液相色譜實驗報告

1、華南師范大學(xué)實驗報告液相色譜分析混合樣品中的苯和甲苯一、實驗?zāi)康?、掌握高效液相色譜定性和定量分析的原理及方法； 2、了解高效液相色譜的構(gòu)造、原理及操作技術(shù)。二、實驗原理高效液相色譜由儲液器，泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成，儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀。三、主要儀器和試劑主要儀器：島津液相色譜儀(LC-10A

2、T)配有紫外檢測器，Phenomenex ODS 柱； 10L微量注射器試劑：苯標(biāo)準(zhǔn)溶液：10.0L/mL ； 甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液：10.0L/mL； 苯、甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：10.0L/mL ； 甲醇：80% ； 苯和甲苯混合待測溶液；四、實驗步驟1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制系列用100L的微量注射器分別量取10L、20L、 50L 、100L的苯和甲苯的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0L/mL），再分別加入90L、80L、50L 、0L甲醇將其稀釋，作為待測液，其濃度分別為1L/mL 、2L/mL 、5L/mL 、10L/mL2、色譜條件優(yōu)化按操作規(guī)程開機(jī)，并調(diào)好色譜條件，使儀器處于工作狀態(tài)?？刂屏鲃酉嗔魉贋榧状迹?

3、.8mL/min、水：0.2 mL/min；柱溫30；檢測波長254nm；觀察記錄保留時間，通過軟件分析兩峰分離效果。改變色譜條件，控制流動相流速為甲醇：0.95mL/min、水：0.05 mL/min；柱溫30；檢測波長254nm；觀察記錄保留時間，通過軟件分析兩峰分離效果。通過觀察兩種色譜條件下的峰分離效果，選擇最佳的色譜條件。若還不能達(dá)到最佳的分離效果，可以再設(shè)定不同的色譜條件，然后根據(jù)峰分離效果，選擇最佳的色譜條件。3、苯、甲苯定性分析在最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10L微量注射器分別進(jìn)樣5L苯和甲苯混合待測溶液，5L苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0L/mL）和5L甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0L/mL）

4、(微量注射器用甲醇潤洗35遍)，觀察并記錄色譜圖上顯示的保留時間，確定苯和甲苯的峰。4、苯、甲苯定量分析 最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10L微量注射器分別進(jìn)樣1.0L/mL 、2.0L/mL、4.0L/mL、10.0L/mL的苯和甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液5L。觀察并記錄各色譜圖上的保留時間和峰面積。繪制苯和甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積與相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、苯和甲苯混合待測溶液分析 最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10L微量注射器進(jìn)樣苯和甲苯混合待測液5L，觀察并記錄各色譜圖上的保留時間和峰面積。根據(jù)峰面積在工作曲線上查出苯和甲苯待測液的濃度，并計算試樣中苯和甲苯的含量。五、實驗數(shù)據(jù)及分析高效液相色譜數(shù)據(jù)報告

5、一、色譜條件優(yōu)化80%95%二、定性分析苯甲苯樣品苯甲苯保留時間3.7654.917三、 定量分析苯、甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml。10 ul/ml1 ul/ml苯甲苯濃度峰面積濃度峰面積1 ul/ml2126851 ul/ml3877102 ul/ml4292912 ul/ml7479835 ul/ml9545375 ul/ml153389210 ul/ml190534310 ul/ml2928373Y = aX + ba = 186510.8b = 36165.15R2 = 0.9995768R = 0.9997884Y

6、 = aX + ba = 278490.9b = 146280.5R2 = 0.9991048R = 0.9995523四、 未知樣品濃度未知樣品苯甲苯濃度22.7ul/ml3.6ul/ml濃度12.9 ul/ml3.6ul/ml六、 實驗討論由于實驗中待測溶液的組分只有苯和甲苯兩種物質(zhì)，組分比較簡單，只要在實驗過程中，嚴(yán)格控制且定量進(jìn)樣，就能采用操作、計算簡便的標(biāo)準(zhǔn)曲線法得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，因而采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。若采用歸一化法或內(nèi)標(biāo)法，雖然能得到準(zhǔn)確更高的實驗結(jié)果，但由于實驗操作及計算均較為復(fù)雜，實驗及數(shù)據(jù)處理的時間長，效率相對不高，故實驗中采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法作為定量的方法。最佳色譜條件的選擇是本實驗準(zhǔn)確度的關(guān)鍵。若苯與甲苯的峰分離效果過小，苯與甲苯的峰未能完全分離，必定影響其保留時間和峰面積的計算，是實驗準(zhǔn)確度減小，數(shù)據(jù)誤差加大；若苯與甲苯的峰分離效果過好，雖然能將苯與甲苯的峰完全分離，實驗準(zhǔn)確度好，但是耗費的實驗時間較長，效率不好。因而，應(yīng)選擇合適的色譜條件。