖葉常用于治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、黃疸型肝炎等癥,已有數(shù)百年的使用歷史。已有研究表明,藤茶安全無毒,具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、抗高血壓、降血糖、保肝護(hù)肝及增強免疫等作用[3~7]。楊新躍研究表明,藤茶和荷葉水提物對大鼠具降脂減肥作用。陳玉瓊、劉翠娥、李玉山等研究表明藤茶水提液對高血脂大鼠有預(yù)防作用。陳曉軍等研究表明,顯齒蛇葡萄黃酮對蛋黃型高脂血癥小鼠血清TC、TG有降低作用。為進(jìn)一步探討藤茶降血脂的功能及其作用的功能成分,本文研究了藤茶中的主要活性成分黃酮及二氫楊梅素降血脂效果及機理,為藤茶的開發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。1材料和方法1.1儀器和試劑盒751型紫外可見分光光度計(上海棱光技術(shù)科技有限公司);冷凍干燥儀(America,Labconco);高速冷凍離心機(EppendorfCentrifuge5810R:Germany)。TC、TG、HDL-C試劑盒(上?？菩郎锛夹g(shù)研究所);SOD、MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所)。其它試劑均為分析純。1.2油醚的提取藤茶黃酮(HT):藤茶(來源于恩施州鳳鳴藤茶有限公司)經(jīng)粉碎過40目,用石油醚回流去脂后,揮干石油醚。用70%的含水乙醇80℃條件下回流提取100min,提取液45℃真空濃縮至少量,然后冷凍干燥。二氫楊梅素(DMY):上述黃酮經(jīng)大孔樹脂初步純化,再用水反復(fù)重結(jié)晶即得樣品,經(jīng)鑒定為二氫楊梅素,含量98%以上。1.3動物測試1.3.1實驗動物動物SPF級雌性KM小鼠90只,體重20±2g,由湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物中心提供,實驗動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(鄂)2003-0005。實驗溫度22~24℃,濕度65%~80%。1.3.2血脂康劑量及黃酮高劑量dmy高脂飼料配方(%):基礎(chǔ)飼料88.7,豬油10.0,膽固醇1.0,脫氧膽酸鹽0.3。設(shè)9組:正常對照(NC);高脂模型(HFC);藥物對照(XZK)(血脂康劑量10mg/kg·bw);黃酮低劑量(FL)(300mg/kg·bw);黃酮中劑量(FM)(600mg/kg·bw);黃酮高劑量(FH)(900mg/kgbw);DMY低劑量(DL)(100mg/kgbw);DMY中劑量(DM)(300mg/kgbw);DMY高劑量(DH)(500mg/kgbw)。灌胃量0.25ml/20g·bw,正常對照組、模型組以等劑量的蒸餾水灌胃。1.3.3動物的血清學(xué)分離將動物適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后,隨機分為9組,每組10只。正常對照組喂以普通基礎(chǔ)飼料,其余組喂高脂飼料。動物自由進(jìn)食和飲水,為期42d,每周稱體重一次,于實驗第42d停食不停水8h,稱重后眼眶采血,血漿2000r/min5℃離心10min,立即分離出血清,5℃冷藏待用。實驗?zāi)┨幩绖游?并解剖小鼠,肉眼觀察小鼠體內(nèi)脂肪沉著情況及臟器變化情況。1.4白hdl-c、血清sod、血清mda、mda的測定血清總膽固醇(TC)、血清甘油三脂(TG)、血清高密度脂蛋白(HDL-C)、血清SOD、血清MDA的測定:用相應(yīng)的試劑盒。血清低密度脂蛋白(Friedewald公式計算):LDL=TC-HDL-TG/5動脈硬化指數(shù):AI=(TC-HDL)/HDL1.5肝臟病理觀察肝系數(shù)測定:小鼠取血處死后,及時解剖,取出肝臟稱重并觀察記載病變情況。肝臟系數(shù)=臟器重/體重×100肝臟病理觀察:處死后的小鼠解剖后,取各組小鼠同一葉肝臟0.5g左右于10%的中性福爾馬林液中固定,并不時搖動,使肝臟固定完全、充分。石蠟包埋切片,HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察組織變化,用Olympus萬用顯微鏡攝影記錄實驗結(jié)果。1.6處理數(shù)據(jù)用SPSS軟件作Ttest顯著性分析。2結(jié)果分析2.1dmy對小鼠體重的影響藤茶黃酮及二氫楊梅素對小鼠體重的影響見表1。表1表明,各組始重較模型組都無顯著差異,但實驗結(jié)束時,DMY高劑量組小鼠體重接近正常對照組小鼠體重,都顯著低于模型對照組小鼠體重。說明,高劑量的DMY劑量有降低小鼠體重的作用。2.2對小鼠血清tc、tg、ldl-c含量的影響藤茶黃酮及二氫楊梅素對小鼠血脂的影響見表2。由表中可以看出,正常對照組小鼠血清TC值極顯著低于模型組,說明模型成功。與模型組比較,DMY中劑量能顯著降低小鼠血清TC值;陽性對照藥,DMY中、高劑量,黃酮低、中劑量能顯著降低血清TG含量;DMY、黃酮高劑量能極顯著提高小鼠血清HDL-C的含量;DMY中劑量能顯著降低血清LDL-C含量。動脈硬化指數(shù)AI除正常對照組極顯著低于模型組外,其余各組與模型組差異不明顯。2.3黃酮、二氫楊樹素對小鼠血清sod活性的影響小鼠血清抗氧化指標(biāo)SOD、MDA測定結(jié)果如表3所示。結(jié)果表明,與模型組比較,黃酮、二氫楊梅素各劑量能顯著提高小鼠血清SOD的活性,降低小鼠血清MDA的含量;血脂康對小鼠血清SOD、MDA影響不明顯。2.4各劑量對肝臟組織病理學(xué)觀察小鼠肝臟系數(shù)測定結(jié)果表明(表4),各劑量組肝臟系數(shù)都極顯著低于模型組。小鼠經(jīng)解剖,肉眼觀察發(fā)現(xiàn)正常組小鼠肝呈暗紅色,色澤均勻,形態(tài)正常。模型組肝臟腫大較嚴(yán)重,肝呈褐黃色,各劑量組肝色澤較模型色澤有所改善。進(jìn)一步作肝臟顯微形態(tài)學(xué)觀察表明(圖1~圖5),正常對照組肝細(xì)胞的肝小葉、中央靜脈、肝細(xì)胞索、肝竇清楚,肝細(xì)胞大小較一致,細(xì)胞核、胞漿清晰。模型組肝小葉界限不清,肝細(xì)胞腫脹,胞漿呈空泡狀,核淡染。肝竇變窄至消失。藥物組肝細(xì)胞隨劑量的增加,肝細(xì)胞水泡的細(xì)胞數(shù)量減少,肝細(xì)胞變性、腫脹的程度降低,細(xì)胞間界限較清晰。因此,藤茶黃酮及二氫楊梅素對高脂飼養(yǎng)的小鼠肝臟有一定的保護(hù)作用。3氧化石墨烯對血清hl-c、sod的氧化作用利用高脂飼料誘導(dǎo)大鼠高脂血癥模型的研究表明,一定劑量的藤茶黃酮及二氫楊梅素能顯著降低小鼠血清TC、TG、LDL含量,升高血清中HDL-C的含量。研究表明,膽固醇的LD是致動脈粥樣硬化的重