【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）油菜開花時(shí)間變異分析和擬南芥晚開花突變體鑒定與基因克隆作物遺傳育種學(xué)博士論文

密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 博士 學(xué)位論文 油菜開花時(shí)間變異分析和 擬南芥晚開花突變體鑒定與基因克隆 of of I 摘 要 開花時(shí)間決定植物生殖發(fā)育的時(shí)期和質(zhì)量，是重要的發(fā)育性狀。開花時(shí)間性狀受光溫等環(huán)境因素調(diào)控，一般由多基因控制，存在位點(diǎn)的多態(tài)性。研究油菜開花時(shí)間多態(tài)性及相應(yīng)控制基因 有助于培育適應(yīng)不同季節(jié)和輪作方式的品種。 本研究 包括油菜開花時(shí)間變異與 析，擬南芥入突變體的篩選與晚開花基因克隆。 在 2003 2005 兩年間利用已培育的 78 份油菜 開花時(shí)間變異廣泛的 品系 （甘藍(lán)型油菜 70 份，白菜型油菜 4 份和芥菜型油菜 4 份），于武漢和西寧兩地秋播和夏播， 觀察 油菜 開花時(shí)間變化規(guī)律，并利用 術(shù)檢測(cè) 了 油菜 開花時(shí)間變異的 分子多態(tài)性 。獲得的結(jié)果如下： 1、 78 份油菜材料在武漢兩年秋播的開花時(shí)間變化極顯著，兩年夏播的開花時(shí)間變化不顯著。通過分析日平均氣溫、積溫、日照時(shí)數(shù)和日照總時(shí) 數(shù)等環(huán)境影響因子，發(fā)現(xiàn)武漢兩年秋播開花時(shí)間差異大的原因是兩年的氣溫差異較大所致。 2、通徑分析發(fā)現(xiàn)武漢秋播條件下從播種到開花期油菜所需積溫差異是導(dǎo)致開花時(shí)間變異的主要原因，其它環(huán)境因子是通過積溫而影響開花的 。 3、選取 22 對(duì)選擇性引物組合對(duì) 78 份油菜品系進(jìn)行了 析。 一共擴(kuò)增出 1323 條擴(kuò)增帶，平均每個(gè)引物擴(kuò)增 53 條帶。經(jīng)方差分析，得到 137 條與兩年兩地油菜開花時(shí)間都相關(guān)的 聚類分析 ， 將 78 份油菜分成 5 類 ： 第 1 類是 1 2 月上旬開花 的材料； 第 2 類 僅 1 份 材料，表現(xiàn)特殊； 第 3 類 為 2 月中旬開花 的 材料； 第 4 類是 2 月中下旬到 3 月上旬開花 的材料； 第5 類 為 3 4 月份開花的 材料 ， 全為 白菜型 和 芥菜型油菜。 本研究的第二部分是篩選擬南芥突變體，鑒定克隆開花時(shí)間突變的基因。所篩選的擬南芥突變體庫系用 體系統(tǒng)構(gòu)建的 入突變體（野生型為 態(tài)型）。擬南芥突變體植株的篩選在人工生長(zhǎng)室內(nèi)進(jìn)行，共篩選觀察了 51 660 個(gè) 突變體單株，發(fā)現(xiàn)了 4 株晚開花突變體表型，并且為 性。對(duì)其中一個(gè)株系 進(jìn)一步研究結(jié)果如下： 1、株系 播種到開花的天數(shù)變幅為 34 72 天，平均為 51 天，野生型的變幅為 3033 天，平均為 32 天。 交結(jié)果表明，其 單拷貝插入，因此推斷該插入功能失活突變體株系的上代單株為雜合體，且為一個(gè)插入突變位點(diǎn)。 2、利用 法克隆了該晚開花突變體的插入位點(diǎn)基因的側(cè)翼序列。將這個(gè)片段回收、測(cè)序、去掉載體序列后得到擬南芥基因組中 入左側(cè)側(cè)翼序列，長(zhǎng)度是 798 4、通過生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn) 插入到 因中，該 798側(cè)翼序列和因?qū)?yīng)序列相似性為 100。沒有發(fā)現(xiàn)序列有對(duì)應(yīng)的并經(jīng)過實(shí)驗(yàn)研究的功能，僅發(fā)現(xiàn)該插入功能失活的 因的推定功能為膜整合蛋白；該基因與酵母 因的序列相似性為 酵母 因是調(diào)節(jié) 量的基因，因此推斷 因的功能可能是通過 信號(hào)途徑或調(diào)節(jié)細(xì)胞 量而影響開花，并且和細(xì)胞膜有關(guān)。這是首次發(fā)現(xiàn)植物開花時(shí)間通過 信號(hào)途徑或細(xì)胞 量調(diào)控，盡管需要進(jìn)一步通過轉(zhuǎn)基因深入研究驗(yàn)證。 關(guān)鍵詞 擬南芥 油菜 開花時(shí)間 析 晚開花 變 體 基因克隆 is an of is in a by on to in In 8 003as 1. 8 Pbe by on of 2. to 3. of 8 323 3 137 to 0038 to of 0 5 on in is to 1 660 of 3 of as 1. to of 4 2 d of 0 3. (as In 3:1 on hi CR 3:1 on hi a a . A a of 98 bp in in 3. 98 bp 00%. a of we NA 98 98 bp of we in or by It is a of a is is 錄 2006 . 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 第一章 緒論 . 1 南芥開花時(shí)間調(diào)控途徑簡(jiǎn)述 . 1 . 1 . 4 . 6 . 6 條開花控制途徑的整合 . 7 菜開花時(shí)間基因簡(jiǎn)述 . 8 . 8 . 8 菜開花與溫光因子 影響 . 9 菜 子標(biāo)記研究進(jìn)展 . 10 子標(biāo)記技術(shù)的基本原理 . 10 子標(biāo) 記在油菜研究中的應(yīng)用 . 11 南芥 入突變體研究進(jìn)展 . 13 入突變體的原理 . 13 入位點(diǎn)兩側(cè)基因的克隆 . 14 點(diǎn) . 15 離子的作用 . 15 和 道 . 15 間分布 . 15 號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) . 16 與 開花 . 16 第二章 油菜開花時(shí)間多態(tài)性分析 . 19 言 . 19 驗(yàn)材料 . 20 驗(yàn)方法 . 21 . 21 . 21 . 21 . 24 驗(yàn)結(jié)果 . 24 . 24 . 29 V . 33 論和分析 . 33 第三章 擬南芥晚開花突變體鑒定和基因克隆 . 36 言 . 36 驗(yàn)材料 . 36 . 36 . 36 驗(yàn)方法 . 37 . 37 . 37 . 38 . 39 . 41 . 41 . 43 驗(yàn)結(jié)果 . 43 . 43 . 44 . 46 . 48 . 49 論和分析 . 58 第四章 結(jié)論 . 59 參考文獻(xiàn) . 60 致 謝 . 72 作 者 簡(jiǎn) 歷 . 73 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 油菜是十字花科蕓苔屬油用植物，是世界四大主要油料作物之一 ， 包括甘藍(lán)型油菜、芥菜型油菜、白菜型油菜 3個(gè)栽培種 (1998) 。 油 菜是我國中、北亞熱帶唯一能在較低溫條件下 (0 5 ) 生長(zhǎng)發(fā)育、能利用冬季 空閑土地的油料作物。因此，它對(duì)擴(kuò)大復(fù)種指數(shù)作用巨大，在種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中占有重要地位，其種植面積呈逐年增加趨勢(shì)（廖桂平， 2001）。 擬南芥(十字花科 (南芥屬 (年生草本植物 ， 廣泛分布于歐洲、亞洲、北美洲 和 中國 各 地。 20世紀(jì)初植物學(xué)家 許多優(yōu)點(diǎn) ：（ 1）形態(tài)個(gè)體小，高度只有 30 2）生長(zhǎng)周期快，從播種到收獲種子一般只需 6周左右；（ 3）種子多，每 株每代可產(chǎn)生數(shù)千粒種子；（ 4）形態(tài)特征簡(jiǎn)單；（ 5）基因組?。?125 只有 5對(duì)染色體，基因組測(cè)序已經(jīng)完成（ 2000）。擬南芥具有短生育周期和冬性一年生兩種不同的生態(tài)型。短生命周期是在 8星期之內(nèi)完成一個(gè)生命周期， 態(tài)型屬于此類。最近十余年來，利用擬南芥為模式植物，對(duì)高等植物開花時(shí)間調(diào)控機(jī)理與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步（張素芝， 2006）。開花時(shí)間是植物的進(jìn)化特性，是作物的重要數(shù)量性狀，它的變化受環(huán) 境和遺傳因素調(diào)控。開花是植物由營養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)轉(zhuǎn)型的最重要的一個(gè)過程，在合適的時(shí)間完成這個(gè)轉(zhuǎn)型是植物實(shí)現(xiàn)生殖發(fā)育所必需的。利用擬南芥為模式植物，對(duì)高等植物開花時(shí)間調(diào)控機(jī)理與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，已經(jīng)鑒定出來至少 4個(gè)不同的開花調(diào)控途徑。 南芥開花時(shí)間調(diào)控途徑簡(jiǎn)述 周期反應(yīng)途徑 在光周期途徑中的主要調(diào)控基因有 長(zhǎng)日照 (提前開花，突變體 co,gi,ft,件 下延遲開花，但在短日照 (件下開花時(shí)間與野生型相似。 長(zhǎng)日照下促進(jìn)擬南芥開花的轉(zhuǎn)錄因子。 通過上調(diào)花分生組織特性基因 性促進(jìn)開花。 CO 長(zhǎng)日照下比短日照下表達(dá)豐度高，表明 長(zhǎng)日照誘導(dǎo)。在長(zhǎng)日照下 明晝夜節(jié)律鐘控制 錄（ et 1999） 。 光對(duì)開花時(shí)間的調(diào)節(jié)是通過生物鐘 (現(xiàn)的，生物鐘通過信號(hào)輸出途徑將日照長(zhǎng)度信號(hào)傳輸給 而誘導(dǎo)其下游基因 表達(dá)，啟動(dòng)日照長(zhǎng)度對(duì)開花時(shí)間的調(diào)控， 在此過程中，任何影響光信號(hào)檢測(cè) (如光受體 )、生物鐘組分和光信號(hào)輸入、輸出生物鐘途徑的突變都會(huì)影響擬南芥的開花時(shí)間 (,2001)。 早期激活目標(biāo)基因，由光誘導(dǎo)的 錄后激活 達(dá)，在長(zhǎng)日黎明后 20 小時(shí)夜表達(dá)達(dá)到高峰，在 變體中沒有 達(dá)高峰。 晝夜節(jié)律鐘和 因之間的連接基因，在長(zhǎng)日途徑內(nèi)晝夜節(jié)律鐘調(diào)節(jié)下游基因 表達(dá) (et 2000； 國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 2 et 2001)。長(zhǎng)日照下 體基因是 )。 O 的上游， 變體抑制 因的早花表型。 與晝夜節(jié)律鐘相關(guān)的基因有 ) 和 ） 等。 因通過磷酸化作用調(diào)控） 基因表達(dá) ( 000)， 制 和 表達(dá)，這三個(gè)基因共同啟動(dòng)花的發(fā)育轉(zhuǎn)換和花被特性基因的表達(dá)，當(dāng)缺少其中之一時(shí)，由其它兩個(gè)基因控制相對(duì)緩慢的階段轉(zhuǎn)換。 性突變體誘導(dǎo)所有的頂端分生組織轉(zhuǎn)變成花分生組織，提前開花，證明 因抑制花序頂端形成花，并且抑制營養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖發(fā)育的轉(zhuǎn)換 (et 1997； et 1997； 991；992)。 )編碼一個(gè) 同源基因，抑制 表達(dá)，在長(zhǎng)日照下被 導(dǎo)。 葉脈組織中共表達(dá)，在整個(gè)發(fā)育過程中 制 表達(dá)，導(dǎo)致不依賴長(zhǎng)日照的早開花。在 表達(dá)后， 以降低表達(dá)量， 通過抵消 激活作用來沉默 完全抑制其表達(dá)的，說明 止在莖頂端過早形成花器官（ et 2003）。 長(zhǎng)日條件下推遲開花，短日下沒有作用或作用很弱。 達(dá)是受晝夜節(jié)律鐘調(diào)節(jié)的，轉(zhuǎn)錄水平峰值出現(xiàn) 在黎明后 8 10 點(diǎn)。 達(dá)產(chǎn)物是一類新的膜蛋白。 是晝夜節(jié)律鐘特殊的輸入組分，因?yàn)?變體中影響被時(shí)鐘調(diào)節(jié)的基因表達(dá)類型，如 位基因影響光信號(hào)向節(jié)律鐘的輸入，在 變體的 因表達(dá)水平降低，證明在光周期促進(jìn)開花途徑中 節(jié)開花時(shí)間基因的表達(dá) (et 1999； et 1999)。 量異位表達(dá)可以修復(fù) 變體表型， 用于 上游 (et 2000)。 因介導(dǎo) 因在 光下的節(jié)律性表達(dá)。 光受體的功能是感受光周期的，是光周期途徑的輸入系統(tǒng)。擬南芥至少依賴 9 個(gè)光感受體來調(diào)節(jié)自身的大多數(shù)光反應(yīng)，包括 5 個(gè)光敏素 ( 2 個(gè)隱花素 ( 2 個(gè)向光蛋白 ( ，光敏素和隱花素都調(diào)節(jié)開花時(shí)間。新發(fā)現(xiàn)的藍(lán)光受體有 一種受藍(lán)光誘導(dǎo)而發(fā)生自身磷酸化的黃素蛋白，主要介導(dǎo)高強(qiáng)度藍(lán)光下葉綠體的避光反應(yīng)（ 002）。 擬南芥的光敏素 自編碼 輔基蛋白， 促進(jìn)開花的光受體， 其它 都是 抑制開花的。 制開花阻遏物的生物合成， 導(dǎo)遠(yuǎn)紅光促進(jìn)開花和抑制下胚軸延長(zhǎng)，持續(xù)遠(yuǎn)紅光下 變體不開花。紅光下（ 660進(jìn)開花， 抑制開花，這是不依賴生物鐘功能的，也不依賴 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。 調(diào) 表達(dá)，因此 能與不同開花途徑結(jié)合激活下游基因的表達(dá)。 變體提前開花 (et 1995)。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 圖 1 擬南芥花發(fā)育途徑 ( B,2000) B,2000) 隱花色素介導(dǎo)藍(lán)光反應(yīng)，隱花素的表達(dá)隨光周期變化。 碼含有黃素的藍(lán)光受體，促進(jìn)開花。光周期長(zhǎng)度信號(hào)接受或傳導(dǎo)受 因調(diào)控， 是 正向調(diào)節(jié)基因。 基因表達(dá)水平在長(zhǎng)日下比短日下大，兩者的總活性比其它光受體的大，因此 因表達(dá)豐度變化可能是由于光誘導(dǎo)下光受體 蛋白的水解造成的，二者是主要的日長(zhǎng)感受因子，是通過 拮抗作用來調(diào)節(jié)開花的 (et 1994；et 1995)， 光接受和 晝夜節(jié)律表達(dá)高峰一致性很高，這對(duì)誘導(dǎo)開花基因 達(dá)和光周期促進(jìn)開花很關(guān)鍵。 因的突變或超量表達(dá)都導(dǎo)致對(duì)光周期的反應(yīng)降低（ 997； 1991； et 1998； et 1999）。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 4 ) 是中心振蕩器的組分，是通過晝夜節(jié)律鐘反饋環(huán)來調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律表達(dá)，當(dāng)組成型表達(dá)時(shí)它們又抑制所有觀察到的節(jié)律。它們的表達(dá)水平受晝夜節(jié)律鐘調(diào)控，在黎明后出現(xiàn)高峰。在長(zhǎng)日照條件下過表達(dá) 起晚花表型，功能喪失的 基因縮短晝夜節(jié)律期長(zhǎng)度約 3 小時(shí)。 因在中心振蕩器和輸出途徑都起作用 (et 1997； 1998)。 F 也稱作 與了多蛋白復(fù)合體的形成， 晚間 錄水平高，在持續(xù)光照條件下出現(xiàn)晝夜節(jié)律。持續(xù)光照下 變體的晝夜節(jié)律周期很短，說明 通過反饋環(huán)來控制自己的節(jié)律表達(dá)。 蛋白共同來調(diào)節(jié)其它基因（如 的表達(dá)。 早期核內(nèi)光敏色素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的組分，核內(nèi) 蛋白復(fù)合體是光信號(hào)影響晝夜節(jié)律鐘發(fā)揮作用的結(jié)合點(diǎn)。 白能在核內(nèi)結(jié)合 動(dòng)子， 抑制 因的表達(dá)。在 變體中， 達(dá)周期長(zhǎng)度很短，表達(dá)水平降低，因此， 一個(gè)負(fù)向反饋調(diào)節(jié)環(huán)。 成一個(gè)含有假反應(yīng)調(diào)節(jié)因子 互補(bǔ)反饋環(huán)，從而利用反饋機(jī)制進(jìn)行自身的調(diào)節(jié) (et 2000)。 晝夜節(jié)律鐘的正向調(diào)節(jié)因子。它位于核內(nèi)，通過參與光輸入途徑來調(diào)節(jié)一些光反應(yīng)基因的表達(dá)。 變體在長(zhǎng)日和短日下均比野生型開花早，在持續(xù)光照條件下沒有晝夜節(jié)律性，而在持續(xù)黑暗中能夠維持節(jié)律性。 因 功能是測(cè)量 日長(zhǎng)和抑制短日下的開花 (et 1996； et 2001b) 。 化反應(yīng)途徑 冬性一年生的植物（如冬油菜、冬小麥、黑麥等）成花主要受低溫的影響，生長(zhǎng)初期給予一定時(shí)期的低溫處理，可大大加快其開花進(jìn)程，并正常結(jié)實(shí)，這種低溫促進(jìn)植物開花的效應(yīng)被稱為低溫誘導(dǎo)作用或春化作用（ 植物春化發(fā)生反應(yīng)的時(shí)間與發(fā)生效應(yīng)的時(shí)間間隔很大，具有時(shí)間分離性，這一點(diǎn)不同于光周期反應(yīng)。植物春化作用有以下幾個(gè)明顯特點(diǎn)：（ 1）一般認(rèn)為莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)和胚芽是接受低 溫的部位。（ 2）不同植物春化所需的低溫有所不同，一般有效低溫介于 0 10之間，最適溫度為 5 7。春化過程是一個(gè)緩慢的量變過程（一般 4， 4 8 周），春化過程的代謝方式具有嚴(yán)格的順序性和多步驟性，最適宜的低溫是在其他條件相同時(shí)，完成春化時(shí)間最短的溫度。（ 3）春化效應(yīng)可以被高溫所解除，即脫春化作用（ （ 4）春化效應(yīng)隨著有絲分裂一直保留在莖端生長(zhǎng)點(diǎn)，即正在進(jìn)行細(xì)胞分裂的組織才具有感受春化的能力，并通過細(xì)胞分裂傳遞春化效應(yīng)。低溫產(chǎn)生的春化效應(yīng)會(huì)因減數(shù)分裂或其他有性生殖過程而消失 ，不能遺傳給子代，即植物有性繁殖導(dǎo)致春化作用的消失。 通過代謝抑制劑進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)春化過程是一個(gè)漫長(zhǎng)、復(fù)合多步驟、分階段性的復(fù)雜過程 ，有階段性和順序性，一般在生長(zhǎng)點(diǎn)發(fā)生質(zhì)變。湯佩松、譚克輝提出春化過程可劃分為以糖的氧化過程為主、以核酸代謝為主及以蛋白質(zhì)代謝為主的 3個(gè)過程。所以春化是某些重要基因在特定的條件下按照一定的時(shí)空順序、不斷解除阻遏而得到程序性表達(dá)的遺傳控制的生理生化過程 (996； 1999；湯佩松， 1963；譚克輝， 1981； 1992；劉磊， 2005)。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 5 )基因在春化反應(yīng)過程中起中心作用，也是多條開花途徑的匯聚點(diǎn)。 錄因子，編碼一種阻抑蛋白來調(diào)節(jié)開花時(shí)間，并在春化過程中起關(guān)鍵作用 (et 1997)。春化途徑與開花基因去甲基化有關(guān)， 甲基化程度誘導(dǎo)的 錄物低，因此 因在開花起始時(shí)起關(guān)鍵作用。冬性一年生擬南芥的春化與 水平表達(dá)有關(guān)，晚花生態(tài)型和突變體的 錄水平高而且穩(wěn)定，春化反應(yīng)降低 表達(dá)水平并促進(jìn)開花。冷處理?xiàng)l件下的 度下降，降低水平是與開花時(shí)間漸進(jìn) 一致的 ( 1999a; et 1999)。 擬南芥基因組的顯性單拷貝基因，開放閱讀架是 609 個(gè)氨基酸。 碼一個(gè)生物化學(xué)功能未知的新蛋白 (001； et 2000)。 因產(chǎn)物通過參與蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)之間的相互作用來提高 豐度 ( 1999b； et 1999)。分析擬南芥晚花生態(tài)型 早花生態(tài)型 雜交后代，發(fā)現(xiàn)激活的 位基因是依賴 位基因的活性的， 調(diào) 達(dá)，高水平 制開花。過表達(dá) 以在缺少 ， 帶 可以被春化反應(yīng)修復(fù) (et 2000； 995)。冬性的晚花表型是兩個(gè)顯型等位基因 同作用的結(jié)果，大多數(shù)早花生態(tài)型是由于 位基因序列缺失打斷了開放閱讀架所致，自然發(fā)生的晚 花生態(tài)型 因增加 表達(dá)，因而推遲開花，春化處理后提前開花，證明 這些早花 類型是來自 因失活的晚花類型 (001)。 自主促進(jìn)開花途徑也像春化反應(yīng)途徑一樣通過降低 表達(dá)水平促進(jìn)開花， 自主促進(jìn)途徑可以單獨(dú)調(diào)節(jié) 自主途徑中 對(duì) 基因功能分析結(jié)果證明春化作用是通過延長(zhǎng)低溫時(shí)間來降低 表達(dá)水平，但 是春化反應(yīng)必須的基因。長(zhǎng)日途徑、自主途徑和 徑在長(zhǎng)日條件下促進(jìn) 開花，并分別被 因抑制。自主途徑分別通過抑制 表達(dá)，激活長(zhǎng)日途徑和 徑促進(jìn)開花。春化處理的 突變體比 突變體開花時(shí)間早，表明春化作用可以不依賴于 功能促進(jìn)開花。不依賴 徑的春化作用分子機(jī)理還不清楚，因此，春化反應(yīng)促進(jìn)開花可以依靠 可以不依靠 因功能。依賴春化反應(yīng)的途徑對(duì)開花時(shí)間的啟動(dòng)不是必須的，如果一條或多條途徑被突變或者環(huán)境條件阻抑，而其它途徑對(duì)開花促進(jìn)信號(hào)作用有限的時(shí)候，就可以通過冷處理激活春化反 應(yīng)途徑促進(jìn)開花 ( 001)。 因通過改變?nèi)旧w的結(jié)構(gòu)變化來調(diào)節(jié)開花時(shí)間，在 變體中 因附近染色體結(jié)構(gòu)改變。在冷處理初期 變體中 度降低，升高溫度后 變體不能維持 明 et 2001； et 2002）。 顯著調(diào)節(jié)抗冷反應(yīng)的基因是 F 因編碼一個(gè) 蛋白，它可能是泛素蛋白連接酶，這意味著它在大量植物信號(hào)傳導(dǎo)途徑中作為負(fù)向調(diào)節(jié)基因，但在冷信號(hào)傳導(dǎo)途徑中還未得到確認(rèn)。 變體是春化和冷脅迫之間的聯(lián)系基因 ( et 1998； et 2001)。 春化作用 不 改變植物的基因，不具有遺傳性。 低表達(dá)水平后，在隨后春化處理形成的植物器官中也是很低的，不能通過有性生殖傳遞給后代，減數(shù)分裂不能維持春化作用，因此植株中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 6 需要重新進(jìn)行春化作用。可能甲基化調(diào) 控的基因表達(dá)才是春化作用的基礎(chǔ)，脫甲基化的擬南芥晚花突變體提早開花（ 998； et 1999）。春化作用的異位調(diào)節(jié)可能是通過染色體結(jié)構(gòu)的改變來調(diào)節(jié)的，它與甲基化的聯(lián)系尚不清楚 。 主調(diào)控開花途徑 是在長(zhǎng)日照和短日照條件下組成型促進(jìn)開花的基因，不依賴環(huán)境因子， 變體對(duì)光照和春化敏感，在所有光周期條件下都是晚花表型( 999b； et 1999)。晚花突變體開花需要春化處理，也可被遠(yuǎn)紅光修復(fù)。與 徑或 徑晚花突變體及野生型相比，自主途徑突變體 達(dá)量很高（ 999b； et 1999; 001)。 白包含兩個(gè) 合區(qū) 一個(gè) 白蛋白作用域， 體外可以結(jié)合到 (et 1997)。 成花轉(zhuǎn)變?cè)缙诒匦璧幕?