KPC酶研究進展.ppt

1、革蘭陰性菌感染約占50% 碳青霉烯類抗生素是最后一道防線 碳青霉烯類抗生素耐藥現(xiàn)象日益嚴重,碳青酶烯酶,碳青霉烯酶是指能夠明顯水解亞胺培南或美羅培南的一類內酰胺酶,它包括Ambler分子分類為A、B、D三類酶,碳青霉烯酶的分類,注：a：+，強水解（kcat2s-1）；+-，弱水解（0.5 s-1kcat2s-1）；-，不水解（kcat0.5s-1） b：+，抑制；+-，不確定；-，不抑制,碳氫酶烯酶,KPC-1,1996年Yigit在美國北卡羅來納州一株對碳青霉烯類藥物耐藥的肺炎克雷伯菌中發(fā)現(xiàn)，由質粒介導的碳青霉烯酶KPC-1(K. pneumoniae carbapenemase-1, KP

2、C-1) KPC-1耐藥表型表現(xiàn)出高度亞胺培南和美羅培南耐藥性(MIC都為16g/ml) 氨基酸序列分析顯示, KPC-1 與SME-1、NMC-A、IMI-1分別有45% 、44%、43%的相似性 （SME-1、NMC-A、IMI-1之間的氨基酸相似性90%），可能是KPC-1與這3種酶不是由同一基因分化而來,Antimicrob Agents Chemother. 2001 Apr;45(4):1151-61.,KPC-2,2002年報道， Yigit等在一株對多種 -內酰胺類藥物和亞胺培南耐藥的腸炎沙門菌檢檢出KPC-2酶。 2003年，又報道了在一株產酸克雷伯菌中檢測到KPC-2酶 2

3、008年Yigit在AAC上進行修正說明，認為KPC-1的650-652的堿基（編碼174位氨基酸）由文獻上報道的AGC（編碼絲氨酸）更正為GGC（編碼甘氨酸） 由此得出結論，KPC-1和KPC-2是同一種酶 等電點是6.7,Antimicrob Agents Chemother. 2003 Dec;47(12):3881-9 Antimicrob Agents Chemother 2008; 52:809.,KPC-3,2000年4月至2001年4月，紐約TISCH醫(yī)院的ICU病房有24名病人被感染了亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌，這是首次報道碳青霉烯類藥物耐藥的肺炎克雷伯菌引起的醫(yī)院性感染 P

4、FGE證實了此次醫(yī)院感染是由3個不同的克隆株引起 PCR擴增發(fā)現(xiàn)了一種新的KPC酶KPC-3，由75kb的質粒編碼，可以接合轉移,KPC酶,KPC-3和KPC-2相比有1個堿基的改變 以后的文獻又陸續(xù)報道了KPC-4、KPC-5和KPC-6 氨基酸結構序列研究顯示，KPC-5、KPC-6被認為是KPC-2到KPC-4的過度體,KPC酶之間核酸、氨基酸的差異,KPC酶,KPC酶之間的關系：,KPC酶,據(jù)文獻報道，3種KPC酶都需要合并膜孔蛋白OmpK35的缺失,引起細菌對碳青霉烯類藥物耐藥,KPC酶的傳播,KPC酶的傳播機制還不是完全清楚 有限的DNA指紋和脈沖凝膠電泳資料顯示與醫(yī)院感染有關。

5、最早在美國、特別在美國的東北部各州蔓延，并造成局部地區(qū)暴發(fā)流行。 以后幾年再世界各地都有報告。,KPC酶的傳播,研究認為，blaKPC位于一種新型的Tn3型的轉座子Tn4401上，其轉座子的結構是KPC基因轉移的原因 這種新型的轉座子結構可以使blaKPC從其原始位置轉移至各類不同的質粒 同時認為轉座子Tn4401是一個復合轉座子，由2次序列插入形成,KPC酶的傳播,Iskpn6位于blaKPc下游，Iskpn7位于blaKPc上游， ISKpn6和ISKpn7可能編碼轉移酶 tnpA和tnpR分別編碼轉移酶 IRL和IRR有39bp構成 最外面的靶位復制點 （TSD）由5-bp ATTGA組

6、成,接合實驗,肺炎克雷伯菌（A1500）、肺炎克雷伯菌（A1500）和粘質沙雷菌S1篩選實驗成功，篩選出其接合子，無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌（C1）篩選實驗失敗，沒有篩選出接合子 等點聚焦電泳證明實驗菌和接合菌都有pI為6.7的-內酰胺酶,產KPC酶菌株及其接合菌的藥敏結果,腸桿菌科細菌中的KPC,銅綠假單胞菌 哥倫比亞 其它碳氫酶烯酶存在時試驗也呈陽性 特異性90%,Lee et al. CMI, 7, 88-102. 2001.,PCR擴增及測序KPC結構基因,對上述細菌PCR檢測KPC基因，無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌（C1）、肺炎克雷伯菌（A1500）顯示948bp左右條帶，陽性對照是浙江二院贈送的

7、產KPC-2的肺炎克雷伯菌。經測序，Blasting比對證實，為KPC-2基因,KPC 問題,如果發(fā)現(xiàn)菌株產KPC，是否應該將碳氫酶烯類抗生素敏感的結果改為耐藥? CLSI建議：報告MIC值，但不報告“S” 或者報告“R”、“I” 任選其一,SUMMARY,KPC 屬于class A 類 -內酰胺酶 對包括超廣譜頭孢菌素類和碳青霉烯類在內的所有-內酰胺類抗生素耐藥 KPC酶 最常見于肺炎克雷伯菌 也曾有過報道:產酸克雷伯菌, 弗勞地枸櫞酸桿菌,腸桿菌屬某些種, 大腸埃希菌,沙門菌屬某些種,沙雷菌屬, 在銅綠中也曾有過報道（哥倫比亞）,SUMMARY,KPC酶位于質粒上; 接合和非接合 blaKPC兩側通常攜帶轉座子序列 報道過的質粒blaKPC 常伴有: 一般-內酰胺酶 超廣譜-內酰胺酶 氨基葡糖苷類耐藥 質粒介導的氟喹諾酮耐藥,SUMMARY,如果臨床菌株對第三、第四代頭孢菌素“R