電針對震顫麻痹大鼠黑質(zhì)Bcl

電針對震顫麻木大鼠黑質(zhì)Bcl〔〕:

摘要：目的研究電針對震顫麻木大鼠黑質(zhì)內(nèi)Bcl-2、Bax表達(dá)的影響，探究電針治療震顫麻木的作用機(jī)制。方法36只造模成功的雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、電針組和左旋多巴藥物組，另設(shè)正常組、假手術(shù)組，每組12只，共60只大鼠。應(yīng)用免疫組化法觀察大鼠黑質(zhì)內(nèi)Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。結(jié)果與正常組、假手術(shù)組相比擬，模型組、電針組、左旋多巴藥物組Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)均上調(diào)〔P

1資料與方法

1.1一般資料

100只雄性成年SPF級(jí)SD大鼠，〔25020〕g體重。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理中心提供。所有實(shí)驗(yàn)用鼠常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由飲食、飲水，實(shí)驗(yàn)所有過程符合動(dòng)物倫理實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組

利用行為學(xué)挑選造模成功的大鼠36只，隨機(jī)分為模型組、電針組、左旋多巴藥物組3組，每組12只，并設(shè)立正常組及假手術(shù)組2組，每組12只大鼠。正常組給予常規(guī)飼養(yǎng)；假手術(shù)組僅手術(shù)，不注射6-OHDA；模型組造模完成后不給予治療；電針組給予電針治療；左旋多巴藥物組給予口服左旋多巴治療。

2.1.1動(dòng)物模型建立

采用右側(cè)偏側(cè)帕金森模型，造模前用0.3%戊巴比妥鈉進(jìn)展腹腔麻醉，待大鼠角膜反射消失后，將大鼠固定于立體定位儀上。在無菌環(huán)境中沿正中矢狀線切開大鼠顱頂部皮膚，剝離皮下組織及骨膜，暴露前囟、人字縫，按PellegrinoLJ【1】等編著的大鼠腦立體定位圖譜確定右側(cè)黑質(zhì)兩注射點(diǎn)位坐標(biāo)：第1點(diǎn)為前囟后3.0mm，正中線右側(cè)2.5mm，硬腦膜腹側(cè)8.6mm；第2點(diǎn)為前囟后2.4mm，正中線右側(cè)2.7mm，硬腦膜腹側(cè)8.6mm。以鼠顱骨鉆按上述坐標(biāo)鉆直徑為5mm的孔。用10L微量進(jìn)樣器以1L/min速度向嘴側(cè)注射4L6-OHDA、向尾側(cè)注射3L6-OHDA，每次注射完成后留針10min，然后以1.0mm/min的速度緩慢退針，再用明膠海綿填塞顱骨孔，對切開進(jìn)展縫合。造模完成后2周腹腔注射APO誘發(fā)旋轉(zhuǎn)行為〔向健側(cè)旋轉(zhuǎn)〕，注射10min后開始記錄，共記錄30min，旋轉(zhuǎn)速度到達(dá)6轉(zhuǎn)/min視為模型制備成功【2】。

2.1.2治療方法

電針組大鼠給予電針治療。在右側(cè)舞蹈震顫區(qū)上點(diǎn)與下點(diǎn)采用0.25mmx25mm毫針進(jìn)展針刺，連接KWD-808Ⅱ型全能脈沖電療儀，電針波形選擇疏密波〔頻率為1Hz〕，調(diào)節(jié)電流強(qiáng)度至頭部皮膚細(xì)微顫抖，每次治療30min，每日治療1次，共治療20天。左旋多巴藥物組給予左旋多巴1.0mg灌胃給藥，每日治療1次，共治療20天。

2.1.3標(biāo)本制備

治療完畢后用0.3%戊巴比妥鈉〔10mL/kg〕進(jìn)展腹腔麻醉，灌注固定后，取腦內(nèi)黑質(zhì)置于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋備用。

2.2檢測指標(biāo)

2.2.1行為學(xué)檢測

治療完畢后進(jìn)展行為學(xué)檢測，所有實(shí)驗(yàn)用鼠給予腹腔注射APO，以誘發(fā)大鼠向左側(cè)旋轉(zhuǎn)，APO注射10min后開始記錄，記錄30min內(nèi)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)。

2.2.2HE染色

在40x10倍光鏡下觀察實(shí)驗(yàn)大鼠腦內(nèi)黑質(zhì)病理形態(tài)學(xué)改變。

2.2.3免疫組化

在40x10倍光鏡下觀察實(shí)驗(yàn)大鼠腦內(nèi)黑質(zhì)Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)情況。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)分析處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)展，用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示所有數(shù)據(jù)，分析不同組采用單因素方差，采用t檢驗(yàn)組間比擬，P0.05〕。見表1。

2.2病理形態(tài)學(xué)檢測

正常組、假手術(shù)組大鼠黑質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較多，組織構(gòu)造明晰可見，細(xì)胞形態(tài)正常，無變性、壞死；模型組大鼠黑質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，胞體皺縮，胞核固縮，可見炎性細(xì)胞浸潤；電針組、左旋多巴藥物組大鼠黑質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較模型組增多，細(xì)胞變性程度減輕。

2.3黑質(zhì)內(nèi)Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)

與正常組、假手術(shù)組相比擬，模型組、電針組、左旋多巴藥物組Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)均上調(diào)〔P

3討論

目前，震顫麻木的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。大量實(shí)驗(yàn)研究說明，震顫麻木與多巴胺能神經(jīng)元凋亡親密相關(guān)【3】。Bcl-2和Bax參與細(xì)胞凋亡的過程，并發(fā)揮各自不同的作用。Bcl-2是抑制凋亡的因子，對神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用，而Bax是一種促凋亡蛋白，可以加速凋亡的進(jìn)程。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與模型組相比擬，電針組大鼠黑質(zhì)內(nèi)Bcl-2的表達(dá)明顯升高，Bax的表達(dá)顯著降低，說明電針可以通過上調(diào)Bcl-2及下調(diào)Bax的表達(dá)起到治療震顫麻木的作用，這可能是電針治療震顫麻木的作用機(jī)制。且電針組與左旋多巴藥物組相比擬，對上述二者的影響不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明電針治療與藥物治療的療效接近。相比應(yīng)用左旋多巴治療，電針治療不存在耐藥性及毒性等問題，因此日后在臨床治療中可采用電針療法治療震顫麻木。

參考文獻(xiàn)

【1】PellegrinoLJ,PellegrinoAS,CushmanAJ.Astereotaxicatlasoftheratbrain[M].PlenumnPress,1979:43.

【2】趙宇輝,黃亮,孫忠人.電針對震顫麻木大鼠行為學(xué)和細(xì)胞凋亡的影響[J].針灸臨床雜志,2